專利名稱：：一種有指紋圖譜的羅布麻葉提取物及其制備和分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種自中草藥中提取的活性物質(zhì)及其提取方法，特別涉及主要含有黃酮類活性物質(zhì)的提取物及其制備方法，確切地說是一種提取自羅布麻屬植物羅布麻葉的一種有指紋圖譜的提取物及其制備和分析方法。二
背景技術(shù)：
：我國羅布麻葉資源有三種羅布麻屬植物羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)又稱紅麻、白麻屬植物大花羅布麻葉[Poacynumhendersonni(Hook.f.)Wodson]和白麻屬植物紫斑羅布麻葉[Poacynumpictum(Schrenk)Baill]，統(tǒng)稱為羅布麻葉，因?qū)俨煌瑢僦参铮潼S酮成分也有異，相互之間并無可比性。據(jù)文獻報道羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)含有黃酮及其糖苷、三萜及甾醇、木脂素、香豆素、有機酸及酯、環(huán)醇、花色素、鞣質(zhì)-、糖類和氨基酸等10余類成分。藥理研究表明黃酮類成分是其中的主要活性成分類別之一，化學研究表明羅布麻葉黃酮類成分以金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、6〃-0-乙?；鸾z桃苷、黃芪苷、6〃-0-乙?；愰纹ぼ?、6〃-0-乙?；S芪苷、、槲皮素和山奈酚等成分含量較高。就同一種羅布麻葉而言，不同的提取方法得到的提取物由于所含的黃酮類化合物種類不同、含量也不同，其藥理、藥性存在很大差異。這就是說，不同提取方法得到的提取物都是不同的組合物，或者說都是一種新的組合物，雖然都統(tǒng)稱提取物。目前提取羅布麻葉活性成分有以下幾種方法1、先用水或醇提取，將回收溶劑后的提取物混懸于水中，分別用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇提取，劃分成幾個提取部分。再用硅膠柱或葡聚糖凝膠柱層析、分離成單組分物質(zhì)。這種方法適用于實驗室對單一黃酮成分的研究，也不適合總黃酮的制備。2、申請?zhí)?2110431.X公開了一種"羅布麻有效部位的提取分離方法"，羅布麻提取液經(jīng)處理后通過D101,HPD100,HPD600大孔吸附樹脂柱，先采用水洗脫至水洗脫液無色，并用20_39%的乙醇水溶液洗脫，再用40—70%的乙醇水溶液洗脫。收集40—70%的洗脫液濃縮后形成的浸膏即為有效部位，總黃酮含量為50-60%，該技術(shù)方案的缺點是未能明確所提供的有效部位由哪些黃酮成分組成，雖提供有效部位總黃酮含量為50-60%，但未明確含量測定方法及對照品，眾所周知，同一種樣品不同的測定方法或不同的對照品所得到的含量結(jié)果是不同的，比如NaN02-Al(N03)3-NaOH法測定的含量明顯高于A1C13法，對照品蘆丁測定的含量明顯高于金絲桃苷對照品，因羅布麻屬植物羅布麻葉(新疆紅麻除外)蘆丁含量為0.07%,金絲桃苷含量為0.35%,因此羅布麻屬植物羅布麻葉及有效部位中總黃酮含量只能采用AlCl3法，對照品只能采用金絲桃苷。3、申請?zhí)?00410064551.0公開了"一種羅布麻提取物及其提取方法"，取羅布麻葉300g，用10倍量40%乙醇水回流提取3次，每次O.5hx，合并提取液，室溫下靜置過夜、過濾，去沉淀，濾液減壓濃縮至總體積900mL，濃縮液加1X殼聚糖的乙酸溶液180mL，攪拌2min，室溫靜置2—4hr，抽濾，棄去殘渣，上清液過處理好的聚酰胺樹脂柱，隨后以600mL水，用鹽酸調(diào)pH為3后，進行洗脫除雜，然后用70X乙醇水溶液洗脫至無A1C13反應(yīng)，收集70%乙醇水溶液并減壓濃縮至近干，水浴蒸干后，8(TC烤箱干燥，得黃棕色至黃色粉末，為羅布麻高純提取物，出膏率為l.8%。羅布麻高純提取物的金絲桃苷含量為17.8%、總黃酮(以金絲桃苷計)含量為42.8%、水解后的槲皮素含量為36.7%。該技術(shù)方案所存在的問題是雖然提供了金絲桃苷含量、總黃酮含量、水解后的槲皮素含量，但不能明確提取物由哪些黃酮成分組成，不能完整地反映該提取物質(zhì)量，總黃酮(以金絲桃苷計)含量為42.8%,未達到五類原料藥標準總黃酮含量為50%的要求。4、申請?zhí)?00510123187.5的公開了一種"羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、其制備及應(yīng)用"。其制備方法是濾液通過聚酰胺柱層析，首先用水沖洗8—12個柱體積，再用不同濃度醇水溶液分段洗脫、分段收集、濃縮的方法，該法雖能得高純度總黃酮，但因聚酰胺柱每次層析后均需要堿-酸再生，故,該法成本高,工時長,不適用于制備口服五類原料藥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對上述現(xiàn)有技術(shù)不足，旨在提供一種有固定組分即指紋圖譜的羅布麻葉提取物，所要解決的技術(shù)問題是構(gòu)建相應(yīng)的制備方法和分析方法。本發(fā)明稱的羅布麻葉是指羅布麻屬植物羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)。所述的羅布麻葉提取物就是自羅布麻屬植物羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)中提取得到的提取物。本發(fā)明所稱的有指紋圖譜的羅布麻葉提取物是指該提取物中含有總黃酮指紋圖譜，其特征是總黃酮含量以金絲桃苷計為50-60%(重量百分比，下同)；其中金絲桃苷含量為10-17%，異槲皮苷含量為10-16%，總黃酮苷元的含量以酸水解后測定槲皮素和山奈酚的含量計分別為25-35%和3.5-4.5%;原花色素含量以氯化花色素計為15-25%。所述的總黃酮指紋圖譜除1金絲桃苷、2異槲皮苷外，還有3三葉豆苷、46〃-O-乙?；鸾z桃苷、5黃芪苷、66"-O-乙?；愰纹ぼ?、76〃-O-乙酰基黃芪苷、8未知峰、9槲皮素、10山奈酚，如圖l所示。上述提取物的制備方法，是以干燥的羅布麻葉粗粉為原料，包括提取、濃縮、分離和精制，所述的提取是粗粉用至少8倍量(重量/體積w/v)70-80%(體積百分比v/v，下同)乙醇溶液回流提取至少兩次，得到乙醇提取液，乙醇提取液減壓濃縮至1/4-1/6體積時，冷卻、靜置，過濾除去沉淀，得到濃縮液，濃縮液用弱極性或中等極性大孔樹脂吸附分離，依次用水和20%乙醇洗脫后再用50-75%乙醇洗脫，收集50-75%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥后得到提取物粗品；所述的精制是對提取物粗品進行精制，這就是提取物粗品用至少10倍量(w/v)乙醇與醋酸乙酯混合溶劑回流提取至少兩次，乙醇與醋酸乙酯的體積比為1:5-10，過濾，得到精提液，精提液經(jīng)減壓脫溶、干燥后得到總黃酮含量(以金絲桃苷計)為50-60%(重量百分比w/w)的羅布麻葉提取物。所述的弱極性或中等極性大孔樹脂選自聚苯乙烯類或交聯(lián)聚丙烯腈類制備的大孔樹脂，如型號為AB-8型或DM301型等大孔樹脂。精制時優(yōu)選乙醇與醋酸乙酯體積比為1:6-8的混合溶劑，進一步優(yōu)選體積比l:7;或者采用甲醇與醋酸乙酯體積比為1:5-8的混合溶劑。具體制備過程為a、將干燥的羅布麻葉粉碎成生藥粗粉，用8-10倍量(g/ml)的75W乙醇水溶液加熱回流提取1-2小時，共提取2-3次；b、將提取液在低于60"C的條件下減壓濃縮至l/5體積，室溫下靜置12小時過濾；c、濾液通過弱極性或中極性大孔吸附樹脂柱層析，大孔吸附樹脂用量為生藥的2.5倍量圃優(yōu)選AB-8，DM301等弱極性和中極性大孔吸附樹脂；d、首先用水沖洗大孔吸附樹脂8—10個柱體積洗去樹脂中殘留的溶液及其他雜質(zhì)，用20%乙醇洗脫至洗脫液與FeCl3無墨綠色反應(yīng)以洗去鞣質(zhì)，再用50-75%乙醇或50-75%甲醇洗脫2.5個或3個柱體積，收集0.5-2.5或0.5-3個柱體積的50_75%乙醇或50-75%甲醇洗脫液；將該洗脫液在低于60°<:條件下減壓濃縮，真空干燥得按重量百分比總黃酮含量達到40%一44%羅布麻葉提取物粗品；e、提取物粗品的精制，用10-20倍量(g/ml)的醋酸乙酯乙醇(V/V)(5:1-10:1)或醋酸乙酯甲醇(V/V)(5:1-10:1).優(yōu)選醋酸乙酯乙醇(V/V)(6:1-8:1)，回流提取2-3次，每次1-2小時，過濾,合并提取液,于6(TC減壓回收溶劑，8(TC減壓干燥得按重量百分比總黃酮含量達到50%—60%的羅布麻葉提取物。提取物中各組分的分析方法如下1、總黃酮含量的分析測定是以金絲桃苷為對照品，采用A1Q3-HAc-NaAc絡(luò)合比色法進行測定。2、總黃酮中主要成分金絲桃苷、異槲皮苷含量的分析測定，以金絲桃苷和異槲皮苷為對照品，采用高效液相色譜法測定，色譜分析條件為(1)色譜柱采用ODS-C18色譜柱150mmx6mm，5um;(2)流動相水-乙腈-磷酸(825:175:1);(3)檢測波長為365nm;(4)柱溫為27。C;(5)流速1.0ml/min。3、總黃酮苷元含量測定,采用高效液相色譜法測定水解后槲皮素和山奈酚含量取干燥后的提取物約0.05g，精密稱定，用80X甲醇溶解并定容至25ml，取2ml用80X甲醇稀釋至10ml，加入鹽酸lml，置卯'C水浴中加熱回流60分鐘，取出，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。用槲皮素和山奈酚為對照品，HPLC法測定,色譜分析條件為(l)色譜柱采用0DS-C18柱(島津150X6.Omm);(2)流動相甲醇_0.4%(體積百分濃度)磷酸溶液(體積比45:40);(3)波長360nm;(4)柱溫30°C;(5)流速1.Oml/min。4、原花色素含量，采用正丁醇一鹽酸法測定取提取物約O.lg，精密稱定，用70%乙醇40ml溶解,加鹽酸10ml和水5ml,置水浴中加熱回流80分鐘，取出，冷后，過濾,殘留物用70%乙醇洗脫至無色，濾液和洗液合并，準確加70X乙醇至250m1，，取該溶液50ml,置圓底燒瓶中，減壓濃縮至約3ml，，濃縮液移入分液漏斗，園底燒瓶分別用水10ml和水5ml洗兩次，洗液移入分液漏斗，合并的溶液，用15ml正丁醇卒取，共萃取3次，合并正丁醇萃取液，準確加正丁醇至100m1,，用分光光度計進行測定，在545nm測定正丁醇液的吸光度。用Ax500/75xm公式，計算原花色素(以氯化花色素計)的百分含量。式中A:樣品正丁醇液在545nm處的吸光度；75:氯化花色素在545nm處的吸收系數(shù)；m:樣品稱取量(g)。5、采用以下色譜分析條件測定羅布麻葉總黃酮的指紋圖譜，如圖1所示。(1)色譜柱采用0DS-C18色譜柱150mmx4.6mm，5um;(2)流動相采用線性梯度洗脫，其中A相為乙腈一甲醇V/V(10:1)，B相為O.4%磷酸溶液.流動相梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(3)檢測波長為360nm:(4)柱溫為27。C;(5)流速1.0ml/min。與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在1、本發(fā)明采用弱極性或中極性的大孔吸附樹脂先從羅布麻屬植物羅布麻葉中提取富集總黃酮粗品，再用醋酸乙酯與乙醇按(5:1-10:1)的量配比進行精制，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)?？傸S酮含量以金絲桃苷計》50%，符合口服五類原料藥的標準。2、本發(fā)明采用高效液相色譜法，可以對金絲桃苷、異槲皮苷的黃酮成分進行明確定性和定量,也可以對水解后的總黃酮苷元槲皮素和山奈酚進行明確定性和定量，并建立了原花色素含量測定方法，另外還建立了羅布麻葉提取物中總黃酮指紋圖譜。四圖1為本發(fā)明方法制備的羅布麻屬植物羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)提取物中總黃酮HPLC圖譜，也是總黃酮的指紋圖譜，圖中l(wèi)為金絲桃苷、2為異槲皮苷、3為三葉豆苷、4為6"-O-乙?；鸾z桃苷、5為黃芪苷、6為6"-O-乙酰基異槲皮苷、7為6"-O-乙酰基黃芪苷、8為未知峰、9為槲皮素、IO為山奈酚。該圖譜能對羅布麻葉總黃酮組成成分:金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、6"-O-乙?；鸾z桃苷、黃芪苷、6"-O-乙?；愰纹ぼ?、6"-O-乙?；S芪苷、槲皮素、山奈酚黃酮成分進行明確定性和定量。五具體實施方式下面通過具體實施方式對本發(fā)明方法作進一步說明。(一)關(guān)于羅布麻屬植物羅布麻葉提取物的制備實施例h取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉100g，加800ml濃度為75%乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，將提取液在低于60"C的條件下減壓濃縮至1/5體積，室溫下靜置12小時過濾；濾液以1柱體積(BV)/h流速通過裝有250gAB-8弱極性大孔吸附樹脂層析柱，首先用水以2BV/h流速沖洗8個柱體積，用20%乙醇洗脫至與FeCl3無墨綠色反應(yīng)，再用50%乙醇以lBV/h流速洗脫2.5個柱體積，收集0.5-2.5柱體積的50%乙醇洗脫液；將該洗脫液在低于60。C條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉提取物粗品，以金絲桃苷計粗品總黃酮含量為42.0%。提取物粗品的精制取粗品lg，加10ml按體積比的醋酸乙酯乙醇5:l回流提取2次，每次2小時，過濾，合并提取液，于6(TC減壓回收溶劑，8(TC減壓干燥得羅布麻葉提取物，收得率為2.1%,本品總黃酮含量以金絲桃苷計為50.0%。外觀黃棕色粉末。實施例2:取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉100g，加1000ml濃度為75%乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，將提取液在低于60°C的條件下減壓濃縮至1/5體積，室溫下靜置12小時過濾；濾液以lBV/h流速通過裝有250gAB-8弱極性大孔吸附樹脂層析柱，，首先用水以2BV/h流速沖洗10個柱體積，用20%乙醇洗脫至與FeCl3無墨綠色反應(yīng)，再用50%乙醇以lBV/h流速洗脫2.5個柱體積，收集0.5-2.5柱體積的50%乙醇洗脫液；將該洗脫液在低于60"C條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉提取物粗品，以金絲桃苷計的粗品中總黃酮含量為44.0%。提取物粗品的精制取提取物粗品lg，加10ml按體積比醋酸乙酯乙醇為6:1回流提取3次，每次2小時，過濾,合并提取液,于6(TC減壓回收溶劑，80'C減壓干燥得羅布麻葉提取物，收得率為2.0%，本品以金絲桃苷計總黃酮含量為56.0%。外觀黃棕色粉末。實施例3:取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉100g，加800ml濃度為75%的乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，將提取液在低于60。C的條件下減壓濃縮至l/5體積，室溫下靜置12小時過濾；濾液以lBV/h流速通過裝有250gAB-8弱極性大孔吸附樹脂層析柱，，首先用水以2BV/h流速沖洗8個柱體積，用20%乙醇洗脫至與FeCl3無墨綠色反應(yīng),再用75《乙醇以lBV/h流速洗脫3個柱體積，收集0.5-3柱體積的75%乙醇洗脫液；將該洗脫液在低于60-C條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉提取物粗品，以金絲桃苷計提取物粗品中總黃酮含量為42.0%。提取物粗品的精制:取提取物粗品lg，加10ml按體積比醋酸乙酯乙醇為7:1回流提取2次，每次2小時，過濾，合并提取液，于6(TC減壓回收溶劑，8(TC減壓干燥得羅布麻葉提取物，收得率為2.10%，本品以金絲桃苷計總黃酮含量為51.0%。外觀黃棕色粉末。實施例4:取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉100g，加1000ml濃度為75%的乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，將提取液在低于60°0的條件下減壓濃縮至1/5體積，室溫下靜置12小時過濾；濾液以lBV/h流速通過裝有250gAB-8弱極性大孔吸附樹脂層析柱，，首先用水以2BV/h流速沖洗10個柱體積，用20%乙醇洗脫至與FeCl3無墨綠色反應(yīng)，再用75%乙醇以lBV/h流速洗脫3個柱體積，收集3個柱體積的75%乙醇洗脫液；將該洗脫液在低于60"C條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉提取物粗品，以金絲桃苷計粗品中總黃酮含量為41.0%。提取物粗品的精制取提取物粗品lg，加20ml按體積比醋酸乙酯乙醇為8:1回流提取3次，每次1.5小時，過濾，合并提取液，于6(TC減壓回收溶劑，8(TC減壓干燥得羅布麻葉提取物，收得率為1.90%，本品以金絲桃苷計總黃酮含量為55.0%。外觀黃棕色粉末。實施例5:取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉100g，加1000ml濃度為75%的乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，將提取液在低于6(TC的條件下減壓濃縮至1/5體積，室溫下靜置12小時過濾；濾液以1BV/h流速通過裝有250gDM301中極性大孔吸附樹脂層析柱，首先用水以2BV/h流速沖洗8個柱體積，用20%乙醇洗脫至與FeCl3無墨綠色反應(yīng)，再用75呢乙醇以lBV/h流速洗脫2.5個柱體積，收集0.5-2.5柱體積的75%乙醇洗脫液；將該洗脫液在低于60"C條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉提取物粗品，以金絲桃苷計粗品中總黃酮含量為41.0%。提取物粗品的精制取提取物粗品lg，加lOml按體積比為醋酸乙酯乙醇為6:1回流提取2次，每次2小時，過濾，合并提取液，于6(TC減壓回收溶劑，8CTC減壓干燥得羅布麻葉提取物，收得率為1.92%，本品以金絲桃苷計總黃酮含量為51.0%。外觀黃棕色粉末。(二)、關(guān)于羅布麻屬植物羅布麻葉提取物中總黃酮、水解后的總黃酮苷元槲皮素和山奈酚、主要組成成分金絲桃苷、異槲皮苷、原花色素的含量測定及總黃酮的指紋圖譜測定1、羅布麻葉提取物干燥后，總黃酮含量以金絲桃苷為對照品,采用A1C13-HAc-NaAc絡(luò)合比色法測定，其總黃酮含量見表l2、總黃酮苷元含量測定,釆用高效液相色譜法測定水解后槲皮素和山奈酚含量取干燥后的羅布麻葉提取物約0.05g，精密稱定，用80%甲醇溶解并定容至25ml，取2ml用80%甲醇稀釋至10ml，加入鹽酸lml，置卯'C水浴中加熱回流60分鐘，取出，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。用槲皮素和山奈酚為對照品，HPLC法測定，其含量見表l,色譜分析條件為色譜柱采用0DS-C18柱(島津150X6.Omm);流動相甲醇一0.4%磷酸溶液(45:40);檢測波長360nm;柱溫30。C;流速l.Oml/min。3、羅布麻葉總黃酮干燥后，主要組成成分:金絲桃苷、異槲皮苷均采用高效液相色譜法測定,其含量見表1,色譜分析條件為-色譜柱采用0DS-C18色譜柱150mmx6mm，5um;流動相水-乙腈-磷酸(825:175:l);檢測波長為365nm;柱溫為27'C;流速l.Oml/min。4、原總花色素含量，采用正丁醇一鹽酸法測定取干燥后的羅布麻葉提取物約O.lg,精密稱定，用70%乙醇40ml溶解,加鹽酸10ml和水5ml，置水浴中加熱回流80分鐘，取出，冷后，過濾,殘留物用70%乙醇洗脫至無色，濾液和洗液合并，準確加70X乙醇至250m1，，取該溶液50ml，置圓底燒瓶中，減壓濃縮至約3ml,,濃縮液移入分液漏斗，園底燒瓶分別用水10ml和水5ml洗兩次，洗液移入分液漏斗，合并的溶液，用15ml正丁醇卒取，共萃取3次，合并正丁醇萃取液，準確加正丁醇至100ml，在545nm測定正丁醇液的吸光度。用Ax500/75xm公式,計算原花色素(以氯化花色素計)的百分含量，其含量見表1。表1為羅布麻葉提取物中的總黃酮、水解后總黃酮苷元、金絲桃苷、異槲皮苷和原花色素的含量<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>5、采用以下色譜分析條件測定羅布麻葉總黃酮的指紋圖譜色譜柱采用0DS-C18色譜柱150mmx4.6mm，5um;流動相采用線性梯度洗脫，其中A相為乙腈一甲醇(10:l)，B相為O.4%磷酸溶液.流動相梯度；時間(min)A(%)B(%)0-32168432-35277335-52277352-53168453-601684檢測波長為360nm、柱溫為27'C、流速l.Oml/min。圖1所示為本實施例方法所獲得的羅布麻葉總黃酮的指紋圖譜圖1中，1為金絲桃苷、2為異槲皮苷、3為三葉豆苷、4為6"-O-乙?；鸾z桃苷、5為黃芪苷、6為6"-O-乙?；愰纹ぼ?、7為6"-O-乙?；S芪苷、8為未知峰、9為槲皮素、IO為山奈酚。權(quán)利要求1、一種有指紋圖譜的羅布葉提取物，是自羅布麻屬羅布麻葉(ApocynumvenetumL.)中提取的提取物，其特征在于(1)總黃酮含量以金絲桃苷計為50-60wt％，其中金絲桃苷含量為10-17wt％，異槲皮苷含量為10-16wt％；(2)總黃酮苷元含量以酸水解后的槲皮素和山奈酚含量計，分別為25-35wt％和3.5-4.5wt％；(3)原花色素含量以氯化花色素含量計為15-25wt％；(4)總黃酮指紋圖譜1中，1金絲桃苷、2異槲皮苷、3三葉豆苷、46″-O-乙?；鸾z桃苷、5黃芪苷、66″-O-乙?；愰纹ぼ?、76″-O-乙?；S芪苷、8未知峰、9槲皮素、10山奈酚。2、由權(quán)利要求1所述的提取物的制備方法，以羅布麻屬羅布葉(ApocynumvenetumL.)粗粉為原料，包括提取、濃縮、分離和精制，其特征在于所述的提取是原料粗粉用至少8倍量(w/v)70-80v/vM乙醇回流提取至少兩次，得到乙醇提取液，乙醇提取液減壓濃縮至1/4-1/6體積時冷卻、靜置、分離得到濃縮液，濃縮液用弱極性或中等極性大孔樹脂吸附分離，依次用水和20v/W乙醇洗脫后再用50-75v/vy。乙醇洗脫，收集50-75v/4乙醇洗脫液，減壓脫溶、干燥后得到提取物粗品；所述精制是提取物粗品用至少10倍量(w/v)乙醇與醋酸乙酯混合溶劑提取至少兩次，乙醇與醋酸乙酯的體積比l:5-10，分離得到精提液，精提液經(jīng)減壓脫溶、干燥后得到以金絲桃苷計的總黃酮量為50-60wt免的提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的弱極性或中等極性大孔樹脂選自聚苯乙烯或交聯(lián)聚丙烯腈制備的大孔樹脂。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述大孔樹脂選自AB-8型或DM301型大孔樹脂。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于混合溶劑乙醇與醋酸乙酯的體積比為1:6-8。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于:混合溶劑乙醇與醋酸乙酯的體積比為1:7。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于混合溶劑為甲醇與乙酸乙酯混合溶劑，甲醇與乙酸乙酯體積比為1:5-8,8、由權(quán)利要求1所述的提取物中所含的原花色素分析方法，使用分光光度計法，其特征在于采用鹽酸水解一正丁醇萃取法處理后測定萃取液吸光度，具體方法是取提取物O.lg，用70X乙醇40ml溶解，加鹽酸10ml和水5ml，置水浴中加熱回流80分鐘，取出冷卻后過濾，殘留物用70%乙醇洗脫至無色，濾液和洗液合并，加70%乙醇至250ml，取該溶液50ml，置圓底燒瓶中，減壓濃縮至3ml，濃縮液移入分液漏斗，圓底燒瓶分別用水10ml和水5ml洗兩次，洗液移入分液漏斗，合并的溶液用15ml正丁醇卒取，共卒取3次，合并正丁醇萃取液，加正丁醇至100ml，在545nm測定正丁醇液的吸光度；用Ax500/75xm公式計算獲得以氯化花色素計的原花色素百分含量，式中A:樣品正丁醇液在545nm處的吸光度，75:氯化花色素在545nm處的吸收系數(shù)，m:樣品稱取量(g)。全文摘要一種有指紋圖譜的羅布麻葉提取物，其總黃酮含量以金絲桃苷計為50-60％，其中含金絲桃苷含量為10-17％，異槲皮苷含量為10-16％，水解后異槲皮苷和山奈酚含量分別為25-35％、3.5-4.5％，原花色素含量為15-25％，且有確定的總黃酮指紋圖譜。本制備方法采用弱極性或中等極性大孔吸附樹脂自羅布麻葉提取液的濃縮液中制備提取物粗品，粗品中總黃酮含量40-44％，再用乙醇和醋酸乙酯混合溶劑精制得到有確定指紋圖譜的提取物，并構(gòu)建了相應(yīng)的分析方法，特別是原花色素含量測定的方法。本提取物符合口服五類原料藥的標準要求，且制備方法操作簡單，易于工業(yè)化。文檔編號A61K36/24GK101357147SQ200810124729公開日2009年2月4日申請日期2008年8月29日優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日發(fā)明者琴光,周亞球,杜安全,王先榮,陳光宗申請人:周亞球;王先榮