專利名稱：一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，涉及到一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法。
背景技術(shù)：
在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，水生生物卵子質(zhì)量的好壞直接影響到受精力的高低，進(jìn)而影響到 出苗率和成活率，卵子質(zhì)量的好壞和生產(chǎn)效益密切相關(guān)。因此，對水生生物卵子質(zhì)量進(jìn)行正 確評價(jià)具有重要的理論意義與應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)階段，對水生生物卵子質(zhì)量評價(jià)報(bào)道較為少見， 一般采用組織切片染色后進(jìn)行顯微觀察，這種方法流程較為煩瑣，且只能觀察到不同發(fā)育 時(shí)期的卵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和特征，不能從根本上判別某一發(fā)育時(shí)期的質(zhì)量好壞，也不能直接指 導(dǎo)生產(chǎn)；另一種方法是將水生生物的卵子在開水中煮熟后，用刀片把卵子從中間切開，觀察 卵子內(nèi)核向動(dòng)物極偏移的情況，計(jì)算極化指數(shù)，據(jù)此推斷卵子的發(fā)育成熟度，但這種方法只 能人為判斷卵子的成熟情況，不能鑒別卵子發(fā)育質(zhì)量的好壞。還有一種方法是直接將卵子 與正常的精子進(jìn)行受精，計(jì)算受精率、出膜率，但這種方法試驗(yàn)周期長，且容易受到外界環(huán) 境因子的干擾，可能影響最后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。因此，到目前為止，尚缺少一種有效的方法來鑒 別水生生物卵子的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是提供一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是在斑尾刺蝦虎魚的繁殖季節(jié)，收集成熟的親本若干尾，采集 一定數(shù)量的不同批次的成熟卵，制備組織勻漿后，其特征是用試劑盒分別測定不同批次卵 子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，如果卵子中總ATP酶的活性高 于36. 31 士2. 50U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0. 12士0. 008U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活 性高于17. 875士0. 559U/mgprot,乳酸脫氫酶的活性高于191. 876士 10. 672U/gprot，判斷 為卵子質(zhì)量較好；如果卵子中ATP酶的活性介于7. 006士0. 414U/mgprot和36. 31 士2. 50U/ mgprot 之間，肌酸激酶的活性介于 0. 022士0. 014U/mgprot 和 0. 12士0. 008U/mgprot 之 間，琥珀酸脫氫酶的活性介于3. 935士0. 64U/mgprot和17. 875士0. 559U/mgprot之間，乳 酸脫氫酶的活性介于32. 09士4. 09U/gprot和191. 876士 10. 672U/gprot之間，則判斷為卵 子質(zhì)量一般；如果卵子中ATP酶的活性低于7. 006士0. 414U/mgprot，肌酸激酶的活性低于 0. 022 士0. 014U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性低于3. 935 士0. 64U/mgprot，乳酸脫氫酶的活 性低于32. 09士4. 09U/gprot，則判斷為卵子質(zhì)量差。本發(fā)明針對不同質(zhì)量卵子中幾種重要的參與能量代謝的酶的活性存在較大差異， 減少人為和外界環(huán)境因子的影響，更為客觀準(zhǔn)確地反應(yīng)了卵子的質(zhì)量，所用設(shè)備簡單，價(jià)格 低廉，可節(jié)省時(shí)間和成本。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明在斑尾刺蝦虎魚的繁殖季節(jié)，收集成熟的親本若干尾，每批次取5尾魚的成熟卵，超聲波離心后制備成10%的組織勻漿，用試劑盒(南京建成生物工程研究所)在分 光光度計(jì)下分別測定不同批次成熟卵中總ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脫氫酶(SDH)^L 酸脫氫酶(LDH)的活性，每個(gè)樣重復(fù)三次，結(jié)果取平均值，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果進(jìn)行分析處 理。如果卵子中總ATP酶的活性高于36. 31 士2. 50U/mgprot，CK的活性高于0. 12士0. 008U/ mgprot, SDH 的活性高于 17. 875士0. 559U/mgprot, LDH 的活性高于 191. 876士 10. 672U/ gprot,判斷為卵子質(zhì)量較好；如果卵子中ATP酶的活性介于7. 006士0. 414U/mgprot和 36. 31 士2. 50U/mgprot 之間，CK 的活性介于 0. 022士0. 014U/mgprot 和 0. 12士0. 008U/ mgprot 之間，SDH 的活性介于 3. 935士0 . 64U/mgprot 和 17. 875士0. 559U/mgprot 之間，LDH 的活性介于32. 09士4. 09U/gprot和191. 876士 10. 672U/gprot之間，則判斷為卵子質(zhì)量一 般；如果卵子中ATP酶的活性低于7. 006士0. 414U/mgprot，CK的活性低于0. 022士0. 014U/ mgprot，SDH 的活性低于 3. 935士0. 64U/mgprot，LDH 的活性低于 32. 09士4. 09U/gprot，則判 斷為卵子質(zhì)量差。運(yùn)用這種方法鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子的質(zhì)量較為準(zhǔn)確和客觀，鑒別準(zhǔn)確 率可達(dá)到98%以上。
權(quán)利要求
一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法，在斑尾刺蝦虎魚的繁殖季節(jié)，收集成熟的親本若干尾，采集一定數(shù)量的不同批次的成熟卵，制備組織勻漿，其特征是用試劑盒分別測定不同批次卵子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，如果卵子中總ATP酶的活性高于36.31±2.50U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.12±0.008U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性高于17.875±0.559U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性高于191.876±10.672U/gprot，判斷為卵子質(zhì)量較好；如果卵子中ATP酶的活性介于7.006±0.414U/mgprot和36.31±2.50U/mgprot之間，肌酸激酶的活性介于0.022±0.014U/mgprot和0.12±0.008U/mgprot之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于3.935±0.64U/mgprot和17.875±0.559U/mgprot之間，乳酸脫氫酶的活性介于32.09±4.09U/gprot和191.876±10.672U/gprot之間，則判斷為卵子質(zhì)量一般；如果卵子中ATP酶的活性低于7.006±0.414U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.022±0.014U/mgprot，琥珀酸脫氫酶的活性低于3.935±0.64U/mgprot，乳酸脫氫酶的活性低于32.09±4.09U/gprot，則判斷為卵子質(zhì)量差。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法，其特征是每批次取 5尾魚的成熟卵，超聲波離心后制備成10%的組織勻漿。
全文摘要
一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法，涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，需要提供一種鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量的方法，本發(fā)明在斑尾刺蝦虎魚的繁殖季節(jié)，收集成熟卵制備組織勻漿，其特征是用試劑盒測定卵子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶的活性，判斷卵子質(zhì)量好壞。本發(fā)明用于鑒別斑尾刺蝦虎魚卵子質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N21/31GK101845479SQ20091004812
公開日2010年9月29日 申請日期2009年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月24日
發(fā)明者馮廣朋, 劉鑒毅, 姚志峰, 莊平, 張濤, 江琪, 章龍珍, 趙峰, 閆文罡, 黃曉榮 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所