專利名稱：人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析，具體的說，是用高效液相色譜分析熊果苷中對(duì)苯二酚的含量。
背景技術(shù)：
熊果苷(p-hydroxyphenyl-β-D-glucopyranoside，arbutin)是從植物中分離得到的一種成分，其結(jié)構(gòu)為 它具有鎮(zhèn)咳、利尿、抗菌、消毒等生物活性。近年來還發(fā)現(xiàn)熊果苷能有效抑制皮膚細(xì)胞中的酪氨酸酶，從而顯著地減少皮膚中的色素沉積，可以祛除色斑和雀斑。目前，以熊果苷作為化妝品添加劑是一個(gè)新的熱點(diǎn)，但從植物中提取熊果苷工藝復(fù)雜、產(chǎn)率低、成本高。以葡萄糖和對(duì)苯二酚為原料，用人工合成的方法制得的熊果苷克服了以上缺點(diǎn)。熊果苷作為一種有效的化妝品添加劑，應(yīng)用非常廣泛，定量測(cè)定熊果苷的方法有較多報(bào)道[參見徐衛(wèi).定量測(cè)定熊果苷含量的HPLC方法[J].北京日化，1998，(1)19-22；邱東方，郭應(yīng)臣，王宏偉.反相HPLC法測(cè)定化妝品中熊果苷的含量[J].化學(xué)研究，2000，11(4)34-35]。但測(cè)定熊果苷中對(duì)苯二酚含量的方法未見報(bào)道。
酚類物質(zhì)對(duì)人體有很大的危害，由于滲透性強(qiáng)，可以通過皮膚、呼吸道粘膜、口腔等多種途徑進(jìn)入人體，并深入到內(nèi)部組織，侵犯神經(jīng)中樞，刺激骨髓，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致全身中毒和致癌，長(zhǎng)期接觸酚類物質(zhì)還會(huì)出現(xiàn)皮膚瘍癢、皮疹、貧血、記憶力減退等癥狀。國(guó)際市場(chǎng)上對(duì)熊果苷中對(duì)苯二酚的殘留量有著嚴(yán)格的限制。因此，解決人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法就顯得十分重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)易的人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色譜分析法，其特征是高效液相色譜的條件為色譜柱C18，5μm，(4.6×250mm)；柱溫30℃；流動(dòng)相甲醇/水/乙酸水溶液(體積濃度為1％)＝5∶45∶50(體積比)，或甲醇/水/高氯酸水溶液(體積濃度為0.2％)＝5∶45∶50(體積比)；流動(dòng)相流速0.8mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)287nm；進(jìn)樣量5-10μL。
本發(fā)明的高效液相色譜測(cè)定人工合成熊果苷中對(duì)苯二酚含量的方法，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適合同時(shí)測(cè)定熊果苷及其中對(duì)苯二酚和其他雜質(zhì)的含量。


圖1為人工合成的熊果苷樣品的色譜圖，其中峰1為未知雜質(zhì)峰，2為熊果苷，峰3為對(duì)苯二酚；圖2為對(duì)苯二酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖3為紫外光譜圖 3a熊果苷，3b對(duì)苯二酚。
具體實(shí)施例方式
儀器與試劑采用Waters Alliance 2695型高效液相色譜儀，配備真空脫氣機(jī)，四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，996型二極管陣列(PDA)檢測(cè)器。色譜分離系統(tǒng)的控制和記錄由Waters Millinium32色譜工作站完成。
熊果苷對(duì)照品和人工合成樣品江蘇鑫源生化科技發(fā)展有限公司提供；對(duì)苯二酚為分析純(上海聯(lián)試化工試劑有限公司提供)；甲醇為色譜純(江蘇漢邦科技有限公司提供)；冰乙酸為分析純(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司提供)；高氯酸為優(yōu)級(jí)純(天津市化學(xué)試劑三廠提供)；水為娃哈哈純凈水。
實(shí)施例1.高效液相色譜條件的選擇色譜柱Waters公司Symmetry C18，5μm，(4.6×250mm)；柱溫30℃。
流動(dòng)相的選擇考慮到熊果苷和對(duì)苯二酚在結(jié)構(gòu)上都有酚羥基，在水溶液中容易電離導(dǎo)致峰型畸變，無法分離，因此用1％的乙酸溶液或0.2％的高氯酸溶液抑制其離解，效果均比較好，峰形比較尖銳。經(jīng)過試驗(yàn)，當(dāng)V甲醇∶V水∶V1％乙酸水溶液或(V0.2％高氧酸水溶液)＝5∶45∶50時(shí)，各成分能在適宜時(shí)間內(nèi)得到清晰的分離。因此選擇流動(dòng)相為甲醇/水/乙酸水溶液(體積濃度為1％)＝5∶45∶50，或甲醇/水/高氯酸水溶液(體積濃度為0.2％)＝5∶45∶50；流速0.8mL/min。
進(jìn)樣量5-10μL。
檢測(cè)波長(zhǎng)的確定對(duì)照熊果苷和對(duì)苯二酚的紫外吸收?qǐng)D(見圖3)，考慮到待測(cè)對(duì)苯二酚的含量較低，選擇對(duì)苯二酚吸收較強(qiáng)的波長(zhǎng)287nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
實(shí)施例2.對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作準(zhǔn)確稱取對(duì)二苯酚標(biāo)準(zhǔn)品10mg于10-mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(濃度為1mg/mL)。分別精密移取儲(chǔ)備液適量用水配成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列(濃度為0.00004～0.01mg/mL)，各取10μL進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)對(duì)濃度作圖，得線性良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)為0.99992，回歸方程為A(area)＝-638.4307+1.49498E7 C。當(dāng)信噪比S/N＝3時(shí)，測(cè)得對(duì)苯二酚的最低檢測(cè)限為0.00002mg/mL。對(duì)苯二酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。
實(shí)施例3.人工合成熊果苷樣品的色譜圖在人工合成熊果苷樣品的色譜圖(見圖1)中，通過標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照可知峰2為熊果苷，峰3為對(duì)苯二酚，峰1為未知雜質(zhì)。
實(shí)施例4.人工合成熊果苷樣品中對(duì)苯二酚含量的測(cè)定準(zhǔn)確稱取五份人工合成熊果苷樣品約10mg，分別置于10-mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成五份樣品溶液。每份溶液分別取10μL各進(jìn)樣5次，單份溶液分析結(jié)果見表1。五份熊果苷樣品中對(duì)苯二酚的平均含量為0.0127％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.2％。
表1人工合成熊果苷中對(duì)苯二酚的測(cè)定結(jié)果(n＝5)樣品溶液序號(hào) 質(zhì)量百分含量 RSDNo w(％) (％)1 0.01271.12 0.01254.33 0.01261.74 0.01372.95 0.01211.8
權(quán)利要求
1.一種人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色譜分析法，其特征是高效液相色譜的條件為色譜柱C18，5μm，(4.6×250mm)；柱溫30℃；流動(dòng)相甲醇/水/乙酸水溶液(體積濃度為1％)＝5∶45∶50(體積比)，或甲醇/水/高氯酸水溶液(體積濃度為0.2％)＝5∶45∶50(體積比)；流動(dòng)相流速0.8mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)287nm；進(jìn)樣量5-10μL。
全文摘要
一種人工合成的熊果苷中對(duì)苯二酚含量的分析方法，它是高效液相色譜分析法，高效液相色譜的條件為色譜柱C
文檔編號(hào)G01N30/26GK1614414SQ20041006532
公開日2005年5月11日 申請(qǐng)日期2004年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月26日
發(fā)明者練鴻振, 韋玉娜, 李丹妮 申請(qǐng)人:南京大學(xué)