專(zhuān)利名稱(chēng)：用于測(cè)定方法的提供樣本的液體和固體成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于各種試驗(yàn)和測(cè)定方法的樣本的采集和傳送領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
以下是相關(guān)技術(shù)的討論，任何一種技術(shù)都不是所附權(quán)利要求認(rèn)定的現(xiàn)有技術(shù)。
美國(guó)專(zhuān)利5,709,838描述了一種采樣器，它可以采集一種物質(zhì)，然后將采集的樣本送到測(cè)試工具處。這種采樣器由一個(gè)刮鏟和一個(gè)手柄組成。刮鏟部分可同手柄分離，以便它可留在測(cè)試容器內(nèi)。這種裝置旨在用于干的顆粒樣本和溶于可揮發(fā)性介質(zhì)中的物質(zhì)。
美國(guó)專(zhuān)利5,460,781描述了一種從糞便中采集血紅蛋白的采樣器。這種裝置包括一種能吸取水分的纖維束，因此可從不同稠度的糞便樣本中得到血紅蛋白，卻不會(huì)將任何固體成分帶到分析檢測(cè)儀中。這種裝置必須放在糞便樣本的多個(gè)位點(diǎn)，以保證采集到足夠得樣本。
美國(guó)專(zhuān)利4,225,557公開(kāi)了一種有診斷性測(cè)試帶的裝置，它可以直接同糞便樣本接觸，然后將樣本覆蓋或封閉以便在分析之前密封在糞便樣本中。
美國(guó)專(zhuān)利4,492,124描述了另一種傳送糞便樣本的方法。這種方法包括使用長(zhǎng)手柄和有圓柱狀內(nèi)芯的裝置。將這種帶芯的裝置推入樣本中，就可使芯內(nèi)充滿(mǎn)樣本。然后將這種帶芯的裝置從樣本中移開(kāi)，從手柄上分離，進(jìn)入合適的容器用于傳送和/或測(cè)試。通過(guò)在這種帶芯的裝置中推動(dòng)一個(gè)移動(dòng)樣本的裝置，或從這種有芯的裝置中沖洗樣本，可將樣本移開(kāi)。
美國(guó)專(zhuān)利5,543,115公開(kāi)了一種樣本處理的裝置，包括一個(gè)長(zhǎng)柄和一個(gè)凹槽樣本收集裝置。采集的樣本被收集在裝置的凹槽之間。這種裝置旨在用于采集固體和半固體物質(zhì)的樣本。
美國(guó)專(zhuān)利5,066,463公開(kāi)了一種糞便檢查儀器，包括一個(gè)攪拌耙，用于收集糞便樣本，然后將它送至儀器的中空部分。
WO97/32529描述了一種移動(dòng)患者糞便嵌塞的儀器，包括一個(gè)有彈性刺的長(zhǎng)柄，用于弄平包裹的糞便。
美國(guó)專(zhuān)利5,238,847和5,215,713公開(kāi)了一種測(cè)試工具，用于檢驗(yàn)糊狀的，可涂的樣本中的被分析物，其中樣本可以用刮鏟涂在樣本區(qū)上。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及能提供樣本的等分試樣的方法，該樣本由液體和固體成分組成。權(quán)利要求的采樣方法提高了傳送難運(yùn)的樣本基質(zhì)的再現(xiàn)性和簡(jiǎn)易程度，可用于多種分析或醫(yī)療檢測(cè)方法。這種采樣方法可適用于很大范圍的樣本粘度和固體含量。這種采樣方法可同時(shí)收集樣本的固體和液體成分，因此可采集到具有代表性的原樣本成分的樣本。不具代表性的樣本，要檢測(cè)的被分析物可能會(huì)顯示一個(gè)不具代表性的濃度，因此很可能漏測(cè)或測(cè)得低。這種采樣方法可以使樣本用于多種檢測(cè)方法。分析方法可以是定性或定量測(cè)量樣本的一種或多種成分。本分析檢測(cè)方法，包括但并不限于，簡(jiǎn)單的分光光度分析，放射同位素分析，化學(xué)分析，免疫測(cè)定，核酸分析以及色譜技術(shù)。如果樣本來(lái)自病人，這些測(cè)試方法可以檢測(cè)樣本的多項(xiàng)被分析物，包括隱血，艱難梭菌毒素或其它感染因子，或者還可以分析樣本的化學(xué)成分。
不管樣本的粘度和稠度，本發(fā)明都可以使用于檢測(cè)方法的均勻的，可重現(xiàn)的樣本傳送成為可能。本發(fā)明的采樣方法優(yōu)于現(xiàn)有的采樣方法。本發(fā)明的方法也很簡(jiǎn)單，最少的暴露樣本物質(zhì)，因?yàn)樵谒椭练磻?yīng)或測(cè)試容器前，樣本一直留在采樣器內(nèi)。
一方面，本發(fā)明涉及一種用于測(cè)定方法的提供含液體和固體成分的樣本的等分試樣的方法，包括使樣本和采樣器接觸，該采樣器被配置和安裝成根據(jù)樣本的液體和固體成分的比例獲取液體和固體成分的等分試樣，在采樣器取到樣本的等分試樣的條件下，然后提供這種等分試樣用于測(cè)定方法。
本發(fā)明涉及獲得含液體和固體成分的樣本的等分試樣，因?yàn)楦信d趣的被分析物可能同時(shí)散布在樣本的液體和固體成分中?？捎糜诓蓸拥穆暶鞯姆椒ǖ臉颖镜膶?shí)例包括，但不限于，要檢驗(yàn)一種或多種成分存在的非生物來(lái)源的料漿或懸浮液和生物來(lái)源的樣本，如糞便，痰液，鼻腔沖洗液，鼻腔吸出物，全血，膿液或其它滲出液或組織勻漿?！皹颖镜牡确衷嚇印笔窍惹安杉臉颖镜囊徊糠?，在原位如燒傷或創(chuàng)傷的部位，或鼻道采集的樣本的一部分，或從制作或準(zhǔn)備的容器中采集的樣本的一部分。那些本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟悉很多種采集樣本的方法。那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)所要檢測(cè)的被分析物和所用測(cè)定方法的靈敏度，能夠確定需要采集的樣本量。測(cè)定方法可以是任何一種方法，以檢測(cè)出可以含在樣本的等分試樣中的感興趣的被分析物的存在和/或量。那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠針對(duì)所選的感興趣的被分析物，確定合適的測(cè)定方法。
樣本與采樣器接觸，這種采樣器可放在樣本中或樣本的表面，以便暴露于樣本的液體和/或固體成分中，樣本的液體和/或固體成分便可以附著于采樣器上。要求相對(duì)于樣本從側(cè)面或旋轉(zhuǎn)地移動(dòng)采樣器，以保證傳送至并附著在采樣器上的是代表樣本的按比例的液體和/或固體成分。采樣器裝配成根據(jù)樣本的液體和固體成分的比例獲取液體和固體成分的等分試樣，即如果樣本中有液體和固體成分存在的話(huà)，采樣器可保留樣本的等分試樣的液體和固體成分，直到它們被傳送至用于測(cè)定方法前等分試樣不會(huì)缺失任何物質(zhì)。按比例的方法可以使等分試樣的液體和固體成分代表樣本中這些成分的相對(duì)量。
一旦采樣器采集了適量的樣本，就提供了等分試樣用于測(cè)定方法，即從采樣器上取出等分試樣用于測(cè)定方法。等分試樣的取出可以將帶有樣本的等分試樣的采樣器與在測(cè)定方法中使用的表面直接接觸，或?qū)⒉蓸悠鹘腚S后在測(cè)定方法中使用的溶液中。溶液可裝在一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)。溶液可以增加被分析物從樣本的等分試樣中的提取，或者可以含一種用于測(cè)定方法的測(cè)試試劑(測(cè)試溶液)，或者可以?xún)H為一種液體，用于從采樣器上移去等分試樣。通過(guò)物理過(guò)程如攪拌、振蕩和/或壓榨反應(yīng)器內(nèi)的采樣器，可以方便地使采樣器中的等分試樣移至溶液中。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，采樣器是一把刷子；該刷子是一把設(shè)計(jì)用來(lái)收集細(xì)胞的刷子；樣本是糞便；測(cè)定方法是用來(lái)檢測(cè)艱難梭菌毒素；測(cè)定方法是一種光學(xué)免疫測(cè)定法；樣本是非生物來(lái)源的料漿或懸浮體；樣本選自痰液，鼻腔沖洗液，鼻腔吸出物，全血，膿液，細(xì)胞滲出液和組織料漿；提供的等分試樣包括浸漬在測(cè)試溶液中的采樣器；接觸包括將采樣器推入樣本中，在樣本中旋轉(zhuǎn)采樣器以及從樣本中移去采樣器；等分試樣被傳送至反應(yīng)器內(nèi)；等分試樣被直接傳送至檢驗(yàn)表面。
刷子是優(yōu)選的采樣器，盡管那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解采樣器可以是任意形狀的能以表示樣本中成分的量捕捉和收集樣本的液體和固體成分的物質(zhì)。刷子有附著在手柄上的刷毛。那些本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以很容易地根據(jù)所描述的刷子的特征，即刷子部分的形狀，刷子內(nèi)刷毛的形狀，刷子內(nèi)刷毛的密度，刷子部分的長(zhǎng)度，刷子內(nèi)刷毛的長(zhǎng)度，刷毛的直徑，刷毛的物質(zhì)組成，刷子部分刷毛分布的方式和刷子手柄的設(shè)計(jì)來(lái)確定如何選擇一把可以買(mǎi)到的刷子或制作一把用于提供特定樣本的等分試樣的刷子。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，刷子被設(shè)計(jì)成收集細(xì)胞?！八⒆颖辉O(shè)計(jì)成收集細(xì)胞”是指一把用于，例如從子宮頸，收集細(xì)胞的刷子。這些刷子被稱(chēng)為細(xì)胞學(xué)的刷子。例如，一把這樣的刷子是CYTOBRUSHTM細(xì)胞學(xué)刷子(Medscand，AB，Malmo，Sweden)。有許都種適用于細(xì)胞學(xué)刷子的設(shè)計(jì)方案。一些設(shè)計(jì)包括在美國(guó)專(zhuān)利3,881,464，美國(guó)專(zhuān)利4,759,376，美國(guó)專(zhuān)利5,133,361，美國(guó)專(zhuān)利5,713,369，WO91/16855中所描述的。設(shè)計(jì)這些刷子用于防癌檢查，從子宮頸和子宮頸管內(nèi)膜取樣。刷子可以被制成非常直的形狀，并且有均勻的刷毛長(zhǎng)度和密度。可以通過(guò)改善刷毛的長(zhǎng)度和分布，確定刷子的外形和形狀?；蛘咚⒚梢岳@著刷子的手柄螺旋形移動(dòng)。刷子的長(zhǎng)度可以變化。
優(yōu)選的采樣方法的用途是用于糞便樣本，尤其是腹瀉的糞便樣本的可重現(xiàn)的傳送，因?yàn)檫@些樣本同時(shí)含有液體和固體成分。
使用這些技術(shù)的人知道用于檢測(cè)艱難梭菌產(chǎn)生的毒素的測(cè)定方法，包括，但并不限于，細(xì)胞毒性測(cè)定，免疫測(cè)定和光學(xué)免疫測(cè)定(OIA)。
光學(xué)免疫測(cè)定描述了基于光和薄膜的相互作用的方法。與薄膜發(fā)生相互作用的光會(huì)經(jīng)歷一些類(lèi)型的調(diào)節(jié)，通常是相滯后(phase delay)，但也可能是其它效應(yīng)。根據(jù)薄膜儀的式樣，光可以經(jīng)歷破壞性的干擾，產(chǎn)生一種可見(jiàn)的顏色改變，或者光可以經(jīng)歷極性的改變，這種改變可以通過(guò)橢圓偏振法，比較橢圓偏振法，固定角度橢圓偏振法或其它橢圓偏振法來(lái)測(cè)量。當(dāng)發(fā)生可見(jiàn)顏色改變時(shí)，簡(jiǎn)單的反射計(jì)可以代替眼睛作為顏色改變的監(jiān)測(cè)儀。用表面光度測(cè)定法，掃描隧道顯微法或原子力顯微法來(lái)檢測(cè)薄膜的表面。由于與薄膜的相互作用，光發(fā)生衰減，導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)光的波長(zhǎng)的抑制或擴(kuò)大，單色光或多色光的強(qiáng)度的改變，光的極性的改變(強(qiáng)度和/或波長(zhǎng)或極性度)，或其它可測(cè)量的現(xiàn)象。衰減也可能是光的這些改變的復(fù)合結(jié)果。薄膜可以是無(wú)機(jī)膜，有機(jī)膜或有機(jī)/無(wú)機(jī)復(fù)合膜。薄膜被固定在光學(xué)支架上。選擇與測(cè)定方法相兼容的光學(xué)支架用于最終測(cè)定方式。選擇與光學(xué)支架，檢測(cè)方法和測(cè)定系統(tǒng)的其它組成(如抗體接受層)相兼容的薄膜。在美國(guó)專(zhuān)利5,550,063，美國(guó)專(zhuān)利5,482,830，美國(guó)專(zhuān)利5,541,057，美國(guó)專(zhuān)利5,468,606，美國(guó)專(zhuān)利5,639,671和R.M.Ostroff等，Clin.Chem.，44，2031-2035，1998中陳述了材料的選擇和材料相容性的標(biāo)準(zhǔn)。
優(yōu)選的樣本是一種非生物來(lái)源的料漿或懸浮體?！傲蠞{”是指一種含細(xì)小的固體成分的液體。“懸浮體”是一個(gè)由分散在液體中的細(xì)小的分離固體，比如一種液體藥劑組成的雙相體系。“非生物來(lái)源”指的是非植物或動(dòng)物的任何來(lái)源。樣本也可以是任何生物來(lái)源的物質(zhì)，優(yōu)選痰液，鼻腔沖洗液，鼻腔吸出物，全血，膿液，細(xì)胞滲出液和組織料漿。
裝在采樣器中的等分試樣可以被傳送到一個(gè)為用于測(cè)定方法而準(zhǔn)備的“反應(yīng)器”內(nèi)。反應(yīng)器是一些容器，其包括，但并不限于，聚丙烯試管，和由玻璃，聚乙烯或石英制成的容器。一旦樣本被送入反應(yīng)器內(nèi)，樣本常必須被溶解到一種檢驗(yàn)溶液內(nèi)。這可以通過(guò)將裝有樣本的等分試樣的采樣器部分浸漬在檢驗(yàn)溶液內(nèi)完成。另一種方法是，可以將樣本的等分試樣直接送到“檢驗(yàn)表面”，該“檢驗(yàn)表面”可以是任何表面，在它上面來(lái)實(shí)施測(cè)定方法，如，用于免疫測(cè)定或核酸分析的測(cè)定儀上的膜，用于熒光測(cè)定或顯微鏡檢查的顯微法載玻片，或者用于微生物分析的固體瓊脂板。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法提供了糞便樣本的等分試樣，以用于為檢驗(yàn)艱難梭菌毒素的光學(xué)免疫測(cè)定法，該方法包括使糞便和采樣刷接觸，采樣刷裝配成可根據(jù)糞便樣本的液體和固體成分的比例獲取糞便樣本的液體和固體成分，在采樣器取到樣本的等分試樣和條件下，然后將這種等分試樣用于艱難梭菌毒素的光學(xué)免疫測(cè)定。
在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在進(jìn)行光學(xué)免疫測(cè)定之前，先將等分試樣傳送到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)；刷子是一把設(shè)計(jì)用來(lái)收集細(xì)胞的刷子。
從下面相關(guān)的優(yōu)選的實(shí)施方案的描述和權(quán)利要求中，本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)和特征是顯而易見(jiàn)的。
在本申請(qǐng)中引用的所有文章，出版物和專(zhuān)利都全部引入作為參考。
優(yōu)選的實(shí)施方案的描述提供下列實(shí)施例，以進(jìn)一步闡明本發(fā)明的不同方面和實(shí)施方案，決不是要限定在這個(gè)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1刷子的選擇和構(gòu)造優(yōu)選的采樣器是一把刷子，如細(xì)胞學(xué)刷(Oosina，Englewood，NJ；Hardwood Products，Co.，Guilford，ME；Medical Packaging Corp.，Camarillo，CA)，其被用來(lái)從子宮頸收集細(xì)胞。然而，很顯然對(duì)實(shí)施這項(xiàng)技術(shù)的人來(lái)說(shuō)，很多種類(lèi)型和設(shè)計(jì)的刷子都適用于聲明的方法。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)樣本的液體和固體成分以及考慮到所討論的刷子的性能，能夠確定能買(mǎi)到的刷子中，哪一把適用于特定的樣本。此外，一個(gè)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)樣本的成分和所描述的刷子的性能，能夠設(shè)計(jì)一把合適的刷子。本發(fā)明中，刷子直接置入樣本中，并用來(lái)取出特定量的樣本。然后把刷子插入試管或其它反應(yīng)器內(nèi)，并與液體試劑混合。刷子上的樣本混合到溶液中，釋放出想要的被分析物，為進(jìn)一步檢驗(yàn)產(chǎn)生出一種均勻的樣本基質(zhì)。使用刷子采集樣本的最主要優(yōu)點(diǎn)是刷子的特制的刷毛有在刷毛間捕捉固體，粘性物質(zhì)和液體的能力。物質(zhì)被安全地保留在刷子中，被傳送到適宜的反應(yīng)器中，而不會(huì)暴露給進(jìn)行采樣的人。如果要從身體，如創(chuàng)傷部位和鼻道，取樣本的等分試樣，使用前刷子可以消毒。
很多種細(xì)胞學(xué)刷都可以買(mǎi)到。在選擇可買(mǎi)到的樣式或設(shè)計(jì)一把新刷子以用于從樣本中獲得等分試樣時(shí)，要反復(fù)考慮許多因素，所述樣本是從低液體含量的固體樣本至主要是液體的樣本。選擇的刷子應(yīng)考慮采樣器刷子部分的形狀，刷子內(nèi)刷毛的形狀，刷子內(nèi)刷毛的密度，刷子部分的長(zhǎng)度，刷子內(nèi)刷毛的長(zhǎng)度，刷毛的直徑，刷毛的物質(zhì)成分，和刷子部分內(nèi)刷毛分布的方式。還需考慮刷子手柄的樣式。手柄必須足夠長(zhǎng)，使用者才不會(huì)碰到樣本。但手柄還必須足夠結(jié)實(shí)能夠貫通樣本，無(wú)論樣本有多稠，要求在任何壓力下，都能貫通樣本而不折斷。手柄還必須同反應(yīng)器相容，樣本被傳送到反應(yīng)器內(nèi)，并能夠很容易地同反應(yīng)介質(zhì)混合。如果直接從創(chuàng)傷部位和鼻腔采集樣本，要求有一個(gè)更有彈性的手柄。
采樣器刷子部分的形狀會(huì)限定傳送到反應(yīng)器內(nèi)的樣本量(等分試樣)。刷子部分的長(zhǎng)度，刷子內(nèi)刷毛的長(zhǎng)度，刷毛的密度，刷子部分內(nèi)刷毛分布的方式會(huì)決定刷子的形狀。刷毛可以成螺旋形通過(guò)刷子部分。這就形成了刷毛的連續(xù)分布。刷毛也可以不連續(xù)排列。獨(dú)特的刷毛的長(zhǎng)度進(jìn)一步限定了刷子部分的形狀。刷毛可以是一種或多種長(zhǎng)度，并且長(zhǎng)度可通過(guò)排列或改變刷毛等而改變。
刷毛的勁度依賴(lài)于用于制備刷毛的物質(zhì)的成分和直徑。大多數(shù)可買(mǎi)到的刷子的刷毛是尼龍的。用來(lái)制備刷毛的物質(zhì)還可以控制刷子的疏水特性。刷毛必須保持一定水平的勁度以協(xié)助貫通和采集樣本。
在制備過(guò)程中，可以切割刷毛成包括一個(gè)鈍端或一個(gè)尖端。尖端有優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗阌跇颖矩炌ê捅Ａ艉喙腆w粘稠的樣本。
對(duì)于液體較多的樣本來(lái)講，刷毛的密度必須足以產(chǎn)生采集位點(diǎn)。液體因靜電相互作用保留在刷毛間，并在刷毛上形成強(qiáng)于氣/液相互作用的液封。固體較多的樣本由于粘性較容易粘附。
根據(jù)對(duì)作為傳送樣本的刷子的性能的經(jīng)驗(yàn)性觀(guān)察，選擇用于采集特殊樣本的合適的刷子的式樣。在測(cè)定中，應(yīng)使用給定樣本類(lèi)型的一定范圍的樣本稠度和成分。這將保證采樣器能收集到所有可能樣本稠度的足量樣本。所需的樣本量主要取決于分析測(cè)定方法和其固有的檢測(cè)限制。非常敏感的分析方法比不太敏感的方法所需的樣本量要少。非常敏感的分析方法對(duì)加入反應(yīng)器中以從刷子上分離收集的樣本的液體試劑量也較不敏感，但應(yīng)優(yōu)化試劑的量以保證用最少的添加試劑來(lái)完成樣本的回收。檢驗(yàn)試劑可以包括緩沖液，溶劑，洗滌劑，酸，堿，檢定試劑等。檢驗(yàn)試劑可以溶解收集的樣本，幫助懸浮收集的樣本或者為下一步檢測(cè)改性樣本成分。根據(jù)樣本稠度的范圍和用分析方法可檢驗(yàn)的被分析物最小的可測(cè)定劑量來(lái)評(píng)估樣本回收的再現(xiàn)性。
所選的刷子必須與樣本和檢驗(yàn)試劑相容。這意味著刷子不能將一種物質(zhì)釋放到樣本或檢驗(yàn)試劑中，而干擾或抑制分析方法。刷子不能溶于檢驗(yàn)試劑，除非能證明溶解不影響用于測(cè)定方法的被分析物的回收。在移開(kāi)過(guò)程中刷子不能保留樣本(等分試樣)或者與其它檢驗(yàn)試劑結(jié)合而降低方法的敏感性。
根據(jù)上述的因素，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠選擇或設(shè)計(jì)一把刷子，用于從不同稠度的多種樣本中提供等分試樣用于不同的測(cè)定方法。
用刷子采集樣本的過(guò)程非常簡(jiǎn)單。握住刷子的手柄，將刷子部分推入樣本中以覆蓋采樣器的刷子部分。當(dāng)使用的刷子部分很長(zhǎng)時(shí)可以采集到足量的樣本而不必完全貫通樣本。然而，讓刷子材料不暴露于樣本中會(huì)引起太多的采樣可變性。一旦刷子貫通樣本，旋轉(zhuǎn)手柄讓所有的刷子部分與樣本接觸，提高樣本的采集。然后將刷子從樣本中移開(kāi)，將樣本的等分試樣移入反應(yīng)器內(nèi)。在某些情況下，如用于直接免疫熒光法，可用采樣器將樣本直接涂到檢驗(yàn)表面，如顯微法的載玻片上。反應(yīng)器可以包括一種或多種檢驗(yàn)試劑以便于從刷子的刷毛上釋放粘附的樣本?？捎貌蓸悠骰蛩⒆踊旌蠙z驗(yàn)試劑或樣本。根據(jù)樣本刷子可能需要有外部攪拌(如攪動(dòng)，搖動(dòng)或變形)使樣本所有的等分試樣都進(jìn)入反應(yīng)混合物。一種便利的方法是將采樣器或反應(yīng)液放入一個(gè)柔韌的聚丙烯試管內(nèi)，使用者可以擠壓試管的邊，并且因此刷子的刷毛變形。由于刷子變形時(shí)，樣本的等分試樣就能釋放出來(lái)。一旦獲得了均勻的混合物，就可以處理采樣器了。處理必須符合由所分析的樣本類(lèi)型決定的規(guī)則和環(huán)境要求。然后就得到了根據(jù)預(yù)先選定的分析方法，可以用于分析的檢驗(yàn)液。
實(shí)施例2采樣方法的用途多種采樣條件給可能的采樣器提供了多種樣本稠度。以下實(shí)例闡述了聲明的方法的用途，但并不想加以限定。采樣器可以用來(lái)獲得先前采集的樣本的等分試樣，或者采樣器可用來(lái)從燒傷或創(chuàng)傷部位或鼻道直接采集樣本用于進(jìn)一步培養(yǎng)或分析，或者直接從制備容器中采集。采樣器不應(yīng)留下纖維，如從拭子進(jìn)入體內(nèi)的采集部位。
制備過(guò)程可產(chǎn)生一種粘性或固體成分不同的料漿。在下一步制備過(guò)程之前或處理或進(jìn)行處理之前有必要確定料漿的成分，如料漿內(nèi)一種或多種成分的功能。樣本可以是從藥物制備過(guò)程中得到的中間合成的料漿，料漿需用分析方法檢驗(yàn)，如測(cè)定活性藥物成分比率的HPLC法。
土壤樣本取決于樣本區(qū)域的水分含量以及污染物可以有不同的稠度。因此樣本可能是一種污染的土壤樣本，從中可提取或分析一種或多種污染物，以指導(dǎo)去污過(guò)程?？梢詼y(cè)定采礦點(diǎn)的尾礦中殘留的貴金屬或毒性物質(zhì)。也可以測(cè)定在處理過(guò)程中的礦物料漿的回收率，污染物等。采樣方法也可用于啤酒或酒發(fā)酵過(guò)程中使用的酵母糊的收集。也可以測(cè)定酵母糊中污染物和/或生物體的生存力?；钚晕镔|(zhì)可回收到發(fā)酵罐中用于下一次發(fā)酵過(guò)程。在藥物發(fā)酵過(guò)程中，可以采集或測(cè)定制藥的重組生物體的污染物和/或生存力。采樣方法也可用于檢驗(yàn)未加工的肉中的細(xì)菌或其他類(lèi)型的污染物。本采樣方法還可以在終包裝前或通過(guò)選擇性采樣終包裝，用于采樣其它類(lèi)型的加式食品和飲料，尤其是嬰兒食品。優(yōu)選的應(yīng)用是糞便的采樣和傳送。
遇到不同稠度的樣本的采樣問(wèn)題的實(shí)例通過(guò)糞便樣本來(lái)闡明。在多種疾病中，糞便樣本的采集很重要。例如，隱血提示結(jié)腸或直腸癌或癌前病變。安全的手柄和到測(cè)定方法的糞便樣本的有效傳送很困難。糞便樣本，尤其伴腹瀉時(shí)，可以從有形的糞便變化到非常稀松的，稠度幾乎是液體的糞便。本發(fā)明提供了一種單向的傳送系統(tǒng)來(lái)說(shuō)明在臨床所見(jiàn)樣本的不同稠度的樣本的采集，以便將糞便樣本的液體和固體成分中存在的感興趣的被分析物傳送到測(cè)定方法。
痰液代表了另外一種難以采集的生物來(lái)源的物質(zhì)，因?yàn)槠湔扯炔煌?。檢測(cè)痰液有利于呼吸道感染的檢查。呼吸道感染的類(lèi)型包括結(jié)核，呼吸道合胞病毒(RSV)以及流感病毒。本方法對(duì)采集痰液特別有用。
實(shí)施例3艱難梭菌毒素的測(cè)定優(yōu)選的被分析物是艱難梭菌產(chǎn)生的毒素，一種已知的在某些患病人群中腹瀉的致病因子。毒素的測(cè)定可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞毒性測(cè)定法，免疫測(cè)定法，或最優(yōu)選用已知的方法如光學(xué)免疫測(cè)定法(OIA)(見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5,486,606，美國(guó)專(zhuān)利5,541,057，美國(guó)專(zhuān)利5,550,063)。
為了進(jìn)行艱難梭菌毒素的光學(xué)免疫測(cè)定，需要下列成分。首先須選擇一種光學(xué)基片。選擇已知折射率的反射光學(xué)基片如硅或涂有非晶形硅的玻璃用于這種測(cè)定。因?yàn)檫@種檢驗(yàn)是設(shè)計(jì)成單獨(dú)應(yīng)用的，優(yōu)選定量測(cè)定一種可視的信號(hào)判讀。為了產(chǎn)生可視信號(hào)，光學(xué)基片上必須涂有抗-反射(AR)層。為了下一個(gè)生物層的存在，選作AR層的物質(zhì)必須通過(guò)折射率同光學(xué)基片相關(guān)，而且必須調(diào)整其理論厚度(用標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)計(jì)算來(lái)確定)。AR層可以是氮化硅，氮氧化硅，一氧化硅，二氧化鋯、二氧化鈦以及其它同樣適合制造這種涂層的物質(zhì)。在這種情況下，使用的是沉淀的氮化硅蒸氣。
當(dāng)設(shè)計(jì)光學(xué)儀時(shí)，一種分支結(jié)構(gòu)的硅氧烷的吸附層被施加到光學(xué)表面。這個(gè)吸附層可以制造一種環(huán)境，有助于生物俘獲試劑的吸附，保留和穩(wěn)定。這種俘獲試劑或接受物質(zhì)可以選自任何一種與感興趣的被分析物發(fā)生特定反應(yīng)的生物組合物。在這種情況下，是針對(duì)艱難梭菌產(chǎn)生的毒素的多克隆抗體。通過(guò)將涂有吸附層的光學(xué)儀浸入含抗體的溶液中一預(yù)定的時(shí)間施加抗體層。當(dāng)光學(xué)儀從涂層溶液中取出時(shí)，用蒸餾水沖洗，干燥，為了更加穩(wěn)定，再加涂一層保護(hù)層。然后將完成了的光學(xué)儀插入檢驗(yàn)表面上，并插入塑料測(cè)定儀(plastic assay device)上。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員按照美國(guó)專(zhuān)利5,418,136所公開(kāi)的能夠制作其它的也可以產(chǎn)生可視信號(hào)的光學(xué)免疫測(cè)定儀，這些光學(xué)免疫測(cè)定儀產(chǎn)生能被儀器讀出的信號(hào)。
艱難梭菌的光學(xué)免疫測(cè)定(CdTOX A OIA)按如下步驟進(jìn)行。將采樣刷插入糞便樣本并旋轉(zhuǎn)以使刷毛里盛滿(mǎn)糞便物質(zhì)。刷子的刷毛載滿(mǎn)糞便后，將它從糞便中移開(kāi)，靠著樣本容器的壁旋轉(zhuǎn)以去掉多余物質(zhì)。然后將刷子移送到裝有300μl抗體——酶結(jié)合物的柔韌的聚丙烯反應(yīng)試管中。用刷子混合樣本和結(jié)合物，將試管擠出，然后將刷子丟掉。將一或兩滴樣本/結(jié)合物混合物滴至OIA表面然后在室溫下孵育5分鐘，來(lái)進(jìn)行OIA測(cè)定。如果樣本中存在艱難梭菌毒素，在酶結(jié)合物，毒素和結(jié)合在OIA表面的抗體間會(huì)形成一種復(fù)合物。用緩沖鹽溶液流沖洗OIA表面，然后將它吸干。在OIA表面加入一滴沉淀酶的底物，然后在室溫下孵育5分鐘。如果先前所述的復(fù)合物存在，酶將與底物相互作用形成沉淀產(chǎn)物。沉淀物的存在將在OIA表面產(chǎn)生一個(gè)可光學(xué)檢測(cè)的薄膜。
實(shí)施例4采樣刷的用途對(duì)4種不同大小(見(jiàn)表1)的可以買(mǎi)到的刷子采集懸浮液的性能進(jìn)行了比較。使用的刷子是醫(yī)療設(shè)備公司(MPC)(Camarillo，CA)的短的和標(biāo)準(zhǔn)的(std)及Oosina(Englewood，N.J.)的短的和標(biāo)準(zhǔn)的。刷子用來(lái)采集懸浮液，懸浮液由蛋白質(zhì)，顆粒和其它物質(zhì)組成，以使樣本的粘度同腹瀉樣本的類(lèi)似。樣本的稠度是一種稠的糊狀物。在艱難梭菌的測(cè)定中，采集上述的懸浮液使用了10把每種類(lèi)型的刷子。從裝有糞便的刷子中減去刷子本身的重量，計(jì)算和報(bào)告出采集的物質(zhì)的重量(見(jiàn)表1)。％CV表示用平均值除以標(biāo)準(zhǔn)差，是采樣誤差的測(cè)量。如表1所示，刷子俘獲的樣本的量(等分試樣)隨刷子的式樣而變化，另人吃驚的是，應(yīng)用一把刷子采集樣本的方法對(duì)樣本的采集影響很小，即可以得到采集樣本的可重現(xiàn)的量。
表1
其它實(shí)施方案在權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1.一種方法，包括將糞便樣本的糞便積累在采樣器的采集部分，將所述采樣器的包括積累的糞便的采樣部分與試劑溶液接觸，和在所述采樣器的采樣部分被置于柔韌的容器中并且與所述試劑溶液接觸的情況下，通過(guò)對(duì)所述柔韌的容器的壁施加壓力，通過(guò)所述柔韌的容器的所述壁來(lái)操作所述采集部分。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述接觸是在所述柔韌的容器中進(jìn)行的，并且所述試劑溶液已經(jīng)存在于所述柔韌的容器中。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述采集部分包括刷子，操作所述采集部分包括通過(guò)所述柔韌的容器操作所述刷子的刷毛。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述積累包括，在所述刷子與所述糞便樣本接觸的情況下，相對(duì)于所述糞便樣本旋轉(zhuǎn)所述刷子。
5.權(quán)利要求1的方法，其中操作所述采集部分形成了混合物，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)存在于所述混合物中的分析物進(jìn)行測(cè)定。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述分析物是艱難梭菌(Clostridiumdifficile)毒素。
7.權(quán)利要求5的方法，其中進(jìn)行所述測(cè)定包括，將存在于所述混合物中的物質(zhì)與表面接觸，然后通過(guò)光學(xué)測(cè)定所述表面的性質(zhì)。
8.權(quán)利要求7的方法，其中光學(xué)測(cè)定所述表面的性質(zhì)包括，測(cè)定與所述表面的反射率或偏振相關(guān)的值，所述表面的所述反射率或偏振與所述分析物的存在與否相關(guān)。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述測(cè)定是光學(xué)免疫測(cè)定。
10.一種方法，包括相對(duì)于糞便樣本的糞便，旋轉(zhuǎn)采樣器的刷子，從而將所述樣本糞便積累在所述采樣器的所述刷子的刷毛間，將包括積累的糞便的刷毛與存在于柔韌的容器中的試劑溶液接觸，在所述刷毛被置于柔韌的容器中并且與所述試劑溶液接觸的情況下，通過(guò)對(duì)所述柔韌的容器的壁施加壓力，通過(guò)所述柔韌的容器的所述壁來(lái)操作所述刷毛，從而形成包含積累的糞便和所述試劑的混合物，和對(duì)存在于所述混合物中的分析物進(jìn)行測(cè)定。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述分析物是艱難梭菌毒素。
12.權(quán)利要求10的方法，其中進(jìn)行所述測(cè)定包括，將存在于所述混合物中的物質(zhì)與表面接觸，然后通過(guò)光學(xué)測(cè)定所述表面的性質(zhì)。
13.權(quán)利要求10的方法，其中光學(xué)測(cè)定所述表面的性質(zhì)包括，測(cè)定與所述表面的反射率或偏振相關(guān)的值，所述表面的所述反射率或偏振與所述分析物的存在與否相關(guān)。
全文摘要
一種用于測(cè)定方法的提供包含液體和固體成分的樣本的等分試樣的方法，該方法包括使所述樣本與采樣器接觸，該采樣器被裝配成根據(jù)所述樣本的液體和固體成分的比例獲取所述樣本的液體和固體成分，在所述采樣器獲取到所述樣本的所述等分試樣的條件下；并提供所述等分試樣用于測(cè)定方法。
文檔編號(hào)G01N33/554GK101025421SQ20071013598
公開(kāi)日2007年8月29日 申請(qǐng)日期1999年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月29日
發(fā)明者J·W·斯蒂芬斯 申請(qǐng)人:熱生物之星公司