專利名稱：農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法及設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法領(lǐng)域，尤其是一種農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法及設(shè)備。
背景技術(shù)：
對(duì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行農(nóng)藥殘毒檢測(cè)是一件具有非常重要的事情。一方面，由于果蔬污染問題日益突出，嚴(yán)重影響人們身體健康。20世紀(jì)90年代以來，我國(guó)蔬菜和水果農(nóng)藥殘留引起人畜死亡事件頻繁發(fā)生。1992年至1996年全國(guó)26個(gè)省市發(fā)生農(nóng)藥中毒事件247349例，死亡24612人，我國(guó)每年因農(nóng)藥中毒的人數(shù)占世界同類事故人數(shù)的50％。隨著人們生活水平的日益提高，要求農(nóng)產(chǎn)品不僅品質(zhì)要好，而且要衛(wèi)生無污染，在國(guó)際市場(chǎng)上，許多發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)對(duì)進(jìn)口農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留量作出嚴(yán)格限制。由于我國(guó)許多農(nóng)產(chǎn)品在一定程度上存在著農(nóng)藥殘留，發(fā)達(dá)國(guó)家“綠色壁壘”也越來越高，致使農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯受到較大影響。
目前，在國(guó)際上在農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方面有以下幾種方法1、使用家蠅檢測(cè)蔬菜中的殘毒上世紀(jì)60年代后期，我國(guó)臺(tái)灣采用生物測(cè)定方法進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)，其原理是放飼高敏感性的家蠅于菜汁中，4-5小時(shí)后家蠅死亡率在10％以下即為合格。該方法的優(yōu)點(diǎn)是過程簡(jiǎn)單、無須復(fù)雜儀器。缺點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，僅適用于田間未采收的蔬菜，且該方法只對(duì)少數(shù)藥劑有反應(yīng)，無法分辨殘留農(nóng)藥的種類，準(zhǔn)確性較低。
2、酶免疫檢測(cè)法酶聯(lián)免疫吸附劑檢測(cè)法，簡(jiǎn)稱酶免疫法，是將抗原和抗體反應(yīng)與現(xiàn)代科技手段相結(jié)合的微量分析法。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于可以減少樣本前處理和純化步驟，在短時(shí)間內(nèi)可以分析大量樣本，適合于做成試劑盒現(xiàn)場(chǎng)篩選，其缺點(diǎn)是精密度不高，抗體制備不易且有特異性。
3、酶抑制法該方法是今年來迅速發(fā)展的一種農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，具有簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。酶抑制法的基本原理是乙酰膽堿酯酶(AChE)+有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥-酶活性被抑制；乙酰膽堿酯酶(AChE)+樣本，如活性被抑制則含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，如活性不被抑制，則不含有此類農(nóng)藥。
快速農(nóng)藥殘毒篩選，是安排在基層第一線的檢驗(yàn)技術(shù)。符合這種篩選的檢測(cè)技術(shù)，必須簡(jiǎn)單易行，不需要大型儀器及復(fù)雜的設(shè)備，其成本低且檢驗(yàn)的結(jié)果反映快，采用這種方法能夠在較短時(shí)間內(nèi)將“超毒”的果蔬篩選出來。今年來，我國(guó)也開展了對(duì)酶抑制法檢測(cè)農(nóng)藥殘留的研究，但多采用測(cè)定酶抑制反應(yīng)的單點(diǎn)顯色法，不易推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)速度快、選擇性高的適合我國(guó)國(guó)情的一種農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法。
本發(fā)明的另一目的是提供一種農(nóng)藥殘毒檢測(cè)設(shè)備。
本發(fā)明的技術(shù)方案是農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是包括下列步驟(1)、制作下列試劑備用PH＝7.5的磷酸鹽緩沖液、碘化硫代乙酰膽堿的底物、5，5’-二硫代雙-2-二硝基苯甲酸的顯色劑(DTNB)、從家蠅中提取的酶液乙酰膽堿脂酶(AChE)；(2)對(duì)照溶液測(cè)試在燒杯內(nèi)加入3ml磷酸鹽緩沖液，再加入50μl酶和50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘，取出后加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試選取來自不同植株葉片的樣本，果菜從表皮1-1.5cm深處取樣，葉菜類取2g樣本，非葉菜類取4g樣本，將取得的樣本切碎，放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml磷酸鹽緩沖液，振蕩1-2分鐘，靜置3-5分鐘，于試管內(nèi)分別倒入3ml樣本提取液、50μl酶、50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘取出，加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式抑制率＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
優(yōu)選，在對(duì)照溶液測(cè)試中，混合液體的培養(yǎng)溫度為30℃、培養(yǎng)時(shí)間為15分鐘。
優(yōu)選，在樣品溶液測(cè)試中，混合液體的培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間為15分鐘。
適用于農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置，其特征是包括光信號(hào)產(chǎn)生裝置、光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置、信號(hào)放大電路、測(cè)量裝置和輸出裝置，光信號(hào)產(chǎn)生裝置產(chǎn)生的光信號(hào)通過光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)過放大電路后，輸入到測(cè)量裝置進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量裝置將檢測(cè)結(jié)果通過輸出裝置進(jìn)行輸出，其中光信號(hào)產(chǎn)生裝置包括光源、濾光片、透鏡和比色皿組成，光源發(fā)出的光依次通過濾光片、透鏡和比色皿后，照射到光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置上，所述光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置為光電池，測(cè)量檢測(cè)裝置為CPU及A/D轉(zhuǎn)換電路。
所述的輸出裝置包括顯示器、打印機(jī)和/或網(wǎng)絡(luò)連接裝置。
本發(fā)明的效果是農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，包括下列步驟(1)、制作下列試劑備用；(2)對(duì)照溶液測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式抑制率＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
本發(fā)明的方法是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使昆蟲中毒致死的這一毒理學(xué)原理對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行“快速檢測(cè)”。如果果蔬的提取液中不含有農(nóng)藥或殘留量很低，酶的活性不被抑制，加入的底物就被水分解，水解產(chǎn)物與加入的顯色劑發(fā)生顏色反應(yīng)或水解產(chǎn)物本身有顏色。如果蔬菜的提取物中含有農(nóng)藥并殘留量較高時(shí)，酶的活性受抑制，底物就不會(huì)被水解，當(dāng)加入顯色劑時(shí)就不顯色或顏色變化很小。用適用于農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置來測(cè)定吸光度的變化，就可以判斷蔬菜中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留情況。
本發(fā)明的方法適應(yīng)我國(guó)果、蔬生產(chǎn)銷售的特點(diǎn)，可以對(duì)含有農(nóng)藥殘留的果、蔬進(jìn)行粗篩，將一部分含有農(nóng)藥殘毒的果、蔬控制在市場(chǎng)之外，避免農(nóng)藥中毒事故發(fā)生。
適用于農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置，包括光信號(hào)產(chǎn)生裝置、光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置、信號(hào)放大電路、測(cè)量裝置和輸出裝置，光信號(hào)產(chǎn)生裝置產(chǎn)生的光信號(hào)通過光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)過放大電路后，輸入到測(cè)量裝置進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量裝置將檢測(cè)結(jié)果通過輸出裝置進(jìn)行輸出。
農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置不僅適用在大的蔬菜批發(fā)市場(chǎng)、重要蔬菜產(chǎn)區(qū)建立快速檢測(cè)站，也適用于鄉(xiāng)(鎮(zhèn))村莊、大型公共食堂，甚至可以在菜販子交易現(xiàn)場(chǎng)建立流動(dòng)檢測(cè)站?？梢哉嬲龑?shí)現(xiàn)到田間速測(cè)，能預(yù)防人畜誤食含高毒、高殘留農(nóng)藥的蔬菜水果，確保人們獲得健康安全的飲食。
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。


圖1是本發(fā)明的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)裝置的光路圖；圖2是本發(fā)明的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)裝置電路框圖；圖3是本發(fā)明的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)裝置的電路原理圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是包括下列步驟(1)、制作下列試劑備用PH＝7.5的磷酸鹽緩沖液、碘化硫代乙酰膽堿的底物、5，5’-二硫代雙-2-二硝基苯甲酸的顯色劑(DTNB)、從家蠅中提取的酶液乙酰膽堿脂酶(AChE)；(2)對(duì)照溶液測(cè)試在燒杯內(nèi)加入3ml磷酸鹽緩沖液，再加入50μl酶和50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘，取出后加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試選取來自不同植株葉片的樣本，果菜從表皮1-1.5cm深處取樣，葉菜類取2g樣本，非葉菜類取4g樣本，將取得的樣本切碎，放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml磷酸鹽緩沖液，振蕩1-2分鐘，靜置3-5分鐘，于試管內(nèi)分別倒入3ml樣本提取液、50μl酶、50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘取出，加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式，抑制率＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置，包括光信號(hào)產(chǎn)生裝置、光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置、信號(hào)放大電路、測(cè)量裝置和輸出裝置，光信號(hào)產(chǎn)生裝置產(chǎn)生的光信號(hào)通過光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)過放大電路后，輸入到測(cè)量裝置進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量裝置將檢測(cè)結(jié)果通過輸出裝置進(jìn)行輸出，其中光信號(hào)產(chǎn)生裝置包括光源1、濾光片2、透鏡3和比色皿4組成，光源1發(fā)出的光依次通過濾光片2、透鏡3和比色皿4后，照射到光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置上，所述光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置為光電池5(參見圖1)，光電池5轉(zhuǎn)換信號(hào)后，通過信號(hào)放大電路6輸入到測(cè)量檢測(cè)裝置，測(cè)量檢測(cè)裝置為CPU及A/D轉(zhuǎn)換電路7，輸出裝置包括顯示器、打印機(jī)或網(wǎng)絡(luò)連接裝置9，與CPU相連的還有液晶顯示器與鍵盤8(參見圖2)。
圖3中，5是光電池，6是由集成電路CA3140組成的信號(hào)放大電路，7是CPU及A/D轉(zhuǎn)換電路，8是鍵盤，9是打印機(jī)接口與網(wǎng)絡(luò)接口，10是譯碼器，11是程序存儲(chǔ)器，12是數(shù)據(jù)存儲(chǔ)器，13是液晶顯示器接口，14是聲音提示裝置，15是電源模塊，16是穩(wěn)壓源。
農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置的工作原理是該儀器是根據(jù)乙酰膽堿酯酶的活性變化程度，利用有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制為原理設(shè)計(jì)的，它可以測(cè)定酶反應(yīng)過程中反應(yīng)物的顏色深淺，然后轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的抑制率，來顯示農(nóng)藥殘毒含量。
抑制率I＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC為對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
在乙酰膽堿酯酶的催化下，在沒有農(nóng)藥殘留的情況下，即為空白，待測(cè)液為黃色，抑制率I＝0，當(dāng)檢測(cè)樣品中含有殘留的農(nóng)藥時(shí)，待測(cè)液為淺黃色，當(dāng)農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)時(shí)，待測(cè)液幾乎不變色，乙酰膽堿酯酶的活性完全被抑制時(shí)，待測(cè)液不變色，I＝100％，當(dāng)抑制率I＜50時(shí)，說明采樣不合格，當(dāng)抑制率I＞50％時(shí)，說明菜樣被污染，不可食用。
實(shí)施例2農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是包括下列步驟(1)、制作下列試劑備用PH＝7.5的磷酸鹽緩沖液、碘化硫代乙酰膽堿的底物、5，5’-二硫代雙-2-二硝基苯甲酸的顯色劑(DTNB)、從家蠅中提取的酶液乙酰膽堿脂酶(AChE)；(2)對(duì)照溶液測(cè)試在燒杯內(nèi)加入3ml磷酸鹽緩沖液，再加入50μl酶和50μl顯色劑，置于溫度30℃條件下培養(yǎng)15分鐘，取出后加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試選取來自不同植株葉片的樣本，果菜從表皮1-1.5cm深處取樣，葉菜類取2g樣本，非葉菜類取4g樣本，將取得的樣本切碎，放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml磷酸鹽緩沖液，振蕩1-2分鐘，到處提取液，靜置3-5分鐘，于試管內(nèi)分別倒入3ml樣本提取液、50μl酶、50μl顯色劑，置于溫度30℃條件下培養(yǎng)15分鐘取出，加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式，抑制率＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
權(quán)利要求
1.農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是包括下列步驟(1)、制作下列試劑備用PH＝7.5的磷酸鹽緩沖液、碘化硫代乙酰膽堿的底物、5，5’-二硫代雙-2-二硝基苯甲酸的顯色劑(DTNB)、從家蠅中提取的酶液乙酰膽堿脂酶(AChE)；(2)對(duì)照溶液測(cè)試在燒杯內(nèi)加入3ml磷酸鹽緩沖液，再加入50μl酶和50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘，取出后加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試選取來自不同植株葉片的樣本，果菜從表皮1-1.5cm深處取樣，葉菜類取2g樣本，非葉菜類取4g樣本，將取得的樣本切碎，放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml磷酸鹽緩沖液，振蕩1-2分鐘，靜置3-5分鐘，于試管內(nèi)分別倒入3ml樣本提取液、50μl酶、50μl顯色劑，置于溫度25-35℃條件下培養(yǎng)12-18分鐘取出，加入50μl底物，倒入比色皿中，進(jìn)行吸光度測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式抑制率＝[(AC-AS)/AC]*100％，其中AC對(duì)照溶液的吸光度，AS為樣品溶液的吸光度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是在對(duì)照溶液測(cè)試中，混合液體的培養(yǎng)溫度為30℃、培養(yǎng)時(shí)間為15分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，其特征是在樣品溶液測(cè)試中，混合液體的培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間為15分鐘。
4.一種適用于上述各權(quán)利要求所述的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置，其特征是包括光信號(hào)產(chǎn)生裝置、光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置、信號(hào)放大電路、測(cè)量裝置和輸出裝置，光信號(hào)產(chǎn)生裝置產(chǎn)生的光信號(hào)通過光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)過放大電路后，輸入到測(cè)量裝置進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)量裝置將檢測(cè)結(jié)果通過輸出裝置進(jìn)行輸出，其中光信號(hào)產(chǎn)生裝置包括光源、濾光片、透鏡和比色皿組成，光源發(fā)出的光依次通過濾光片、透鏡和比色皿后，照射到光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置上，所述光電信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置為光電池，測(cè)量檢測(cè)裝置為CPU及A/D轉(zhuǎn)換電路。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)裝置，其特征是所述的輸出裝置包括顯示器、打印機(jī)和/或網(wǎng)絡(luò)連接裝置。
全文摘要
一種檢測(cè)靈敏度高、檢測(cè)速度快、選擇性高的適合我國(guó)國(guó)情的農(nóng)藥殘毒檢測(cè)方法。技術(shù)方案是包括下列步驟(1)制作下列試劑備用；(2)對(duì)照溶液測(cè)試；(3)樣品溶液測(cè)試；(4)抑制率計(jì)算根據(jù)公式抑制率＝[(A
文檔編號(hào)G01N1/28GK1834628SQ200510135569
公開日2006年9月20日 申請(qǐng)日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者趙建莊, 李玉江, 趙志文, 柴麗娜, 史亞軍, 范雙喜, 黃志鵬 申請(qǐng)人:趙建莊, 李玉江