專利名稱：一種尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬醫(yī)療器械領(lǐng)域，涉及一種尿液檢驗(yàn)裝置，具體涉及一種尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置。
技術(shù)背景臨床尿液檢驗(yàn)中尿液沉渣分析是指在尿中檢出管型、各種病理意義的顆粒，如細(xì)胞、細(xì)菌，結(jié)晶、精子、細(xì)菌(霉菌)等有形成分的檢查，可用于泌尿系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷、預(yù)后判斷以及藥物治療反應(yīng)的監(jiān)測(cè)。目前臨床上應(yīng)用于尿液中有形成分的計(jì)數(shù)方法主要有，基于流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板兩種定量分析方法。前者由于尿沉渣成分過(guò)于復(fù)雜，作熒光染色后，其各細(xì)胞組份的染色特征易受多種因素干擾而嚴(yán)重影響自動(dòng)計(jì)數(shù)系統(tǒng)的精確度，與臨床檢測(cè)實(shí)際符合率低于70％，而且不能分辨病理性管型和異常細(xì)胞，加之設(shè)備價(jià)格昂貴，技術(shù)復(fù)雜，難以普及，仍屬一種臨床過(guò)篩檢查。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是在玻璃片上對(duì)濕片進(jìn)行直接觀察計(jì)數(shù)。其主要技術(shù)缺陷是①檢測(cè)尿液體積不等，每次尿樣過(guò)小，對(duì)有形成分分布不均無(wú)校正措施，計(jì)數(shù)視野的選擇具有隨意性；②不適宜染色；③原始樣本資料無(wú)法保存；④不能同時(shí)進(jìn)行定性和定量的精確分析，因此其準(zhǔn)確性和重復(fù)性均差而難以標(biāo)準(zhǔn)化。

發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的目的是為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種符合國(guó)際和國(guó)內(nèi)尿液檢查標(biāo)準(zhǔn)化，能進(jìn)行組織化學(xué)染色，同時(shí)定性和定量的尿沉渣檢驗(yàn)裝置，具體涉及一種尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置。
本實(shí)用新型通過(guò)下述技術(shù)方案施行。
本實(shí)用新型由玻璃載物染色板1和計(jì)數(shù)定標(biāo)板6兩部分組成，其中載物染色板和定標(biāo)板相偶合。所述玻璃載物染色板平面上設(shè)有圓形尿樣本染色計(jì)數(shù)池2，內(nèi)經(jīng)為8mm～12mm，外經(jīng)8.1mm～12.2mm，池高0.10mm～0.25mm，底面積為50.26mm2～113.10mm2，池壁5圓周為彩色(紅色或藍(lán)色)，計(jì)數(shù)池版面標(biāo)識(shí)4為A，B，尿樣計(jì)數(shù)池底部3用多聚賴氨酸和血清(10∶1)進(jìn)行防脫片處理；計(jì)數(shù)定標(biāo)板上設(shè)有圓形定標(biāo)區(qū)7，與載物板樣本計(jì)數(shù)池大小相同。定標(biāo)區(qū)等分成大格扇形定標(biāo)尺8，其中各部分劃分成正方形小格為小方格定標(biāo)尺9，小格面積為0.1 ×0.1mm2。載物染色板和計(jì)數(shù)定標(biāo)板之間置放蓋玻片10。
采用本實(shí)用新型進(jìn)行尿樣染色定量計(jì)數(shù)，可按下述方法和步驟，①上樣準(zhǔn)確吸取新鮮尿沉渣50μl～150μl分別滴入樣本計(jì)數(shù)池中，室溫干燥。尿沉渣充分混勻。
②樣本固定根據(jù)各種染色方法選擇不同的固定液對(duì)計(jì)數(shù)池底部的樣本進(jìn)行固定。
③染色常規(guī)沉渣細(xì)胞定性和定量計(jì)數(shù)采用巴氏(Papanicolaou)染色，對(duì)于特殊檢查要求可給予相應(yīng)的特殊染色，如免疫酶標(biāo)等。染色完畢用中性樹膠蓋玻片封片待檢。
④顯微鏡定性檢查尿沉渣鏡檢與常規(guī)顯微鏡檢查方法相同。
⑤定量計(jì)數(shù)通常采用小方格定標(biāo)尺(0.1×0.1×9)×4mm2在低倍鏡下進(jìn)行定量，當(dāng)尿沉渣有形成分顯著分布不均或數(shù)量過(guò)少選擇大格扇形定標(biāo)尺進(jìn)行圓形定標(biāo)區(qū)(50.26mm2～113.10mm2)內(nèi)計(jì)數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)計(jì)算每微升尿液中的顆粒個(gè)數(shù)。
⑥用高分辯攝像機(jī)攝像或數(shù)碼照相機(jī)拍照進(jìn)行計(jì)算機(jī)分析計(jì)數(shù)，樣本封片計(jì)數(shù)后保存。
本實(shí)用新型一次檢測(cè)樣品量可達(dá)150μl，是常規(guī)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的100多倍，在顯微鏡下能明顯提高尿液中病理細(xì)胞的檢出率，可達(dá)1/105以上。
本實(shí)用新型具有如下優(yōu)點(diǎn)1.尿沉渣樣本體積和計(jì)數(shù)面積得到精確定量，各樣本計(jì)數(shù)的位置完全相同，確保了樣本有形成分計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，防止計(jì)數(shù)的主觀性。
2.定標(biāo)板計(jì)數(shù)區(qū)的分區(qū)標(biāo)識(shí)設(shè)計(jì)，能夠?qū)M織分布顯著不均的有形成分如管型等進(jìn)行精確計(jì)數(shù)，有效防止樣本顆粒分布不均對(duì)計(jì)數(shù)的影響。
3.載物樣本計(jì)數(shù)池內(nèi)的樣本量大并進(jìn)行防脫片處理而適宜不同的組織化學(xué)染色，從而顯著提高各異常細(xì)胞的檢出率。
4.樣本計(jì)數(shù)池圓形的設(shè)計(jì)與尿滴的形狀相同，使池壁對(duì)樣本的表面張力保持一致。
5.由于尿沉渣樣本體積得到精確定量，實(shí)現(xiàn)與國(guó)際接軌，增加了結(jié)果的可比性。
6.圓周為彩色使計(jì)數(shù)池面積清晰可辯，同片兩個(gè)完全相同的樣本計(jì)數(shù)池可對(duì)同一樣本進(jìn)行檢驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)自身對(duì)照，有效防止漏檢和錯(cuò)檢7.原始樣本封片后可永久保存并可進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，一次應(yīng)用無(wú)交叉污染。
8.既可人工操作亦可用微機(jī)處理，價(jià)格低廉，技術(shù)簡(jiǎn)單。本實(shí)用新型尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置符合國(guó)際(NCCLS)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)制定的尿液檢查標(biāo)準(zhǔn)化要求，能進(jìn)行各種尿沉渣組份的組織細(xì)胞化學(xué)染色，同時(shí)進(jìn)行定性和精確定量分析，患者原始資料實(shí)現(xiàn)永久保存。使用方便，結(jié)果可信度強(qiáng)，適合各級(jí)醫(yī)院應(yīng)用。


圖1為本實(shí)用新型玻璃載物染色板俯視結(jié)構(gòu)示意圖，其中，1.玻璃載物染色板，2.樣本計(jì)數(shù)池，3.計(jì)數(shù)池底部，4.計(jì)數(shù)池標(biāo)識(shí)。
圖2為圖1的剖面結(jié)構(gòu)示意圖，其中，1.玻璃載物染色板，5.池壁。
圖3為本實(shí)用新型計(jì)數(shù)定標(biāo)板俯視結(jié)構(gòu)示意圖其中，6.計(jì)數(shù)定標(biāo)板，7.圓形定標(biāo)區(qū)，8.大格扇形定標(biāo)尺，9.小方格定標(biāo)尺。
圖4為本實(shí)用新型主視結(jié)構(gòu)示意圖。
其中，1.玻璃載物染色板，5.池壁，6.計(jì)數(shù)定標(biāo)板，10蓋玻片具體實(shí)施方式
實(shí)施例1制備本實(shí)用新型裝置，進(jìn)行尿液脫落細(xì)胞的染色定量計(jì)數(shù)采用透明玻璃板制備載物染色板，在其平面上設(shè)置兩個(gè)相同的圓形尿樣本染色計(jì)數(shù)池，內(nèi)經(jīng)為8.0mm，外經(jīng)8.2mm，池高0.1 5mm，底面積為50.26mm2，池壁圓周為紅色，尿樣池底部用多聚賴氨酸和血清(10∶1)進(jìn)行防脫片處理，采用玻璃制備計(jì)數(shù)定標(biāo)板，板上設(shè)置圓形定標(biāo)區(qū)，與載物板樣本計(jì)數(shù)池大小相同。定標(biāo)區(qū)等分成4個(gè)大格扇形定標(biāo)尺，其中各部分劃分成9個(gè)正方形小格為小方格定標(biāo)尺，每小格面積為0.1×0.1mm2。
吸取經(jīng)充分混勻的新鮮尿沉渣50μl分別滴入載物板樣本計(jì)數(shù)池中，室溫干燥后，尿沉渣選擇乙醚與95％酒精各半的混合液中固定15分鐘依次置入80％、70％、50％的酒精內(nèi)30秒，然后置于蒸餾水中2分鐘，待干；用蘇木精染液染色15分鐘，水沖；用0.5％的稀鹽酸去掉胞漿中多余的蘇木精染液，數(shù)秒鐘后水沖；置稀碳酸鋰溶液中堿化1分鐘，水沖；用95％酒精脫水2分鐘，水沖；在EA染液中染色3分鐘后用95％酒精洗滌2次，再置無(wú)水酒精中脫水，然后置二甲苯中洗滌2次，用樹膠、蓋玻片封固。常規(guī)顯微鏡定性檢查后，在蓋玻片上放置定標(biāo)計(jì)數(shù)板并使定標(biāo)區(qū)面積和載物板計(jì)數(shù)面積完全重疊，采用小方格定標(biāo)尺(0.1×0.1×9×4mm2)在低倍鏡下計(jì)數(shù)染色細(xì)胞并行數(shù)碼拍照，然后根據(jù)實(shí)際尿液樣本體積計(jì)算每微升的細(xì)胞數(shù)?；颊吣虺猎旧蛿?shù)碼圖像編號(hào)保存。
實(shí)施例2尿液中管型的染色定量計(jì)數(shù)采用透明玻璃板制備載物染色板，在其平面上設(shè)置兩個(gè)相同的圓形尿樣本染色計(jì)數(shù)池，內(nèi)經(jīng)為12mm，外經(jīng)12.2mm，池高0.25mm，底面積為為113.10mm2，池壁圓周為紅色，由于尿沉渣中的管型體積大小和長(zhǎng)度均不等，其分布相對(duì)不均，吸取經(jīng)充分混勻的新鮮尿沉渣150μl分別滴入載物板樣本計(jì)數(shù)池中，室溫干燥后，尿沉渣用2.5％多聚甲醛固定15分鐘，水沖，待干；用印度墨汁150μl行負(fù)性染色，待其完全干燥后在常規(guī)顯微鏡下檢查。接著在樣本計(jì)數(shù)池上放置定標(biāo)計(jì)數(shù)板并使定標(biāo)區(qū)面積和載物板計(jì)數(shù)面積完全重疊，采用大格扇型定標(biāo)尺(28.28×4mm2)在低倍鏡下計(jì)數(shù)尿沉渣中的管型并行數(shù)碼拍照，然后根據(jù)實(shí)際尿液樣本體積計(jì)算每微升的管型數(shù)。患者尿沉渣染色片和數(shù)碼圖像編號(hào)保存。
權(quán)利要求1.一種尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是由玻璃載物染色板和計(jì)數(shù)定標(biāo)板兩部分組成，載物染色板和定標(biāo)板相偶合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的載物染色板平面上設(shè)有2個(gè)完全相同的圓形尿樣本染色計(jì)數(shù)池，其內(nèi)經(jīng)為8mm～12mm，外經(jīng)8.1mm～12.2mm，池高0.10mm～0.25mm，底面積為50.26mm2～113.10mm2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的計(jì)數(shù)池，池壁圓周為彩色。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的計(jì)數(shù)池底部進(jìn)行防脫片處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的計(jì)數(shù)定標(biāo)板上設(shè)有與載物板樣本計(jì)數(shù)池大小完全相同的圓形定標(biāo)區(qū)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的計(jì)數(shù)板定標(biāo)區(qū)等分成4個(gè)大格扇形定標(biāo)尺和4個(gè)正方形小格定標(biāo)區(qū)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是所述的計(jì)數(shù)板小定標(biāo)區(qū)每格為0.1×0.1×9mm2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置，其特征是一次檢測(cè)樣品量為50μl～150μl。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置。由玻璃載物染色板和計(jì)數(shù)定標(biāo)板兩部分組成，其中載物染色板和定標(biāo)板相偶合。所述玻璃載物染色板平面上設(shè)有圓形尿樣本染色計(jì)數(shù)池，池壁，圓周為彩色，池底部進(jìn)行防脫片處理；計(jì)數(shù)定標(biāo)板上設(shè)有圓形大、小定標(biāo)區(qū)，本實(shí)用新型尿沉渣染色定量計(jì)數(shù)裝置符合國(guó)際(NCCLS)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)制定的尿液檢查標(biāo)準(zhǔn)化要求，能進(jìn)行各種尿沉渣組份的組織細(xì)胞化學(xué)染色，同時(shí)進(jìn)行定性和精確定量分析，患者原始資料實(shí)現(xiàn)永久保存。使用方便，結(jié)果可信度強(qiáng)，適合各級(jí)醫(yī)院應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N21/77GK2676190SQ20042002016
公開日2005年2月2日 申請(qǐng)日期2004年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月16日
發(fā)明者彭艾, 顧勇, 林善錟 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院