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      濃度測(cè)定方法

      文檔序號(hào):5837837閱讀:176來(lái)源:國(guó)知局

      專(zhuān)利名稱(chēng)::濃度測(cè)定方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      :本發(fā)明涉及根據(jù)來(lái)自含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的反應(yīng)體系的輸出值和測(cè)量線(xiàn)(表示測(cè)量對(duì)象物質(zhì)濃度和輸出值的關(guān)系的曲線(xiàn)),進(jìn)行測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算的濃度測(cè)定方法。
      背景技術(shù)
      :測(cè)定尿等試樣中的抗原濃度的方法有將抗原抗體反應(yīng)與光學(xué)方法組合使用的方法。在該方法中,是將試樣和抗體混合引發(fā)抗原抗體反應(yīng),根據(jù)向該反應(yīng)體系照射光時(shí)的吸光度,進(jìn)行濃度計(jì)算。在該方法中,可以看到當(dāng)反應(yīng)體系的抗原濃度在較小范圍內(nèi)時(shí),隨著濃度增大,測(cè)得的吸光度也增大;反之,當(dāng)反應(yīng)體系的抗原濃度在較大范圍吋,隨著濃度的增大,測(cè)得的吸光度減小的現(xiàn)象(前帶現(xiàn)象)。這種現(xiàn)象不僅出現(xiàn)在利用抗原抗體反應(yīng)的情況下,就是在整個(gè)生化學(xué)領(lǐng)域也能觀察到(下文中,包括生化學(xué)領(lǐng)域,將該現(xiàn)象稱(chēng)為"前帶現(xiàn)象")。在產(chǎn)生前帶現(xiàn)象的反應(yīng)體系中,出現(xiàn)了盡管實(shí)際測(cè)量對(duì)象成分的濃度大,但因測(cè)定的吸光度小,使得計(jì)算結(jié)果小于實(shí)際濃度的問(wèn)題。為解決這種問(wèn)題,例如需要在稀釋試樣的基礎(chǔ)上重新測(cè)定吸光度。但是,鑒于抗原價(jià)格高,不宜對(duì)同一檢測(cè)試樣反復(fù)進(jìn)行測(cè)定,當(dāng)然,考慮到操作性時(shí),則操作次數(shù)越少越好。并且,測(cè)定尿中葡萄糖濃度等時(shí),即使不產(chǎn)生前帶現(xiàn)象,也有高濃度下分辨率降低的問(wèn)題。因此,即使在未產(chǎn)生前帶現(xiàn)象的反應(yīng)體系中,也有高濃度區(qū)域中測(cè)定精度差的問(wèn)題。
      發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于簡(jiǎn)便而廉價(jià)地抑制因前帶現(xiàn)象的影響和高濃度區(qū)域中的分辨率降低導(dǎo)致的高濃度試料液的測(cè)量精度下降。由本發(fā)明第一方面提供的濃度測(cè)定方法是根據(jù)來(lái)自含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)以及能與該物質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)的反應(yīng)物的反應(yīng)體系的輸出值,從多條測(cè)量線(xiàn)中選出最適于上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算的最優(yōu)測(cè)量線(xiàn),并且根據(jù)該最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)和上述輸出值進(jìn)行上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)濃度計(jì)算的濃度測(cè)定方法,其特征在于,上述各測(cè)量線(xiàn)是對(duì)含有己知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑和上述反應(yīng)物的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系的輸出值分別用濃度不同的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試劑,以相同反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)此時(shí)得到的多個(gè)輸出值制成的,上述多條測(cè)量線(xiàn)是以相互不同的反應(yīng)時(shí)間為基礎(chǔ)制成的。在優(yōu)選實(shí)施方式中,上述多條測(cè)量線(xiàn)分為預(yù)測(cè)上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)濃度大于預(yù)先設(shè)定的濃度用閾值時(shí)選用的第一測(cè)量線(xiàn)和預(yù)測(cè)小于上述濃度用閾值時(shí)選用的第二測(cè)量線(xiàn)。并且,上述第一測(cè)量線(xiàn)根據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和上述反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)的反應(yīng)初期階段測(cè)定的輸出值制成,上述第二測(cè)量線(xiàn)根據(jù)晚于測(cè)定上述第一測(cè)量線(xiàn)制作基礎(chǔ)的輸出值時(shí)測(cè)定的輸出值制成。此時(shí),預(yù)測(cè)使用第二測(cè)量線(xiàn)計(jì)算的第二濃度計(jì)算值大于濃度用閾值時(shí),優(yōu)選為將使用第一測(cè)量線(xiàn)計(jì)算的第一濃度計(jì)算值與第二濃度計(jì)算值進(jìn)行比較,將較大的計(jì)算值用作最終計(jì)算值。反之,預(yù)測(cè)第二計(jì)算值小于濃度用閾值時(shí),優(yōu)選為判斷第二濃度計(jì)算值是否反映了測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度。此時(shí),當(dāng)?shù)诙舛扔?jì)算值反映了測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度時(shí),優(yōu)選為將第二濃度計(jì)算值用作最終計(jì)算值;而當(dāng)?shù)诙舛扔?jì)算值未能反映測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度時(shí),將使用第一測(cè)量線(xiàn)計(jì)算的第一濃度計(jì)算值用作最終計(jì)算值。另一方面,也可根據(jù)使用第一測(cè)量線(xiàn)計(jì)算的第一濃度計(jì)算值決定選擇第一測(cè)量線(xiàn)還是第二測(cè)量線(xiàn)。例如,當(dāng)預(yù)測(cè)第一濃度計(jì)算值大于濃度用閾值時(shí),將第一濃度計(jì)算值用作最終計(jì)算值。反之,當(dāng)預(yù)測(cè)第一濃度計(jì)算值小于濃度用閾值時(shí),將使用第二測(cè)量線(xiàn)計(jì)算的第二濃度計(jì)算值用作最終計(jì)算值。預(yù)測(cè)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度是大于還是小于濃度用閾值也可根據(jù)例如輸出值是大于還是小于預(yù)定的輸出值用閾值來(lái)進(jìn)行。濃度計(jì)算用閾值的濃度例如可設(shè)定在第二測(cè)量線(xiàn)的線(xiàn)性高的濃度范圍內(nèi),或設(shè)定為對(duì)應(yīng)于第一測(cè)量線(xiàn)和第二測(cè)量線(xiàn)的交點(diǎn)的濃度。本發(fā)明中也可以準(zhǔn)備3條以上的多條測(cè)量線(xiàn),從中選擇最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)。即,多條測(cè)量線(xiàn)也可以分別根據(jù)不同濃度的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試劑在每一段預(yù)定時(shí)間,在多個(gè)(3個(gè)以上)測(cè)量點(diǎn)測(cè)定的含有已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑和上述反應(yīng)物的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系的輸出值,由各個(gè)測(cè)量點(diǎn)制成。此時(shí)的最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)的選擇,優(yōu)選為根據(jù)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和反應(yīng)物在反應(yīng)初期階段的時(shí)間范圍內(nèi)測(cè)定的輸出值進(jìn)行。本發(fā)明第二側(cè)面是提供根據(jù)來(lái)自含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和能與該物質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)的反應(yīng)物的反應(yīng)體系的輸出值,以及表示上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度和輸出值關(guān)系的測(cè)量線(xiàn)進(jìn)行上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算的濃度測(cè)定方法,其特征在于,上述測(cè)量線(xiàn)為分別對(duì)濃度不同的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試劑在特定時(shí)間范圍內(nèi)按照時(shí)間測(cè)定含有已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑和上述反應(yīng)物的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系的輸出值,根據(jù)使用各濃度標(biāo)準(zhǔn)試劑時(shí)輸出值的最大值的集合而制成。本發(fā)明的第三側(cè)面提供根據(jù)向含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)以及可與該物質(zhì)反應(yīng)的反應(yīng)物的反應(yīng)體系照射光時(shí)的輸出值,以及表示上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度和輸出值關(guān)系的測(cè)量線(xiàn),進(jìn)行上述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算的濃度測(cè)定方法,其特征在于,上述測(cè)量線(xiàn)由根據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與上述反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)的初期階段測(cè)得的輸出值制成的第一測(cè)量線(xiàn),和根據(jù)晚于測(cè)定上述第一測(cè)量線(xiàn)制作基礎(chǔ)的輸出值時(shí)測(cè)定的輸出值制成的第二測(cè)量線(xiàn)復(fù)合制成,并且上述測(cè)量線(xiàn),在大于相當(dāng)于上述第一測(cè)量線(xiàn)和上述第二測(cè)量線(xiàn)交點(diǎn)的交點(diǎn)濃度的濃度區(qū)域,采用大于上述第二測(cè)量線(xiàn)中上述交點(diǎn)濃度的濃度區(qū)域部分;而在小于上述交點(diǎn)濃度的濃度區(qū)域,采用小于上述第一測(cè)量線(xiàn)中上述交點(diǎn)濃度的濃度區(qū)域部分。本發(fā)明中的輸出值,可由向反應(yīng)體系照射光時(shí)的響應(yīng)值(光學(xué)響應(yīng)值)得到。當(dāng)然,也可為給反應(yīng)體系加電壓或通電流時(shí)的電學(xué)響應(yīng)值。在本發(fā)明中,"光學(xué)響應(yīng)值"包括吸光度、濁度、滲透率等概念。吸光度除在反應(yīng)容器內(nèi)設(shè)定液相反應(yīng)體系時(shí),根據(jù)透過(guò)液相反應(yīng)體系的光的光量決定外,還包括反應(yīng)體系被固定形成于多孔質(zhì)體等固相的情況,根據(jù)來(lái)自固相的反射光的光量決定。.5圖1A和圖IB為光學(xué)響應(yīng)值測(cè)定方法的示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施方式1的濃度計(jì)算中所用的第一和第二測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)的示意圖。圖3為不同濃度的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的吸光度隨時(shí)間變化的示意圖。圖4為標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)液的動(dòng)態(tài)范圍的示意圖。圖5為用于說(shuō)明濃度計(jì)算程序的一例的流程圖。圖6為用于說(shuō)明濃度計(jì)算程序的其它例的流程圖。圖7為本發(fā)明實(shí)施方式2的濃度計(jì)算所用多條測(cè)量線(xiàn)(A)(H)的示意圖。圖8為用于說(shuō)明濃度計(jì)算程序的一例的示意圖。圖9為用于說(shuō)明測(cè)量線(xiàn)(a)的示意圖。具體實(shí)施例方式下面,參照附圖具體說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。本發(fā)明涉及根據(jù)向反應(yīng)體系照射光時(shí)的光學(xué)響應(yīng)值和測(cè)量線(xiàn),進(jìn)行測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算的方法。本文的測(cè)量線(xiàn)用于表示測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度和光學(xué)響應(yīng)值的關(guān)系,至少包括以函數(shù)表示的關(guān)系和以圖表表示的關(guān)系。反應(yīng)體系含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和能與該物質(zhì)反應(yīng)的反應(yīng)物。該反應(yīng)體系根據(jù)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)與反應(yīng)物反應(yīng)生成的反應(yīng)生成物的量,使色調(diào)和濁度等發(fā)生變化。結(jié)果,根據(jù)反應(yīng)進(jìn)行的情況和測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的量,反應(yīng)體系的光學(xué)響應(yīng)狀態(tài)會(huì)發(fā)生變化。該反應(yīng)體系除了如圖1A所示,將反應(yīng)液11保存在容器10內(nèi)的結(jié)構(gòu)之外,有時(shí)也會(huì)如圖1B所示,采用將反應(yīng)液保存在固相20中的結(jié)構(gòu)。固相20由紙、似毛氈一樣的物質(zhì)等吸水性好的材料構(gòu)成。測(cè)量對(duì)象物質(zhì)可以舉出白蛋白、葡萄糖、淀粉酶、肌酸酐等。當(dāng)然,本發(fā)明不僅適用于測(cè)定特定物質(zhì)濃度的情況,也可適用于測(cè)定蛋白質(zhì)、膽甾醇總量等時(shí)的測(cè)定多種類(lèi)似物的合計(jì)量的情況。對(duì)此,反應(yīng)物可使用顯色指示劑,其種類(lèi)可根據(jù)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)進(jìn)行選擇??蓪⑽舛?、濁度、或透光度等用作光學(xué)響應(yīng)值。在圖1A所示的反應(yīng)體系中,來(lái)自發(fā)光元件12的光向反應(yīng)體系照射后透過(guò)的光,由受光元件13接受。在該反應(yīng)體系中,根據(jù)受光元件13的受光量和射入反應(yīng)體系的入射光量(例如,發(fā)光元件12的發(fā)光量)計(jì)算光學(xué)響應(yīng)值。另一方面,在圖1B所示的反應(yīng)體系中,來(lái)自發(fā)光元件21的光向反應(yīng)體系照射后的反射光,由受光元件22接受。在該反應(yīng)體系中,根據(jù)受光元件22的受光量和射入反應(yīng)體系的入射光量(例如,發(fā)光元件21的發(fā)光量)計(jì)算光學(xué)響應(yīng)值。但在圖1B所示的反應(yīng)體系中無(wú)法測(cè)定透光度和濁度,而是測(cè)定吸光度,以此作為光學(xué)響應(yīng)值。本發(fā)明實(shí)施方式1的濃度測(cè)定方法,分別使用較高濃度試樣的測(cè)量線(xiàn)和較低濃度試樣的測(cè)量線(xiàn)進(jìn)行濃度計(jì)算。對(duì)區(qū)別使用兩種測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)的濃度計(jì)算的具體方法將在后文闡述,而在說(shuō)明該方法之前,先對(duì)使用上述兩種測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)的理由進(jìn)行說(shuō)明。圖2表示當(dāng)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)為蛋白質(zhì)(人體血清蛋白)時(shí)的兩種測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)。該測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)用在測(cè)量例如人體尿液中的蛋白質(zhì)濃度等情況時(shí)。測(cè)量線(xiàn)(O使用高濃度蛋白質(zhì)反應(yīng)液(1000mg/dL),并根據(jù)反應(yīng)初期階段測(cè)得的吸光度作成。本發(fā)明的反應(yīng)初期階段是指在高濃度反應(yīng)液內(nèi)的吸光度隨時(shí)間變化時(shí),吸光度最大或接近最大的狀態(tài)下的反應(yīng)階段。另一方面,測(cè)量線(xiàn)(2)使用低濃度蛋白質(zhì)反應(yīng)液(100mg/dL),并根據(jù)反應(yīng)液中達(dá)到反應(yīng)平衡、或在大致達(dá)到反應(yīng)平衡后的反應(yīng)平衡階段測(cè)得的吸光度作成。本發(fā)明的反應(yīng)平衡階段是指在低濃度反應(yīng)液內(nèi)的吸光度隨時(shí)間變化時(shí),吸光度趨進(jìn)一定值或近似于達(dá)到該狀態(tài)的反應(yīng)階段。圖3表示蛋白質(zhì)濃度分別在01000mg/dL范圍內(nèi)時(shí),11種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液各自的與反應(yīng)物反應(yīng)后的吸光度隨時(shí)間的變化。在圖3中,從反應(yīng)開(kāi)始每21.5秒測(cè)量吸光度時(shí),將各測(cè)量點(diǎn)表示為測(cè)量點(diǎn)1、測(cè)量點(diǎn)2。如測(cè)量點(diǎn)10對(duì)應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間為215秒(21.5秒xl0)。測(cè)量點(diǎn)這一用語(yǔ)也用于隨后的說(shuō)明或其它附圖,此時(shí),該用語(yǔ)與上述說(shuō)明中具有同樣意味。測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化時(shí),測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和反應(yīng)物的反應(yīng)原理采用色素金屬結(jié)合法。即,反應(yīng)物使用溴鄰苯三酚紅(色素)和銦(金屬)結(jié)合形成的配位化合物。另一方面,蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液使用的是在健康者尿液中添加人體血清蛋白(HAS),調(diào)制蛋白質(zhì)濃度制成的試樣。吸光度使用全自動(dòng)尿液成分定量分析裝置(AutionMasterUM3410:愛(ài)科來(lái)(株)制),測(cè)量波長(zhǎng)設(shè)定為600nm。由圖3可知,低濃度蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(100mg/dL)在測(cè)量點(diǎn)14、15時(shí),吸光度漸趨于定值,使吸光度呈定值。即,當(dāng)使用低濃度蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(100mg/dL)日寸,在測(cè)量點(diǎn)14、15呈趨于反應(yīng)平衡的狀態(tài)。反之,蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液的蛋白質(zhì)濃度越高、反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng),則吸光度有可能越小。也即,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液的蛋白質(zhì)濃度是400mg/dL以上時(shí),將產(chǎn)生前帶現(xiàn)象。產(chǎn)生該現(xiàn)象的測(cè)量點(diǎn)隨著蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液的蛋白質(zhì)濃度的增大而減小。例如,在中等濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(400mg/dL)的測(cè)量點(diǎn)7,吸光度達(dá)到峰值,而在高濃度蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(1000mg/dL)的測(cè)量點(diǎn)1、2,吸光度達(dá)到峰值。由圖3的結(jié)果可知當(dāng)反應(yīng)液中的測(cè)量對(duì)象物(如蛋白質(zhì))的濃度大時(shí),優(yōu)選使用根據(jù)吸光度達(dá)到峰值前后的時(shí)間范圍內(nèi)測(cè)得的吸光度制成的測(cè)量線(xiàn)(1)(參照?qǐng)D2)。反之,當(dāng)反應(yīng)液中的測(cè)量對(duì)象物(如蛋白質(zhì))的濃度低時(shí),優(yōu)選使用根據(jù)反應(yīng)達(dá)到平衡、或即將達(dá)到平衡前的時(shí)間范圍內(nèi)測(cè)得的吸光度制成的測(cè)量線(xiàn)(2)(參照?qǐng)D2)。根據(jù)參照?qǐng)D3說(shuō)明的理由足以理解為什么區(qū)別使用圖2所示的兩條測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)。但是也有這樣的疑問(wèn)不特地區(qū)別使用兩條測(cè)量線(xiàn)(1)、(2),所有濃度范圍中均采用測(cè)量線(xiàn)(O難道不行么?即,會(huì)對(duì)使用較低濃度的試樣用測(cè)量線(xiàn)的測(cè)量線(xiàn)(2)的使用意義產(chǎn)生疑問(wèn)。該疑問(wèn)可根據(jù)下述動(dòng)態(tài)范圍和重現(xiàn)性的討論結(jié)果而得到解答。動(dòng)態(tài)范圍使用HAS濃度為0或100mg/dL的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液,在測(cè)量點(diǎn)1、2和測(cè)量點(diǎn)14、15,與上述說(shuō)明同樣地測(cè)量了吸光度,以測(cè)量點(diǎn)1、2的平均值和測(cè)量點(diǎn)14、15的平均值的方式對(duì)其進(jìn)行了討論。其結(jié)果如下述表1和圖4所示,與使用測(cè)量線(xiàn)(1)時(shí)相比,使用測(cè)量線(xiàn)(2)時(shí)的動(dòng)態(tài)范圍更大。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>另一方面,使用濃度不同的3名患者的尿液A、B、C測(cè)定吸光度,對(duì)根據(jù)其吸光度分別使用測(cè)量線(xiàn)(1)計(jì)算時(shí)和使用測(cè)量線(xiàn)(2)計(jì)算時(shí)的重現(xiàn)性進(jìn)行了研究。根據(jù)濃度平均值、濃度標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.)和濃度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(C.V.)3項(xiàng)對(duì)重現(xiàn)性進(jìn)行了研究。在研究重現(xiàn)性時(shí),將各患者的尿液A、B、C的試樣數(shù)設(shè)為10,同上所述地測(cè)量了作為濃度計(jì)算基礎(chǔ)的吸光度。下述表2表示上述3項(xiàng)的計(jì)算結(jié)果。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>患者尿液A、B、C為相當(dāng)?shù)偷臐舛?,與使用測(cè)量線(xiàn)(1)時(shí)相比,使用測(cè)量線(xiàn)(2)時(shí)的該低濃度試樣中的標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(C.V)減小。g卩,在低濃度區(qū)域,使用測(cè)量線(xiàn)(2)的重現(xiàn)性好(測(cè)量誤差小)。所以,從動(dòng)態(tài)范圍和重現(xiàn)性的研究結(jié)果可知在低濃度區(qū)域,使用測(cè)量線(xiàn)(2)比使用測(cè)量線(xiàn)(1)的效果好。根據(jù)上述事實(shí),在本實(shí)施方式中,相對(duì)濃度較高的反應(yīng)液,使用根據(jù)測(cè)量點(diǎn)l、2的吸光度平均值制成的測(cè)量線(xiàn)(1);相對(duì)濃度較低的反應(yīng)液,使用根據(jù)測(cè)量點(diǎn)14、15的吸光度平均值制成的測(cè)量線(xiàn)(2)。另外,之所以根據(jù)兩個(gè)測(cè)量點(diǎn)的平均值制成測(cè)量線(xiàn),是為減少因測(cè)量誤差帶來(lái)的影響。下面,參照?qǐng)D2、按照?qǐng)D5所示的流程說(shuō)明本實(shí)施方式的濃度計(jì)算程序。首先,測(cè)量位于測(cè)量點(diǎn)1、2的吸光度(A)和(B)(Sl),同時(shí),測(cè)量位于測(cè)量點(diǎn)14、15的吸光度(a)禾P(b)(S2)。當(dāng)然,也可每隔一定時(shí)間(如每隔21.5秒)測(cè)量吸光度,從其測(cè)量值集合中選取相當(dāng)于測(cè)量點(diǎn)1、2和測(cè)量點(diǎn)14、15的測(cè)量值(吸光度)。然后,計(jì)算測(cè)量點(diǎn)1、2的吸光度(A)、(B)的平均值(C)(S3),根據(jù)該平均值(C)和測(cè)量線(xiàn)(1)計(jì)算第一濃度(D)(S4)。另外,計(jì)算測(cè)量點(diǎn)14、15的吸光度(a)、(b)的平均值(c)(S5),根據(jù)該平均值(c)和測(cè)量線(xiàn)(2)計(jì)算第二濃度(d)(S6)。接著,判斷第二濃度(d)是否大于濃度計(jì)算用閾值(S7)。艮P,預(yù)測(cè)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度是相對(duì)較大還是相對(duì)較小。在本實(shí)施方式中,濃度計(jì)算用閾值設(shè)定在例如兩條測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)均為線(xiàn)性高濃度范圍(200300mg/dL的范圍)內(nèi),或設(shè)定為相當(dāng)于測(cè)量線(xiàn)(1)和測(cè)量線(xiàn)(2)交點(diǎn)的濃度(約400mg/dL)。對(duì)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度是大于還是小于濃度用閾值的預(yù)測(cè),也可不通過(guò)計(jì)算第二濃度(d),而是可根據(jù)光學(xué)響應(yīng)值(如吸光度)是大于還是小于預(yù)定的光學(xué)響應(yīng)值用閾值來(lái)進(jìn)行。當(dāng)判斷第二濃度(d)濃度大于計(jì)算用閾值時(shí)(S7:YES),則比較第--濃度(D)和第二濃度(d)的大小(S8),采用值較大的計(jì)算值(S9,SIO)。即,當(dāng)?shù)谝粷舛?D)大于第二濃度(d)日寸(S8:YES),取第一計(jì)算濃度(D)為最終計(jì)算結(jié)果(S10);而當(dāng)?shù)诙舛?d)大于第一計(jì)算濃度(D)時(shí)(S8:N0),取第二濃度(d)為最終計(jì)算結(jié)果(S9)。如圖2所示,測(cè)量線(xiàn)(2)是根據(jù)產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象時(shí)的吸光度制成的,而測(cè)量線(xiàn)(1)是根據(jù)未產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象時(shí)的吸光度制成的。因此,當(dāng)比較測(cè)量線(xiàn)(1)的計(jì)算結(jié)果和測(cè)量線(xiàn)(2)的計(jì)算結(jié)果后采用較大值時(shí),由于類(lèi)前帶現(xiàn)象,當(dāng)使用測(cè)量線(xiàn)(2)時(shí),在出現(xiàn)的計(jì)算結(jié)果低于實(shí)際濃度值的濃度區(qū)域,采用由測(cè)量線(xiàn)(1)得到的計(jì)算值。由此,計(jì)算就可避免類(lèi)前帶現(xiàn)象的影響。另一方面,當(dāng)判斷第二濃度(d)低于濃度計(jì)算用閾值時(shí)(S7:N0),判斷是由于產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象還是僅由于濃度低導(dǎo)致第二濃度(d)低(Sll)。當(dāng)是由于產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象導(dǎo)致第二濃度(d)低時(shí)(S11:YES),采用測(cè)量線(xiàn)(1)計(jì)算值的第一濃度(D)為最終計(jì)算結(jié)果(SIO)。而當(dāng)未產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象,僅是第二濃度(d)低時(shí)(Sll:NO),則就用第二濃度(d)為最終計(jì)算值(S9)。按照如上所述的程序,當(dāng)使用測(cè)量線(xiàn)(2)時(shí)',對(duì)于受類(lèi)前帶現(xiàn)象影響較大的相對(duì)較高濃度范圍,采用測(cè)量線(xiàn).(O的計(jì)算結(jié)果。因此,根據(jù)區(qū)別使用測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)這種簡(jiǎn)單方法,就可盡可能避免類(lèi)前帶現(xiàn)象的影響,可在不用再次測(cè)定的情況下就能恰當(dāng)?shù)剡M(jìn)行高濃度區(qū)域的計(jì)算。此外,在低濃度區(qū)域,因采用由測(cè)量線(xiàn)(2)計(jì)算的第二濃度(d),正如上述重現(xiàn)性研究結(jié)果所述,低濃度區(qū)域的重現(xiàn)性提高。這種效果也適用于按照?qǐng)D6所示程序進(jìn)行計(jì)算的情況。根據(jù)該濃度計(jì)算程序,首先與圖5所示流程S1S6—樣,計(jì)算第一濃度(D)和第二濃度(d)(S20S25)。然后判斷第一濃度(D)是否大于濃度計(jì)算用閾值(S26)。SP,以第一濃度(D)為基準(zhǔn),將其與濃度計(jì)算用閾值比較,判斷測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度是相對(duì)較大還是較小。在這點(diǎn)上,不同于圖5所示的判斷使用測(cè)量線(xiàn)(2)計(jì)算的第二濃度(d)是否大于濃度計(jì)算用閾值的濃度計(jì)算程序。當(dāng)S26的判斷結(jié)果為第一濃度(D)大于濃度計(jì)算用閾值時(shí)(S26:YES),即判斷濃度相對(duì)較高時(shí),以測(cè)量線(xiàn)(1)計(jì)算結(jié)果的第一濃度(D)為最終計(jì)算結(jié)果(S27)。另一方面,當(dāng)?shù)谝粷舛?D)小于濃度計(jì)算用閾值時(shí)(S26:NO),即判斷濃度相對(duì)較低時(shí),以重現(xiàn)性高的測(cè)量線(xiàn)(2)的計(jì)算結(jié)果的第二濃度(d)為最終計(jì)算結(jié)果(S28)。該濃度計(jì)算程序的優(yōu)點(diǎn)是無(wú)需檢測(cè)類(lèi)前帶現(xiàn)象。另外,在圖6所示的濃度測(cè)定程序中,濃度計(jì)算用閾值也設(shè)定在兩條測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)均為線(xiàn)性高的濃度范圍(200300mg/dL)內(nèi),或設(shè)定為相當(dāng)于測(cè)量線(xiàn)(1)和測(cè)量線(xiàn)(2)交點(diǎn)的濃度(稍高于400mg/dL)。當(dāng)在后者情況下確定濃度計(jì)算用閾值時(shí),結(jié)果,在S27和S28中,在測(cè)量線(xiàn)(1)、(2)的計(jì)算結(jié)果中,將較大值用作最終計(jì)算結(jié)果。也即,比較第一濃度(D)和第二濃度(d)的大小,與將較大值用作最終計(jì)算結(jié)果的結(jié)果相同。與此類(lèi)似的計(jì)算手法,可舉出下述使用測(cè)量線(xiàn)的方法。此時(shí)的測(cè)量線(xiàn)以測(cè)量線(xiàn)(1)和測(cè)量線(xiàn)(2)的交點(diǎn)為界,在較高濃度區(qū)域,采用測(cè)量線(xiàn)(1)的對(duì)應(yīng)部分,而在較低濃度區(qū)域,采用測(cè)量線(xiàn)(2)的對(duì)應(yīng)部分。在此情況下,優(yōu)點(diǎn)是無(wú)需將第一濃度(D)和第二濃度(d)與濃度計(jì)算用閾值比較,也無(wú)需將第一濃度(D)和第二濃度(d)進(jìn)行比較。下面說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施方式2的濃度測(cè)定方法。在該濃度測(cè)定方法中,區(qū)別使用圖7所示的多條測(cè)量線(xiàn)(A)(H)計(jì)算濃度。這些測(cè)量線(xiàn)(A)(H)是根據(jù)制成圖3圖表時(shí)測(cè)定的多個(gè)吸光度測(cè)定值制成的。具體而言,多條測(cè)量線(xiàn)(A)(H)是將多條吸光度測(cè)定值按同樣的測(cè)量點(diǎn)分成各組,按各組(各測(cè)量點(diǎn))制成的。換言之,多條測(cè)量線(xiàn)(A)(H)是按不同的反應(yīng)時(shí)間(多個(gè)測(cè)量點(diǎn))分別制成的。用這些測(cè)量線(xiàn)(A)(H)計(jì)算濃度時(shí),如圖8所示,首先在上述各測(cè)量點(diǎn)測(cè)量吸光度(S30)。然后根據(jù)測(cè)量點(diǎn)1的吸光度,從多條測(cè)量線(xiàn)(A)(H)中選擇最適于進(jìn)行濃度計(jì)算的測(cè)量線(xiàn)(S31)。為此,參照?qǐng)D3可知測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度越大,初始吸光度(測(cè)量點(diǎn)l的吸光度)就越大。因此,根據(jù)初始測(cè)量值,可以恰當(dāng)?shù)仡A(yù)測(cè)測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度。所以,在S31中,可根據(jù)其預(yù)測(cè)值選擇最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)。具體而言,根據(jù)預(yù)測(cè)值越大、測(cè)量點(diǎn)越小(反應(yīng)時(shí)間短)時(shí)的吸光度選擇測(cè)量線(xiàn)。當(dāng)測(cè)量點(diǎn)1的吸光度大、預(yù)測(cè)濃度900mg/dL以上時(shí)。選擇測(cè)量線(xiàn)(A);當(dāng)測(cè)量點(diǎn)1的吸光度小、預(yù)測(cè)濃度150mg/dL以下時(shí),選擇測(cè)量線(xiàn)(H)。最后,根據(jù)最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)和對(duì)應(yīng)該最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)的測(cè)量點(diǎn)實(shí)測(cè)吸光度計(jì)算濃度(S32)。按照如(S31)所述的方法選擇最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)時(shí),對(duì)應(yīng)于該最優(yōu)測(cè)量線(xiàn)的測(cè)量點(diǎn)的吸光度,如圖3所預(yù)測(cè),為吸光度隨時(shí)間變化的最大值或接近最大值。所以,用本實(shí)施方式的計(jì)算方法,就可抑制類(lèi)前帶現(xiàn)象,進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐舛扔?jì)算。在本實(shí)施方式中,需制作多條測(cè)量線(xiàn),但另一方面,卻無(wú)需檢測(cè)類(lèi)前帶現(xiàn)象,也無(wú)需設(shè)定濃度計(jì)算用閾值,也無(wú)需在與該閾值比較的基礎(chǔ)上選擇測(cè)量線(xiàn),所以其優(yōu)點(diǎn)是可簡(jiǎn)化濃度測(cè)定程序。并且,對(duì)于低濃度試樣,由于選擇的是根據(jù)測(cè)量點(diǎn)大(反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng))時(shí)的吸光度制成的測(cè)量線(xiàn),所以測(cè)定低濃度物質(zhì)時(shí)的重現(xiàn)性好。另外,在本實(shí)施方式中,對(duì)使用8個(gè)測(cè)量點(diǎn)制成的測(cè)量線(xiàn)(A)(H)進(jìn)行濃度計(jì)算的情況進(jìn)行了說(shuō)明。而測(cè)量線(xiàn)的數(shù)量既可多于8個(gè),也可少于8個(gè)。且如實(shí)施方式1的濃度測(cè)定方法所述,還可以制成多條測(cè)量線(xiàn),取兩個(gè)測(cè)量點(diǎn)的平均值,用其以同樣程序計(jì)算濃度。在本實(shí)施方式中,以每個(gè)測(cè)量點(diǎn)制成多條測(cè)量線(xiàn),根據(jù)吸光度隨時(shí)間變化的最大值或接近最大值進(jìn)行濃度計(jì)算。與此類(lèi)似的計(jì)算方法,可舉出使用圖9的實(shí)線(xiàn)所示的測(cè)量線(xiàn)(a)的方法。該測(cè)量線(xiàn)(a)是將圖3中的同濃度的多個(gè)離散點(diǎn)的最大吸光度為一集合而制成的。圖9中同時(shí)表示了本發(fā)明實(shí)施方式1中所用的測(cè)量線(xiàn)(1)和測(cè)量線(xiàn)(2)。由圖9可知在相對(duì)較高濃度區(qū)域,測(cè)量線(xiàn)(a)與不產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象的測(cè)量線(xiàn)(1)相關(guān),而在相對(duì)較低濃度區(qū)域,則與重現(xiàn)性高的測(cè)量線(xiàn)(2)相關(guān)。因此,當(dāng)使用測(cè)量線(xiàn)(a)時(shí),則可取得與本發(fā)明實(shí)施方式1同樣的效果。并且,無(wú)需檢測(cè)類(lèi)前帶現(xiàn)象,也無(wú)需選擇測(cè)量線(xiàn)的程序。在上述實(shí)施方式中,舉例說(shuō)明了根據(jù)光學(xué)響應(yīng)值計(jì)算濃度的情況,而本發(fā)明隨著反應(yīng)體系的種類(lèi)不同,也可適用于根據(jù)給反應(yīng)體系加電壓或通電流時(shí)的電響應(yīng)值、隨反應(yīng)進(jìn)行的波數(shù)變化、向反應(yīng)體系照射光和使之波動(dòng)時(shí)的熱響應(yīng)等進(jìn)行計(jì)算的情況。在實(shí)施方式1和2中,舉例說(shuō)明了產(chǎn)生類(lèi)前帶現(xiàn)象的情況,但本發(fā)明也可適用于高濃度區(qū)域中分辨率低的情況。g卩,可適用于使用高濃度區(qū)域中吸光度趨進(jìn)定值的反應(yīng)體系進(jìn)行濃度測(cè)定時(shí),在高濃度區(qū)域下恰當(dāng)?shù)剡M(jìn)行濃度測(cè)定的情況。權(quán)利要求1.一種濃度測(cè)定方法,它根據(jù)來(lái)自含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和能與所述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)反應(yīng)的反應(yīng)物的反應(yīng)體系的輸出值,以及表示所述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度和輸出值關(guān)系的測(cè)量線(xiàn)進(jìn)行所述測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度計(jì)算,其特征在于,所述測(cè)量線(xiàn)是在特定時(shí)間范圍內(nèi),分別對(duì)濃度不同的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試劑測(cè)量含有已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑和所述反應(yīng)物的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系隨時(shí)間變化的輸出值,根據(jù)使用各濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑時(shí)輸出值的最大值的集合制成。2.如權(quán)利要求1所述的濃度測(cè)定方法,其特征在于,所述輸出值為向所述反應(yīng)體系照射光時(shí)的光學(xué)響應(yīng)值。全文摘要本發(fā)明為根據(jù)來(lái)自含有測(cè)量對(duì)象物質(zhì)和反應(yīng)物的反應(yīng)體系的輸出值,從多條測(cè)量線(xiàn)中選擇最適于計(jì)算測(cè)量對(duì)象物質(zhì)濃度的最優(yōu)測(cè)量線(xiàn),并使用該最優(yōu)測(cè)量線(xiàn),根據(jù)輸出值計(jì)算測(cè)量對(duì)象物質(zhì)的濃度的濃度測(cè)定方法。各測(cè)量線(xiàn)是對(duì)含有已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試劑和反應(yīng)物的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系的輸出值,分別用濃度不同的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試劑,以相同反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)得到的多個(gè)輸出值制成。多條測(cè)量線(xiàn)基于相互不同的反應(yīng)時(shí)間制成。多條測(cè)量線(xiàn)分為根據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)的反應(yīng)初期階段測(cè)定的輸出值制成的第一測(cè)量線(xiàn)及根據(jù)晚于測(cè)定第一測(cè)量線(xiàn)制作基礎(chǔ)的輸出值時(shí)測(cè)定的輸出值制成的第二測(cè)量線(xiàn)。文檔編號(hào)G01N33/53GK101299027SQ200810090799公開(kāi)日2008年11月5日申請(qǐng)日期2002年12月25日優(yōu)先權(quán)日2001年12月27日發(fā)明者中山真人,福永悟志申請(qǐng)人:愛(ài)科來(lái)株式會(huì)社
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