專利名稱：中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥材樣品中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法。 更具體的說，是利用加速溶劑萃取方法對(duì)中藥材中的60種農(nóng)藥多殘留的樣品前處理的方法。
背景技術(shù)：
隨著中藥事業(yè)的不斷發(fā)展、中藥及其制劑在世界范圍內(nèi)防病、治病作用被重新認(rèn) 識(shí)、提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量，控制中藥材農(nóng)藥殘留，制訂合理的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是非常必要的。 眾所周知，中藥材是防病，治病，保健的特殊用品，人們服用的中藥材首先應(yīng)對(duì)人體無毒、無 害。如果中藥材農(nóng)藥殘留超標(biāo)，患者及體弱者服用且服用時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，就易因農(nóng)藥殘留造成蓄 積中毒，嚴(yán)重影響其治病功效的發(fā)揮。在提高中藥制劑內(nèi)在質(zhì)量方面不僅需對(duì)其有效成分 (活性成分)的質(zhì)和量進(jìn)行有效控制。而且應(yīng)對(duì)中藥制劑中有毒、有害成分(雜質(zhì))予以必 需的了解和限制。中藥產(chǎn)業(yè)是天津市優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)之一。隨著國(guó)際“回歸自然熱”的升溫，中草藥被很多 國(guó)家和地區(qū)看好，中藥在國(guó)際市場(chǎng)的影響逐漸增大。隨之而來，很多中藥進(jìn)口國(guó)家的檢測(cè)機(jī) 構(gòu)對(duì)于中藥在種植、生產(chǎn)加工過程中產(chǎn)生的農(nóng)藥殘留等有害物質(zhì)控制也越來越嚴(yán)格。我國(guó) 2005年修訂頒布的新版《中華人民共和國(guó)藥典》，對(duì)國(guó)內(nèi)中藥產(chǎn)品的無公害標(biāo)準(zhǔn)作出強(qiáng)制性 規(guī)定，要求中藥產(chǎn)品中農(nóng)藥殘量等有毒有害物質(zhì)不得超標(biāo)。這一強(qiáng)制規(guī)定將有力促進(jìn)我國(guó) 中藥出口水平的提高，促使更多的中藥生產(chǎn)企業(yè)向國(guó)際市場(chǎng)進(jìn)軍。從近年來海關(guān)統(tǒng)計(jì)來看， 出口中藥材因有害殘留物超標(biāo)頻遭扣留和退運(yùn)，已經(jīng)成為我國(guó)中藥出口和中藥發(fā)展的一只 “攔路虎”，對(duì)中藥的國(guó)際聲譽(yù)產(chǎn)生了極大的負(fù)面影響，是制約中藥走向世界的“瓶頸”之一。目前，我國(guó)中藥中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法落后，發(fā)達(dá)國(guó)家經(jīng)常采用先進(jìn)的農(nóng)藥殘留 檢測(cè)技術(shù)加強(qiáng)農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)工作，所用檢測(cè)技術(shù)如氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，液相色譜與 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用，以及氣相、液相色譜與多級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，這些 技術(shù)的應(yīng)用大大提高了農(nóng)藥殘留檢測(cè)的定性能力和檢測(cè)的靈敏度、檢測(cè)限和檢測(cè)覆蓋范 圍。我國(guó)當(dāng)前的中藥農(nóng)殘分析方法研究仍以氣相或液相色譜配不同的檢測(cè)器為主，較少采 用各種色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，研究仍然集中在個(gè)別品種中藥中的某類農(nóng)藥的檢測(cè)方法研究。這嚴(yán) 重影響了檢驗(yàn)工作的準(zhǔn)確程度，在一定程度上也降低了我國(guó)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的公正性與權(quán)威性。我國(guó)從上世紀(jì)90年代初開始研究和利用多殘留分析方法，并相繼推出了一系列 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 19649-2006 “糧谷中475種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜一 串聯(lián)質(zhì)譜法”，GB/T 19648-2006 “水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定”; 英國(guó)中央科學(xué)實(shí)驗(yàn)室(CSL)開發(fā)了 104種農(nóng)藥殘留量同時(shí)檢測(cè)的方法；德國(guó)科學(xué)研究協(xié)會(huì) 開發(fā)了 320種農(nóng)藥殘留的多殘留檢測(cè)方法；美國(guó)FDA農(nóng)藥分析手冊(cè)(PAM)的多殘留方法可 檢測(cè)300多種農(nóng)藥；日本雜賀研究所開發(fā)了 205種農(nóng)藥同時(shí)測(cè)定法；美國(guó)CDFA和荷蘭衛(wèi)生 部都有較好的多殘留同時(shí)檢測(cè)方法和系統(tǒng)分析方法。目前我國(guó)還沒有中藥中多殘留分析的 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。
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在樣品前處理方面，現(xiàn)代儀器分析樣品制備技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)就是使處理樣品的過 程要簡(jiǎn)單、處理速度快、使用裝置要小、引進(jìn)的誤差要小、對(duì)欲測(cè)定組分的選擇性和回收率 要高。目前，國(guó)際上較多使用固相萃取(SPE)技術(shù)，其他微波提取技術(shù)、凝膠層析(GPC)、基 質(zhì)分散固相萃取(MSPD)、超臨界萃取(SFE)、固相微萃取技術(shù)等也用于多殘留分析。而我國(guó) 目前多數(shù)分析單位仍采用傳統(tǒng)的溶劑萃取，液液分配，柱層析凈化，前處理方法自動(dòng)化程度 低、提取凈化的效率不高，速度慢，環(huán)境污染嚴(yán)重。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種自動(dòng)化程度高，提取凈 化簡(jiǎn)便、速度快、無環(huán)境污染的處理方法。特別是利用加速溶劑萃取方法對(duì)中藥材農(nóng)藥多殘 留的樣品前處理的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開了中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法在檢測(cè) 中藥材農(nóng)藥殘留方面的應(yīng)用。特別是在檢測(cè)中藥材60種農(nóng)藥殘留樣品中的應(yīng)用。為達(dá)到 上述目的，本發(fā)明提供如下的技術(shù)方案一種中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法，包括如下的步驟(1)將待測(cè)中藥材樣品粉碎，過60-100目篩，60-80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取2. 0g樣品，加0. 5-2g硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維 素濾膜，然后從底部裝入混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃取；(3)在溫度 80-100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力 1500psi-2000psi 條件下 靜態(tài)萃取5-10min，萃取2-4個(gè)循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60% -80%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s。收集提 取物，濃縮至近干，吹氮至干，加有機(jī)溶劑溶解待凈化，有機(jī)溶劑的量一般為2-4ml。所述的有機(jī)溶劑為乙腈、正己烷、丙酮的一種或兩種的混合液。優(yōu)選的有機(jī)溶劑為 丙酮，正己烷，乙腈。也可以是丙酮與正己烷的混合液。盡管甲苯也可以作為有機(jī)溶劑加以 使用，但甲苯有毒性，盡量不采用。(5)凈化稱取0. 2g PSA(N-丙基乙二胺)，0. 2g C18 (十八碳硅烷化物)，0. 3g無 水硫酸鎂，置于具塞離心管中，在旋渦混合器上凈化混合，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min， 移取上清液lml，定容待測(cè)。本發(fā)明所述的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前處理方法，其步驟(1)中的將待測(cè)中藥 材樣品粉碎，優(yōu)選過60目篩，60°C烘干2-4小時(shí)備用。本發(fā)明所述的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前處理方法，其步驟(2)中所述硅藻土的 加入量?jī)?yōu)選為0. 5-2g。本發(fā)明所述的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前處理方法，其步驟(3)中所述的萃取溫 度優(yōu)選為100°c，萃取壓力優(yōu)選為1500psi，靜態(tài)萃取時(shí)間優(yōu)選為5min，優(yōu)選萃取2個(gè)循環(huán)。本發(fā)明所述的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前處理方法，其步驟(5)中所述凈化混合 的時(shí)間為l_5min。下面是本發(fā)明中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法在檢測(cè)中藥材農(nóng)藥殘留方 面的應(yīng)用。特別是在檢測(cè)中藥材60種農(nóng)藥殘留樣品完整的測(cè)定方法1.儀器與試劑
儀器ASE200加速溶劑萃取儀(Dionex公司)；Agilent6890/5973GC/MS 氣質(zhì)聯(lián)用儀，HP-5MS 色譜柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)； RE-47旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；SHB-111循環(huán)水式多用真空泵。試劑PSA(固相萃取填料，N-丙基乙二胺)、C18 (固相萃取填料，為十八碳硅烷化 物)、無水硫酸鎂(分析純)、乙腈(分析純)、丙酮(分析純和色譜純)、正己烷(分析純和 色譜純)。標(biāo)準(zhǔn)品60種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品，20mg/l2.樣品制備1)前處理?xiàng)l件樣品處理中藥材樣品粉碎，過60目篩，60°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放。加速溶劑萃取準(zhǔn)確稱取2. 0g樣品，加lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加 入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入混合好的樣品。然后進(jìn)行加速溶劑萃取，在溫度100°C， 丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力1500psi條件下靜態(tài)萃取5min，萃取2個(gè)循環(huán)，用相當(dāng)于 萃取池60%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s。收集提取物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至 近干，吹氮至干，加2ml乙腈溶解待凈化。凈化稱取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g無水硫酸鎂，置于10ml塑料具塞離心管中， 將上述溶解液移至此離心管中，旋渦混合器上混合lmin，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，移 取上清液lml，定容待測(cè)。2)儀器分析條件AgilentGC/MS 條件。PTV 進(jìn)樣口 70°C (0. 3min) 120°C /min280°C (lOmin)色譜柱(HP-5MS):30mX0. 25mmX0. 25 y m，柱壓:llpsi爐溫60°C (3min) 15 °C /minl80 °C (2min) 3 °C /min260 °C (2min) 20 °C / min280°C (lOmin)離子源230°C，四極桿180°C，進(jìn)樣體積2iU，載氣氦氣溶劑延遲10min3)60種農(nóng)藥保留時(shí)間和特征離子本發(fā)明公開的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法與現(xiàn)有技術(shù)公開的內(nèi)容相 比所具有的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)在于現(xiàn)有的中藥材中農(nóng)藥的提取方法通常有索氏提取、振蕩提取和超聲波提取等，他 們共同的缺點(diǎn)是要消耗溶劑量大、時(shí)間長(zhǎng)、效率低、不能全自動(dòng)進(jìn)行，并且對(duì)實(shí)驗(yàn)員身體 有損傷、污染環(huán)境。本發(fā)明采用加速溶劑萃取技術(shù)測(cè)定中藥材中的農(nóng)藥殘留，檢驗(yàn)流程 短，操作方便，萃取效率高，重復(fù)性好，用的溶劑少，對(duì)操作人員和環(huán)境的污染少?；厥章?70-110%，方法靈敏度高，可以同時(shí)檢測(cè)中藥材中的60種農(nóng)藥殘留量。特別是對(duì)于從事中 藥生產(chǎn)、銷售的部門，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)藥材農(nóng)藥殘留量是十分必要的。對(duì)于各地藥檢部門打 擊假冒偽劣藥材，凈化藥材市場(chǎng)將是十分有效的。


圖1為標(biāo)樣總離子流圖圖2為空白總離子流圖圖3為添加總離子流圖。
具體實(shí)施例方式為了簡(jiǎn)單和清楚的目的，下文恰當(dāng)?shù)氖÷粤斯夹g(shù)的描述，以免那些不必要的 細(xì)節(jié)影響對(duì)本技術(shù)方案的描述。以下結(jié)合檢測(cè)實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。其中的纖維 素濾膜由儀器廠商提供的，PSA，C18均可以購(gòu)買。實(shí)施例1(1)將薏苡仁樣品粉碎，過60目篩，60°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取3份2. 0g薏苡仁樣品，其中一份添加60種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品0. lml, 放置10分鐘，然后將樣品與lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片纖維素濾膜， 然后從底部裝入混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃??；(3)在溫度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力1500psi條件下靜態(tài)萃取 5min，萃取2個(gè)循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s。收集提取物， 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加2ml乙腈溶解待凈化。(5)凈化稱取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g無水硫酸鎂，置于10ml塑料具塞離心 管中，將上述溶解液移至此離心管中，旋渦混合器上混合lmin，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心 5min，移取上清液1ml，定容待測(cè)。實(shí)施例2(1)將蒼術(shù)樣品粉碎，過100目篩，80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取3份2. 0g蒼術(shù)樣品，其中一份添加60種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品0. 1ml，放 置10分鐘，然后將樣品與lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片纖維素濾膜，然 后從底部裝入混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃?。?3)在溫度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力2000psi條件下靜態(tài)萃取 lOmin，萃取4個(gè)循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池75%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s。收集提取物，在 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加2ml溶劑(丙酮與正己烷體積比1 1)溶解待凈化。(5)凈化稱取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g無水硫酸鎂，置于10ml塑料具塞離心 管中，將上述溶解液移至此離心管中，旋渦混合器上混合3min，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心 5min，移取上清液1ml，定容待測(cè)。實(shí)施例31.加速溶劑萃取準(zhǔn)確稱取3份2. 0g人參樣品，其中一份添加60種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn) 品0. 1ml，放置10分鐘，然后將樣品與1. 5g硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片 纖維素濾膜，然后從底部裝入混合好的樣品。然后進(jìn)行加速溶劑萃取，在溫度80°C，丙酮 正己烷(1 9，？/力，壓力2000 ^靜態(tài)萃取81^11，萃取3個(gè)循環(huán)，用相當(dāng)于萃取池70%的 溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s。收集提取物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加2ml丙酮與正己烷的混合溶劑(1 1)溶解待凈化。凈化稱取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g無水硫酸鎂，置于10ml塑料具塞離心管中， 將上述溶解液移至此離心管中，旋渦混合器上混合lmin，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，移 取上清液lml，定容待測(cè)。將實(shí)施例1所得到的定容待測(cè)溶液經(jīng)下述方法完成薏苡仁樣品中農(nóng)藥殘留量的 測(cè)定儀器分析條件AgilentGC/MS 條件。PTV 進(jìn)樣口 70°C (0. 3min) 120°C /min,280°C (lOmin)色譜柱(HP_5MS):30mX0. 25mmX0. 25iim，柱壓llpsi爐溫60°C (3min) 15 °C /minl80 °C (2min) 3 °C /min260 °C (2min) 20 °C / min280°C (lOmin)離子源230°C，四極桿180°C，進(jìn)樣體積2iU，載氣氦氣溶劑延遲10min。采用本發(fā)明實(shí)施例1方法獲得的上清液經(jīng)定容后測(cè)定的結(jié)果如下在詳細(xì)說明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述 申請(qǐng)專利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所 作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受說明 書中所舉實(shí)例實(shí)施方式的限制。
權(quán)利要求
中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法，按如下的步驟進(jìn)行(1)將待測(cè)中藥材樣品粉碎，過60-100目篩，60-80℃烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取2.0g樣品，加0.5-2g硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃??；(3)在溫度80-100℃，丙酮∶正己烷1∶9，v/v，壓力1500-2000psi條件下靜態(tài)萃取5-10min，萃取2-4個(gè)循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60％-80％的有機(jī)溶劑沖洗萃取池，最后用氮?dú)獯祾?0s，收集提取物，濃縮至近干，吹氮至干，加有機(jī)溶劑溶解待凈化；(5)凈化稱取0.2g PSA，0.2g C18，0.3g無水硫酸鎂，置于具塞離心管中，在旋渦混合器上凈化混合，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，移取上清液，定容待測(cè)。
2.如權(quán)利要求1所述的處理方法，其中步驟(3)中所述的萃取溫度為100°C，萃取壓力 為1500psi，靜態(tài)萃取時(shí)間為5min，萃取2個(gè)循環(huán)。
3.如權(quán)利要求1所述的處理方法，其中步驟(4)所述的有機(jī)溶劑為體積比1 1的丙 酮與正己烷混合液。
4.如權(quán)利要求1所述的處理方法，其中步驟(5)中所述凈化混合時(shí)間為l-5min。
5.權(quán)利要求1所述的處理方法在檢測(cè)中藥材農(nóng)藥殘留方面的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述的處理方法在檢測(cè)中藥材60種農(nóng)藥殘留樣品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥材農(nóng)藥殘留樣品測(cè)定前的處理方法。它是準(zhǔn)確稱取處理過的中藥材樣品與硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃取，在溫度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，壓力1500psi條件下靜態(tài)萃取5min，萃取2個(gè)循環(huán)，收集提取物濃縮至近干，吹氮至干，加丙酮，正己烷的混合液或乙腈有機(jī)溶劑溶解。然后經(jīng)過凈化處理得到上清液，定容待測(cè)。該方法采用加速溶劑萃取技術(shù)，檢驗(yàn)流程短，操作方便，回收率達(dá)70-110％，方法靈敏度高，可以同時(shí)檢測(cè)中藥材中的60種農(nóng)藥殘留量，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N1/34GK101852698SQ20091006833
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2009年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日
發(fā)明者劉磊, 宋淑榮, 張玉婷, 李輝, 程奕, 邵輝, 郭永澤 申請(qǐng)人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室;天津海世達(dá)檢測(cè)技術(shù)有限公司