專(zhuān)利名稱：大花羅布麻葉的幾個(gè)標(biāo)識(shí)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥羅布麻有效成分的提取分離，特別是涉及到新疆羅布麻的一個(gè)資源十分豐富的品種——大花羅布麻[Poacynum Hendersonii(Hook.F.)Woodson]中有效成分的提取分離方法及結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)，其結(jié)果得到11個(gè)化合物，根據(jù)化合物量的多少以及生物活性，其中黃酮類(lèi)化合物和木脂體類(lèi)化合物可以作為大花羅布麻的標(biāo)識(shí)化合物。
背景技術(shù)：
大花羅布麻[Poacynum Hendersonii(Hook.F.)Woodson]為夾竹桃科白麻屬多年生草本植物。中國(guó)藥典收載的羅布麻Folium Apocyni Veneti為該屬植物的干燥葉，又名紅麻、澤漆麻、紅花草等，它與大花羅布麻是同科不同屬的植物。羅布麻葉作茶飲及藥用有悠久的歷史，多部醫(yī)典古籍均有記載。羅布麻具有清熱利水，平肝安神之功效，主治高血壓、氣管炎、水腫等疾病，并用其作茶飲，用于止渴、清熱解毒、降低血壓等強(qiáng)身健體之功效?，F(xiàn)代研究認(rèn)為其可預(yù)防和治療老年高血壓、感冒和氣管炎，對(duì)增強(qiáng)機(jī)體抗病能力有一定的作用，為延年益壽、養(yǎng)生之藥。
對(duì)羅布麻的化學(xué)成分研究，五十年來(lái)國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)羅布麻屬的羅布麻化學(xué)成分有數(shù)篇報(bào)導(dǎo)，其中陳妙華、劉鳳山研究最為系統(tǒng)和全面，他們從紅麻中分得三十烷醇、β-谷甾醇、槲皮素、金絲桃苷、長(zhǎng)鏈脂肪酸、羽扇豆醇、莨菪亭、異秦皮定等8個(gè)化合物(中國(guó)中藥雜志，1991，16(10)609-611)；此外，王明時(shí)等也從紅麻中分得烷醇、烷烴、中肌醇和氯化鉀等化合物(南京藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1985，16(4)35)；其余兩篇報(bào)道均屬于對(duì)氨基酸和鞣質(zhì)方面的簡(jiǎn)略分析。總之對(duì)羅布麻屬化學(xué)成分與研究較少，而對(duì)白麻屬大花羅布麻的化學(xué)成分報(bào)道則更少。最近雷震環(huán)、臺(tái)寶山、田瑞華、矢原正治和野原稔弘報(bào)道了從大葉白麻中分得的兩個(gè)木脂體成分(-)-丁香脂素(Syringaresinol)和(+)-松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷[(+)-PinoresionoLl-4-O-β-D-glucopyranoside](哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，18(1)99-100)。新疆羅布麻資源十分豐富，其野生資源就達(dá)270萬(wàn)畝，大部分分布在南疆羅布泊地區(qū)，其品種以大花羅布麻為主，所以研究和開(kāi)發(fā)大花羅布麻有廣闊的前景，本發(fā)明報(bào)告從新疆大花羅布麻中經(jīng)分離得到11個(gè)化合物，其中植物中常見(jiàn)成分有5個(gè)(化合物I-V)正十十六烷酸(Palmitic acid)，正二十六烷酸(Hexacosanoic acid)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，蔗糖(Saccharose)和2-氨基蔗糖(2-Aminosaccharose)；分離量少又暫無(wú)活性報(bào)道的化合物2個(gè)(化合物VI和VII)羽扇醇棕櫚酸酯(Lupenyl palmiate)和Δ’-異戊烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Δ’-prenyl-3-O-β-D-glucopyranoside)；有一定活性且分離量較大的化合物有4個(gè)(化合物VIII-XI)槲皮素(Quercetin)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Isoquercetin)、槲皮素-3-O-槐糖苷(Quercetin-3-O-sophorose)、丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Syringaresinol di-O-β-D-glucopyranoside，Liriodendrin)，這4個(gè)化合物中由于槲皮素廣泛存在于植物界，所以無(wú)明顯的鑒別特征意義，其余三個(gè)可作為供鑒別大花羅布麻之用的標(biāo)識(shí)化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的內(nèi)容是研究白麻屬植物大花羅布麻的化學(xué)成分，尋找活性單體化合物。
1.以新疆大花羅布麻葉為原料，用常規(guī)方法提取，硅膠色譜法分離，結(jié)果得到11個(gè)單體化合物，經(jīng)理化常數(shù)和光譜數(shù)據(jù)測(cè)定確定了它們的結(jié)構(gòu)。其中化合物VI-XI的結(jié)構(gòu)式附后，光譜數(shù)據(jù)見(jiàn)附表。
2.以上11個(gè)化合物中的烷酸、甾醇以及槲皮素等若干化合物，在羅布麻屬植物中曾有報(bào)道，但在白麻屬大花羅布麻中均屬首次報(bào)道；其中羅布麻甲素、槲皮素-3-O-槐糖苷和丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等三個(gè)化合物可作為鑒別大花羅布麻之用的標(biāo)識(shí)化合物，本文報(bào)告的丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，結(jié)構(gòu)屬于雙糖苷，不同于哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)報(bào)道的單糖苷，其分子量和光譜數(shù)據(jù)均不同。
具體實(shí)施例方式1、提取分離大花羅布麻干燥葉2.2kg用80％乙醇回流提取，減壓濃縮至浸膏狀，以適量水混懸，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶媒得萃取物浸膏分別為84g、4g、57g和219g。
石油醚萃取物用硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(1∶0→0∶1)得化合物羽扇醇棕櫚酸酯(104mg)；乙酸乙酯萃取物用硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫(1∶0→0∶1)得化合物槲皮素(126mg)，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2.5g)，槲皮素-3-O-槐糖苷(209mg)；正丁醇萃取物用硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫(1∶0→0∶1)得化合物丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(307mg)，Δ’-異戊烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(155mg)。
2、結(jié)構(gòu)鑒定主要利用光譜，包括紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁共振譜(1HNMR、13CNMR、2DNMR)分析，鑒定其結(jié)構(gòu)。
運(yùn)用2DNMR技術(shù)，尤其是HMQC和HMBC譜，解決了取代基的位置和糖的連接位置，結(jié)合高分辨質(zhì)譜，對(duì)它們的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確證。
化合物VI-XI的結(jié)構(gòu)式化合物VI羽扇醇棕櫚酸酯(Lupenyl palmiate) 化合物VIIΔ’-異戊烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Δ’-prenyl-3-O-β-D-glucopyranoside) 化合物VIII槲皮素(Quercetin)
化合物IX槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(羅布麻甲素，Isoquercetin) 化合物X槲皮素-3-O-槐糖苷(Quercetin-3-O-sophorose) 化合物XI丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Syringaresinol di-O-β-D-glucopyranoside，Liriodendrin)
表1化合物VI-XI的理化常數(shù)及主要光譜數(shù)據(jù)化合物VI分子式為C46H80O2，淺黃色無(wú)定形粉末，薄層噴硫酸乙醇溶液加熱顯紅色。Liebermann-Buerchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，提示為三萜類(lèi)化合物，EI-MS m/z665(M++H)，650，409，218，203，189，109；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表2。
化合物VII分子式為C11H20O6，白色粉末結(jié)晶，IR(KBr)νmaxcm-13391(OH)，2980(CH)，2934(CH)，1642(νC＝C)，1380和1364(偕二甲基)，1069(νC-O)，1003(δCH(C＝C))，923(δCH(C＝C))；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表3。
化合物VIII分子式為C15H10O7，黃色顆粒結(jié)晶，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紅色，鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng)有黃色且不消退，表明該化合物為3-OH黃酮類(lèi)化合物，EI-MS m/z302(M+)，301(M+-H，base)，274(M+-CO)，153(A1++H)，137(B2+)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表4和表5。
化合物IX分子式為C21H20O12，黃色顆粒結(jié)晶，與ZrO-Cl2試劑作用呈黃色，加入檸檬酸甲醇溶液則顏色褪去，再加入2％鹽酸加熱后顏色復(fù)出，表明該化合物為3-羥基苷化的黃酮醇，EI-MS m/z465(M++H)，302(M++H-162)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表4和表5。
化合物X分子式為C27H30O17，黃色顆粒結(jié)晶，與ZrO-Cl2試劑作用呈黃色，加入檸檬酸甲醇溶液則顏色褪去，再加入2％鹽酸加熱后顏色復(fù)出，表明該化合物為3-羥基苷化的黃酮醇，EI-MS m/z627(M++H)，465(M++H-162)，303(M++H-162-162)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表4和表5。
化合物XI分子式為C34H46O18，白色無(wú)定形粉末，EI-MS m/z765(M++Na)，603(M++Na-162)，441(M++Na-162-162)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)、13CNMR(100MHz，DMSO-d6)見(jiàn)表6。
化合物I-V波譜數(shù)據(jù)略。
表2化合物VI的NMR化學(xué)位移值(δ，溶劑為CDCl3)

1’-16’號(hào)碳原子為羧基旁脂肪長(zhǎng)鏈，1’號(hào)為羧基旁第一個(gè)碳，16’號(hào)為末端甲基。
表3化合物VII的NMR化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMSO-d6)

表4化合物VIII-X的1HNMR化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMSO-d6)

表5化合物VIII-X的13CNMR化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMSO-d6)

表6化合物XI的NMR化學(xué)位移值(δ，溶劑為DMSO-d6)

權(quán)利要求
1.羅布麻甲素，又名異槲皮苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷，它不僅是白麻屬大花羅布麻的主要活性成分(HPLC法測(cè)定葉中的含量約為0.2％)，也是羅布麻屬植物紅麻的主要活性成分，主要功能是降壓、降血脂。提取方法可采用乙醇提取，提取濃縮物加水混懸后以乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)硅膠色譜分離而獲得，它可作為大花羅布麻或羅布麻薄層鑒定時(shí)的對(duì)照品使用，也可用于大花羅布麻或羅布麻保健品、藥品質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。
2.木脂體成分——丁香樹(shù)脂醇-雙-O-β-D-葡萄糖苷，是大花羅布麻中的特征性成分，HPLC法測(cè)定葉中的含量約為0.05％，提取時(shí)它存在于經(jīng)乙酸乙酯萃取后的水層中，再經(jīng)正丁醇萃取和硅膠色譜分離而獲得。它具有抗炎、抗多種腫瘤細(xì)胞活性的作用，同時(shí)結(jié)構(gòu)也十分類(lèi)似于中藥杜仲中降壓活性成分——松脂醇-雙-O-β-D-葡萄糖苷?？晒┐蠡_布麻藥材鑒定或保健品、藥品的定性定量時(shí)的對(duì)照品使用。
3.其余成分可供藥材基地申請(qǐng)GAP時(shí)藥材指紋圖譜的定性鑒別之用，對(duì)制劑指紋圖譜的定性識(shí)別也有指導(dǎo)意義。
全文摘要
本發(fā)明以新疆大花羅布麻葉(Poacynum hendersonii(Hook.F.)Woodson)為原料，按常規(guī)方法提取，硅膠色譜分離，結(jié)果得到11個(gè)單體化合物，經(jīng)理化常數(shù)和光譜數(shù)據(jù)測(cè)定研究了它們的結(jié)構(gòu)，其中植物中常見(jiàn)成分5個(gè)；分離量少又暫無(wú)活性報(bào)道的化合物2個(gè)；有一定活性且分離量大的化合物有4個(gè)槲皮素、羅布麻甲素、槲皮素－3－O－槐糖苷和丁香樹(shù)脂醇－雙－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。羅布麻甲素是大花羅布麻葉中的主要成分，HPLC法測(cè)定葉中含量約為0.2％，它是降壓和降血脂的主要成分；本文報(bào)告的一個(gè)木脂體化合物，具有抗炎、抗多種腫瘤細(xì)胞活性的作用，含量約為0.05％，其結(jié)構(gòu)類(lèi)似于中藥杜仲中的降壓活性成分——松脂醇－雙－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。這兩個(gè)化合物不僅可作為藥材的定性定量的標(biāo)識(shí)化合物，也可作為大花羅布麻保健或藥品制劑開(kāi)發(fā)中的功能指標(biāo)成分。
文檔編號(hào)G01N30/02GK1749263SQ20041007991
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2004年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月16日
發(fā)明者堵年生, 張?jiān)品? 馬成, 支玲 申請(qǐng)人:新疆醫(yī)科大學(xué)