專利名稱：：一種原料乳及乳粉中糊精摻假檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，特別涉及一種原料乳及乳粉中糊精摻假檢測(cè)方法。屬于化學(xué)成份檢測(cè)的
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：目前關(guān)于原料乳及乳粉織艮檢測(cè)的國(guó)標(biāo)方法很有限，不能滿足實(shí)際需求，不能4艮好的控制揭^叚奶的入廠。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中現(xiàn)在還沒有關(guān)于原料乳及乳粉中糊精織艮的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，雖然市場(chǎng)上有一些糊精摻假的檢測(cè)方法在應(yīng)用，但大都是定性方法，或是試劑不公開的壟斷方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是開發(fā)一種原料乳及乳粉中糊精剩叚檢測(cè)方法，其檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)準(zhǔn)確度高，而且成本低廉。本發(fā)明的技術(shù)方案如下1材料準(zhǔn)備1.1空白乳樣或空白乳粉取感官、理化指標(biāo)均可靠的進(jìn)口全脂淡乳粉為空白乳粉樣。在定量檢測(cè)中用于配制標(biāo)準(zhǔn)糊精(濃度梯度)乳液，在定性檢測(cè)中配制標(biāo)準(zhǔn)陽性乳液和空白對(duì)照乳液。1.2標(biāo)準(zhǔn)糊精盡可能地多取全國(guó)各廠家的糊精樣品，等比例混合均勻，干燥備用，定性檢測(cè)中有一種糊精作為對(duì)照即可。1.3標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣和標(biāo)準(zhǔn)糊精復(fù)原乳樣即摻有不同百分比濃度糊精的標(biāo)準(zhǔn)乳粉樣(w/w)和復(fù)原乳樣(w/v)。定量檢測(cè)中用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見表l1.4冰乙酸、50°/。三氯乙酸溶液、無水乙醇。1.5光柵分光光度計(jì)，高速離心才幾。2方法步驟2.1乳粉樣的檢測(cè)稱取待測(cè)乳粉樣10.OOOg,用溫蒸餾水充分溶解并定容到100ml，制成復(fù)原乳樣，再吸取10ml復(fù)原乳樣定容到50ml,混勻。在4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15分鐘，用干凈干燥的4層紗布濾除脂肪，收集濾液；取5ml濾液力。0.23ml水乙酸振蕩搖勻，再加0.6ml的50°/。三氯乙酸溶液搖勻后，在4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15分鐘；取離心后的上清液1.5ml加入4.5ml無水乙醇，充分搖勻，15min后上分光光度計(jì)，在60Gnm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度(OD)值2.2原料乳樣的檢測(cè)稱取4寺測(cè)原料乳樣取10ml定容到50ml,混勻；在4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15分鐘，用干凈干燥的4層紗布濾除脂肪5收集濾液^取5ml濾液力。0.23ml水乙酸振蕩搖勻，再加0.6ml的50%三氯乙酸溶液搖勻后，在4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15分鐘；取離心后的上清液1.5ml加入4.5ml無水乙醇，充分搖勻，15min后上分光光度計(jì)，在600nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度(OD)值2.3定性檢測(cè)取待測(cè)樣的1.5ml上清液于小試管中，沿管壁輕輕加入4.5ml無水乙醇，界面有白色沉淀產(chǎn)生，搖勻后仍為均勻渾濁者為糊精陽性。3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立3.1標(biāo)準(zhǔn)糊精乳液的配制取100ml燒杯按表1編號(hào)并準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)糊精和空白乳粉，然后加適量的溫?zé)岬恼翩y水(約30—50ml，最好用雙蒸水)充分溶解，待冷卻到室溫分別倒入事先編號(hào)的100ml容量瓶?jī)?nèi)，用少量的蒸餾水充分沖涮燒杯并將沖涮液全部移入相應(yīng)的容量并瓦內(nèi)，最后加蒸餾水定容到刻度。3.2前處理然后按2.2所示的操作程序進(jìn)行前處理，去除脂肪、酪蛋白和其他低分子蛋白、肽和乳中固有低聚糖等干擾物質(zhì)，制備澄清透明待測(cè)乳清液。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制處理好的糊精乳清液上分光光度計(jì)，在600nm波長(zhǎng)下比濁，記錄各標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度(OD)值，以吸光度(OD)值為縱坐標(biāo)，以糊精摻假濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程和相關(guān)系數(shù)，若R2<0.998(最好能做到0.999以上)，則標(biāo)準(zhǔn)曲線不合格，需重做。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>4注意事項(xiàng)4.l反應(yīng)到規(guī)定時(shí)間進(jìn)行比色，比色時(shí)空白與樣品用同一個(gè)比色皿。4.2做曲線時(shí)用一元二次回歸，吸光度值(OD)值范圍盡量大一點(diǎn)，取O.1—l這個(gè)范圍，超過1需重做。4.3標(biāo)準(zhǔn)糊精的品種越多越好，充分混勻后稱量一定要準(zhǔn)確。4.4做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一條專門用于測(cè)奶粉(橫坐標(biāo)為0%,2.5%，5%，7.5%,10%,12.5%,15%),—條專門用于測(cè)原奶(橫坐標(biāo)為0%,0.25%,0.5%,0.75%,1.0%,1.25%，1.5%)。4.5本方法因受方法誤差和分光光度計(jì)的儀器誤差所限，樣品檢測(cè)時(shí)，在吸光度值小于0.005時(shí)，不計(jì);險(xiǎn)出。只有當(dāng)吸光值>0.005時(shí)，判定為檢出糊精。實(shí)施方案的結(jié)果與討論本項(xiàng)發(fā)明通過實(shí)施，對(duì)檢出限、回收率、以及陰陽性樣品檢驗(yàn)的驗(yàn)證，得出結(jié)論，本項(xiàng)發(fā)明的檢測(cè)方法檢出限低、回收效果好、成本低廉，優(yōu)于市場(chǎng)上現(xiàn)有的關(guān)于原料奶和乳;盼中糊并fr織叚;險(xiǎn)測(cè)的方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是一種定量檢測(cè)方法，檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)準(zhǔn)確度高，成本低廉。具體實(shí)施方式實(shí)施例l.標(biāo)準(zhǔn)曲線建立根據(jù)檢測(cè)方法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的原始數(shù)據(jù)如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>得出標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算公式為y=-0.0599x2+0.6232x-0.0109，曲線相關(guān)性為R2=0.99842.檢出限計(jì)算吸光度為0.005時(shí)，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出，本方法針對(duì)原料乳的檢出限為0.025%,針對(duì)乳粉的檢出限為0.25%。3.回收率—驗(yàn)iiL:人為摻入不同含量的糊精，用該方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>該方法平均回收率可達(dá)98％，完全滿足使用要求。4.檢測(cè)實(shí)例結(jié)構(gòu)隨機(jī)抽取牛體原料奶陰性樣品，用該方法進(jìn)行檢測(cè)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>人為向原料奶中隨機(jī)加入未知量的糊精，制成糊精摻假陽性樣品，用該方法進(jìn)4亍4企測(cè)樣品名稱吸光度值糊精摻假量<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>5.檢驗(yàn)成本單個(gè)樣品的檢驗(yàn)成本約為0.03元，具體計(jì)算如下:冰乙酸0.004元三氯乙酸溶液0.02元無水乙醇0.005元共計(jì)0.029元。權(quán)利要求1.一種原料乳及乳粉中糊精摻假檢測(cè)方法，其特征在于按照如下步驟進(jìn)行檢測(cè)1)制備空白原乳樣品或空白乳粉樣品；2)制備標(biāo)準(zhǔn)糊精；3)制備標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣品和標(biāo)準(zhǔn)糊精復(fù)原乳樣品；4)分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣品和標(biāo)準(zhǔn)糊精復(fù)原乳樣品進(jìn)行處理后，用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度(OD)值，得到含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；5)對(duì)被檢測(cè)的原料乳或乳粉的乳樣品進(jìn)行與步驟4中相同的處理和測(cè)量，即可定量得知被檢測(cè)的原乳或乳粉的乳樣品的糊精含量。2.如權(quán)利要求1所述的原料乳及乳粉中糊精#^叚檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟4和5中標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣品和被4企測(cè)乳粉的乳樣品的處理和4企測(cè)方法如下將樣品10g定容到50-500ml，優(yōu)選100ml，然后直接離心或稀釋后離心，進(jìn)行脫脂，加水醋酸并混合，水醋酸加入量為與^f羊品體積比為5:(0.1-0.4)，再加入體積比例為0.1-0.8優(yōu)選0.6的三氯乙酸溶液，搖勻后離心，取出上清液加入無水乙醇，上清液與無水乙醇的體積比例是l:1-5,優(yōu)選l:3，放置5-30分鐘，優(yōu)選15分鐘；上分光光度計(jì)測(cè)吸光度(OD)值。3.如權(quán)利要求1所述的原料乳及乳粉中糊精駒叚;險(xiǎn)測(cè)方法，其特征在于所述步驟4和5中標(biāo)準(zhǔn)糊精原料乳樣品和被;險(xiǎn)測(cè)原料乳的乳樣品的處理和4企測(cè)方法如下將樣品或稀釋后的樣品離心，進(jìn)行脫脂，加冰醋酸并混合，水醋酸加入量為與樣品體積比為5:(0.1-0.4)，再加入體積比例為0.1-0.8優(yōu)選0.6的三氯乙酸溶液，搖勻后離心，取出上清液加入無水乙醇，上清液與無水乙醇的體積比例是l:1-5，優(yōu)選l:3，放置5-30分鐘，優(yōu)選15分鐘；上分光光度計(jì)測(cè)吸光度(OD)值。4.如權(quán)利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精,叚檢測(cè)方法，其特征在于所述脫脂步驟中，脂肪用干凈干燥的多層紗布過濾，優(yōu)選4層以上。5.如權(quán)利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精樹叚檢測(cè)方法，其特征在于所述離心的條件為2000-5000轉(zhuǎn)/分鐘下離心5-30分鐘，優(yōu)選4000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15分鐘。6.如權(quán)利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精刺叚檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟4和5中三氯乙酸溶液的質(zhì)量體積百分比濃度為1-75%,優(yōu)選50%。7.如權(quán)利要求2或3所述的原料乳及乳粉中糊精摻假檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟4和5中上分光光度計(jì)測(cè)吸光度(OD)值時(shí)的波長(zhǎng)要求為200-1000nm，優(yōu)選600nm。全文摘要本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，特別涉及一種原料乳及乳粉中糊精摻假檢測(cè)方法，屬于化學(xué)成分檢測(cè)的
技術(shù)領(lǐng)域：
。按照如下步驟進(jìn)行檢測(cè)制備空白原乳樣品或空白乳粉樣品；制備標(biāo)準(zhǔn)糊精；制備標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣品和標(biāo)準(zhǔn)糊精復(fù)原乳樣品；分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)糊精乳粉樣品和標(biāo)準(zhǔn)糊精復(fù)原乳樣品進(jìn)行處理后，用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度(OD)值，得到含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；對(duì)被檢測(cè)的原乳或乳粉的乳樣品進(jìn)行與步驟4中相同的處理和測(cè)量，即可定量得知被檢測(cè)的原乳或乳粉的乳樣品的糊精含量。文檔編號(hào)G01N33/02GK101118213SQ20071015196公開日2008年2月6日申請(qǐng)日期2007年9月24日優(yōu)先權(quán)日2007年9月24日發(fā)明者王丹慧申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團(tuán))股份有限公司