專利名稱：一種膽固醇水質定標液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種臨床生化診斷試劑，特別是涉及一種膽固醇的水質定標液以及該定標液的制備方法。

背景技術：
膽固醇來源于體細胞合成和飲食，是細胞膜的組分和類固醇激素、膽汁酸的前體。血液中的脂蛋白是脂肪和載脂蛋白的復合物，由它轉運膽固醇，脂蛋白有四種形式高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)，極低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒，四種形式的脂蛋白與冠狀動脈粥樣硬化有著明確的關系。進行個體總膽固醇(TC)的檢測只是用于動脈粥樣硬化危險的過篩，如果要對危險作較好的評估，必須另外進行高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測。LDL-C作用于動脈內(nèi)膜形成動脈粥樣硬化斑塊，與冠心病及相關的死亡率有著非常密切的關系。即使總膽固醇在正常范圍內(nèi)，LDL-C濃度升高也預示了高度危險。HDL負責從細胞中吸收膽固醇，HDL-C具有抵御斑塊形成的作用，與冠心病發(fā)生呈負相關，其含量下降是虛血性心疾的因素。因此，準確的監(jiān)控并檢測血液中的膽固醇水平對疾病的診斷和治療都有很大幫助。
臨床實驗室常用的檢測體液中的膽固醇含量的方法有很多，包括化學法檢測和酶法檢測。無論采用何種檢測方法都必須引進一種具體的有明確含量的膽固醇作為標準品來評估被測樣品的膽固醇含量，基于這種檢測需要，一種具有固定膽固醇含量的膽固醇溶液，既膽固醇標準品誕生了。
膽固醇標準品為測定血液中膽固醇的含量提供了定量的標準，已有的無水標準品是將膽固醇溶解在氯仿或冰醋酸或醇溶液等制備得到的，這種標準品在測試時與Liebermann-Burchardt色原體產(chǎn)生更強于血清中膽固醇和色原體產(chǎn)生的顏色強度的變化，導致測定結果的不準確(L.Vass，Schweiz，med.Wschr.，102，914/1972)，因而與被檢測生物液體具有較差的一致性。
水質膽固醇定標液的發(fā)明雖然克服了無水標準品在上述使用中的缺陷，但對于膽固醇標準品來說，除了具有與被檢測生物液體的充分的一致性之外，長時間的穩(wěn)定性及膽固醇含量能長久保持不變也是十分必要的。一項德國專利(專利號2839433)發(fā)明了一種較穩(wěn)定的含有有離子和非離子型去污劑的水質脂質體定標液。這兩種定標液雖然具有很好的穩(wěn)定性，但是由于溶液組成不同于被檢測的膽固醇樣品，因此，它們不適合用于膽固醇的動力學測定。一篇美國專利(專利號4868139)在定標液配方中加入一定比例的膽酸和脫氧膽酸或者二者的鹽或這兩種酸的衍生物，從而解決了以往定標液不適合膽固醇動力學方法測定的難題；但是該定標液配方要求用膽酸和脫氧膽酸或者二者的鹽或這兩種酸的衍生物，脫氧膽酸或鹽或這種酸的衍生物相對膽酸或鹽或這種酸的衍生物要昂貴很多，而且膽固醇在兩者的混合溶液中特別難以溶解，生產(chǎn)的重復性難以控制。
到目前為止，膽固醇水質定標液各方面性能雖然已經(jīng)得到了很大的改善，但在儲存穩(wěn)定性、測試重復性、生產(chǎn)成本、生產(chǎn)工藝等方面還存在諸多問題，有待進一步優(yōu)化改進。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種生產(chǎn)工藝可靠簡便、生產(chǎn)重復性好且穩(wěn)定的膽固醇水質定標液。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述膽固醇水質定標液的制備方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案 本發(fā)明公開了一種膽固醇水質定標液，所述定標液包括溶解的膽固醇，所述定標液還包括膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種以及異丙醇。
優(yōu)選的，異丙醇在所述定標液中所占的體積百分含量為1％～20％。
或者優(yōu)選的，膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種在所述定標液中所占的質量/體積百分含量為5％～50％。
進一步優(yōu)選的，所述定標液還包括0.5～20g/L的Tris。所述定標液還包括0.2～2.0g/L的疊氮鈉。
本發(fā)明定標液的pH值為5～13，優(yōu)選pH值為8.1。
本發(fā)明還公開了上述膽固醇水質定標液的制備方法，所述方法包括將膽固醇溶解于異丙醇形成澄清溶液后，再將所得溶液與膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中至少一種的水溶液混合攪拌至澄清。
其中，將膽固醇溶解于異丙醇是指將膽固醇溶解于20～50℃的異丙醇。
所述攪拌是指攪拌至少5分鐘。
由于采用了以上技術方案，使本發(fā)明具備的有益效果在于 本發(fā)明通過在膽固醇水質定標液的制備過程中，利用異丙醇先溶解膽固醇后再與膽酸或脫氧膽酸或它們的鹽的水溶液混合，提高了膽固醇的溶解效率，攪拌時間僅需5～30分鐘，簡化了生產(chǎn)工藝，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)重復性，所制備出的膽固醇水質定標液儲存穩(wěn)定性高，測試重復性好。此外，本發(fā)明的膽固醇水質定標液，昂貴的脫氧膽酸或鹽并非必要成分，可以在價格相對低廉的膽酸、膽酸鹽以及脫氧膽酸、脫氧膽酸鹽中選擇至少一種即可，因此很容易根據(jù)生產(chǎn)需要來控制成本。

具體實施例方式 本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的膽固醇水質定標液配方及其制備工藝。該配方包括膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種、異丙醇以及適量的膽固醇。
本發(fā)明的水質定標液是在檢測膽固醇含量時作為定標使用，因此，本發(fā)明定標液中的膽固醇含量可不作限定，可以由本領域技術人員根據(jù)被檢測物中膽固醇含量的具體情況來進行調(diào)整，以達到最合適的定標效果。但在通常情況下，定標液中，膽固醇含量以不超過10％(w/v)為宜。
由于膽固醇在通常情況下難以溶解，即使溶解后，溶液的穩(wěn)定性往往也不夠理想。本發(fā)明采用膽酸或脫氧膽酸或其鹽與異丙醇配合使用，提高了膽固醇的溶解效率以及定標液的穩(wěn)定性。其中，異丙醇與膽酸或脫氧膽酸或其鹽的用量可在較大范圍內(nèi)調(diào)整。異丙醇及膽酸或脫氧膽酸或其鹽的用量太低的話，溶解膽固醇的效果不好，它們的用量越大，膽固醇在其中的溶解性就越好。但膽酸或脫氧膽酸或其鹽的用量過高的話，一方面會造成成本的增加，另一方面所能溶解的膽固醇量已經(jīng)超過實際需要。異丙醇的用量太高則導致定標液的揮發(fā)性變大，影響其測試精密度。本發(fā)明的定標液中，異丙醇的優(yōu)選用量為1％～20％(v/v)，膽酸或脫氧膽酸或其鹽的優(yōu)選用量為5％～50％(w/v)。
本發(fā)明的定標液中，還可以優(yōu)選含有Tris與疊氮鈉。其中，Tris作為緩沖劑，疊氮鈉起防腐作用，其在本發(fā)明定標液中的濃度可根據(jù)慣常用量使用。通常，Tris的用量為0.5～20g/L，疊氮鈉的用量為0.2～2.0g/L。由于本發(fā)明定標液中使用的膽酸或脫氧膽酸或其鹽，該成分本身也能起到緩沖劑的作用，同時也具有一定的防腐作用，因此，在本發(fā)明的定標液中Tris與疊氮鈉可作為優(yōu)選成分而非必要成分使用。
本發(fā)明的定標液，其應當滿足的pH值為5～13，在此范圍內(nèi)，pH值越低，膽酸或脫氧膽酸或其鹽的溶解度越低。而本發(fā)明的定標液的pH值通常優(yōu)選8.1。
本發(fā)明膽固醇水質定標液的制備工藝是先用適量20～50℃的異丙醇溶解膽固醇形成澄清溶液，再將此澄清溶液和含膽酸或脫氧膽酸或其鹽中至少一種的溶液混合，攪拌直至溶液澄清透明。其中，使用20～50℃的異丙醇，能夠很快捷地將膽固醇溶解形成澄清溶液，再將該澄清溶液與室溫的含膽酸或脫氧膽酸或其鹽中至少一種的溶液混合后，只需攪拌5～30分鐘即可得到澄清溶液。
本發(fā)明制備的膽固醇水質定標液，穩(wěn)定性、重復性均好，制備工藝簡單、成本較低，可以作為膽固醇試劑盒配套用定標液，用于測試前的系統(tǒng)校準。
下面通過具體的實施例對本發(fā)明做進一步詳細的描述。除非另有說明，否則以下實施例中的總膽固醇試劑盒及測定儀器均為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的總膽固醇測定試劑盒和BS系列生化分析儀，其余試劑為常規(guī)采購試劑。
實施例1 將2克膽固醇加入到50ml的約40℃的異丙醇溶液混勻形成澄清溶液，將上述溶液加入到0.9L含100g的膽酸鈉、0.25g疊氮鈉、3.6g的Tris緩沖液中，攪拌約15分鐘直至溶液澄清透明，調(diào)pH8.1，最后定容到1L。
將制備的定標液放置在37度恒溫箱進行加速穩(wěn)定性實驗，加速不同的時間后用總膽固醇試劑盒檢測膽固醇的濃度，計算相對偏差，具體數(shù)據(jù)見表一。
表一膽固醇定標液37度加速后測定值的相對偏差
上述數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的定標液具有很好的穩(wěn)定性。
實施例2 按表二15種配方制備膽固醇定標液各1L，制備工藝都是先將膽固醇加入到約40℃的異丙醇溶液混勻形成澄清溶液，再將上述溶液與含表中其它成分的溶液混勻攪拌至澄清透明，最后定容到1L。各配方膽固醇的回收率在97.5～102.3％之間，由此可見本發(fā)明的膽固醇單標與膽固醇測定試劑盒兼容性好，溶液體系能將膽固醇完全溶解，膽固醇單標的生產(chǎn)工藝可靠，生產(chǎn)重復性好。
表二各膽固醇定標液的膽固醇回收率
以上內(nèi)容是結合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1.一種膽固醇水質定標液，所述定標液包括溶解的膽固醇，其特征在于所述定標液還包括膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種以及異丙醇。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于異丙醇在所述定標液中所占的體積百分含量為1％～20％。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種在所述定標液中所占的質量/體積百分含量為5％～50％。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于所述定標液還包括0.5～20g/L的Tris。
5.根據(jù)權利要求3所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于所述定標液還包括0.2～2.0g/L的疊氮鈉。
6.根據(jù)權利要求3所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于所述定標液的pH值為5～13。
7.根據(jù)權利要求6所述的一種膽固醇水質定標液，其特征在于所述定標液的pH值為8.1。
8.權利要求1～7任意一項所述的膽固醇水質定標液的制備方法，所述方法包括將膽固醇溶解于異丙醇形成澄清溶液后，再將所得溶液與膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中至少一種的水溶液混合攪拌至澄清。
9.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于將膽固醇溶解于異丙醇是指將膽固醇溶解于20～50℃的異丙醇。
10.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于所述攪拌是指攪拌至少5分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種膽固醇水質定標液及其制備方法，所述定標液包括溶解的膽固醇，還包括膽酸、脫氧膽酸、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽中的至少一種以及異丙醇。本發(fā)明簡化了生產(chǎn)工藝，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)重復性，所制備出的膽固醇水質定標液儲存穩(wěn)定性高，測試重復性好。
文檔編號G01N33/92GK101762709SQ20081024182
公開日2010年6月30日 申請日期2008年12月19日 優(yōu)先權日2008年12月19日
發(fā)明者李希文 申請人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司