專利名稱：一種蓖麻毒素的膠體金檢測試紙及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及蓖麻毒素的檢測試紙及其制備方法和在檢測蓖麻毒素中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蓖麻毒素存在于蓖麻籽(Ricin toxin)中，由A、 B兩條肽鏈通過二硫鍵連接而成。其中，A鏈為效應(yīng)鏈，具有糖苷酶活性，能使核糖體失活；B鏈為結(jié)合鏈，擁有半乳糖結(jié)合位點(diǎn)。蓖麻毒素毒性很大小鼠的LD50為6. 38pg/kg，成年人攝入的致死劑量為5. 0jug/kg~7. OMg/kg,性質(zhì)穩(wěn)
定，且來源較廣，提取成本低廉，已多次在恐怖襲擊中使用，具有一定的潛在軍事應(yīng)用價(jià)值。
國內(nèi)已經(jīng)建立了膠體金免疫層析技術(shù)對蓖麻毒素的檢測，但并未能實(shí)現(xiàn)半定量檢測，目前國內(nèi)的半定量檢測蓖麻毒素的方法多以酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-1 inked immunosorbent assay, ELISA)為主，ELISA法孵育時(shí)間長，不適合作為現(xiàn)場檢測。上述方法已經(jīng)滿足不了當(dāng)代防恐需要，迫切需要可以現(xiàn)場、快速、定量檢測蓖麻毒素的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷地檢測蓖麻毒素的試紙，可利用金標(biāo)免疫分析儀進(jìn)行的半定量檢測方法。該試紙的工作原理是利用特異性抗原-抗體的結(jié)合，用膠體金標(biāo)記抗體，與待檢抗原結(jié)合后，使與試紙結(jié)合的捕獲抗體顯色。本發(fā)明還涉及制備上述檢測試紙的制備方法。本發(fā)明能夠基于一份標(biāo)本和一個(gè)試紙，快速方便地檢測出標(biāo)本中的蓖麻毒素，節(jié)省了大量人力物力，方便、快速、簡捷。
本發(fā)明涉及一種方便、快捷地檢測蓖麻毒素的檢測試紙，它包含(1)反應(yīng)支持物；(2 )吸水墊；(3) 硝酸纖維膜，該膜包被有兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體檢測條帶和質(zhì)控羊抗鼠IgG的質(zhì)控條帶；
(4) 金標(biāo)抗體保護(hù)膜，其中含有膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體。
其中的羊抗鼠IgG可購自鼎國生物技術(shù)有限公司。
另外，金標(biāo)抗體保護(hù)膜標(biāo)記的是鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體。質(zhì)控用的是羊抗鼠IgG,這是一種很普遍的抗體。羊抗鼠IgG是本領(lǐng)域常用的一種普遍的二抗。
兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體可以來自軍科院微生物所，例如，參見郝蘭群，郭勝清，郭振泉，等.抗蓖麻毒素單克隆抗體的制備及應(yīng)用[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2003， 19(5): 517-518。
本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，它還包含樣品墊，該樣品墊的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，其中吸水墊選用濾紙。
本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，其中金標(biāo)抗體保護(hù)膜選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維，其上均勻涂布有膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體。
另一方面，本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，其中吸水墊、硝酸纖維膜、金標(biāo)抗體保護(hù)膜、樣品墊和反應(yīng)支持物按照附圖1所示方式構(gòu)成；反應(yīng)支持物5位于底層，硝酸纖維膜2位于反應(yīng)支持物5上的中部，該膜的T處是兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體包被的檢測條帶，并且C處是羊抗鼠IgG包被的質(zhì)控條帶；金標(biāo)抗體保護(hù)膜3位于硝酸纖維膜上部的一側(cè)并與之部分重疊，該膜含有膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體；吸水墊1位于硝酸纖維膜2上部的相對于3而言的另一側(cè)并與2部分重疊；樣品墊4位于2上與1相反的一側(cè)并與3部分重疊。
又一方面，本發(fā)明涉及的上述蓖麻毒素的檢測試紙，以吸水墊一側(cè)為起始端，樣品墊一側(cè)為末端，兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體的檢測條帶位于接近末端，羊抗鼠IgG包被的質(zhì)控條帶接近于起始端。(？請申 請人給出記載該抗體的文獻(xiàn)，至于"純化方法，，視情況可作為優(yōu)選方案 或具體方案撰寫)
本發(fā)明涉及一種制備上述檢測試紙的制備方法，該方法包括 (1)用隔流噴金劃線機(jī)以一定噴膜速度噴涂抗蓖麻毒素抗體和質(zhì)控抗體 兩個(gè)條帶的硝酸纖維膜；(2 )制備一種含有膠體金標(biāo)記的抗重組蓖麻毒 素抗體的金標(biāo)抗體保護(hù)膜，將膠體金標(biāo)記的抗重組蓖麻抗體均勻涂布在 玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥，制成金標(biāo)抗體保護(hù)膜。
本發(fā)明所述的制備方法，該噴涂包被膜的步驟中，噴膜速度優(yōu)選是 10 - 100mm/s。所述兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體，其加入量為 l-5mg/ml，該多克隆抗體的稀釋液可以為5mMPBS。質(zhì)控羊抗鼠IgG的濃 度為0. 1-5 mg/ml。該方法將膠體金標(biāo)記的兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆 抗體均勻涂布在玻璃纖維膜上，其中pH為7 - 9。
本發(fā)明提供上述試紙?jiān)跈z測蓖麻毒素中的應(yīng)用，其中包括將待測標(biāo) 本與樣品稀釋液混勻，再將樣品混合液加入試紙樣品孔處，樣品中的液
體依靠虹吸作用上行，10-15分鐘判讀結(jié)果。
本發(fā)明再一個(gè)目的是提供制備所述檢測蓖麻毒素的試紙的方法，該 方法包括以下步驟膠體金探針的制備，金標(biāo)抗體保護(hù)膜的制備，硝酸 纖維膜的噴涂包被。 1、膠體金探針的制備
(1)將HAuCl4先配制為0. 01°/。水溶液。磁力攪拌下準(zhǔn)確加入l ml 1% 的HAuCl4，同時(shí)加入l. 5-3ml 1%的檸檬酸三鈉水溶液。顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加 熱，冷卻至室溫后加純水補(bǔ)足至IOO ml， 4'C避光保存。
(2 )用K2C03調(diào)PH值為約7-9,優(yōu)選為約7. 8 - 8. 9，更優(yōu)選約8. 0-8. 2。
(3)將膠體金調(diào)至pH 8.0-8.2，，用5 mM PB (pH 7.2)稀釋抗 體至O. 2 mg/ml。
(4 )保持膠體金穩(wěn)定。
本發(fā)明還在于提供一種獲得維持膠體金穩(wěn)定的抗體最佳標(biāo)記劑量的 方法，該方法包4舌
a. 取10支潔凈的1，5 ml離心管，分別加入膠體金溶液lml。
b. 在l-10號管內(nèi)分別加入IO pl、 20 pl、 30 pl、 40 pl、 50 pl、60 pl、 70 pl、 80 pl、 90 pl、 100 pl的5 mM PBS，再依次加入稀IW 的O. 2 mg/ml的待標(biāo)記抗體90 pl、 80 pl、 70 jil、 60 pl、 50 pl、 40 pl、 30 pl、 20 pl、 10 nl、 0混勻，靜置2分鐘。
c.在10個(gè)管內(nèi)分別加入10y。 NaCl溶液IOO pl，混勻后室溫靜置2小 時(shí)，觀察顏色變化。
未加抗體及加入量不足以穩(wěn)定膠體金的試管中的液體顏色呈現(xiàn)由紅 變藍(lán)的變化，而加入抗體量達(dá)到或超過最低穩(wěn)定劑量的試管則保持紅色 不變。與對照管(1號管)相比，顏色最接近、含抗體劑量最低的試管 所含的抗體劑量，即為l ml膠體金所必須的抗體穩(wěn)定劑量，在此基礎(chǔ)上 再加20%抗體，即為抗體最佳標(biāo)記劑量。本發(fā)明經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)和分析，得 出的結(jié)果表明維持膠體金溶液適宜抗體量為8-15 ug，優(yōu)選抗體量IO -12 ug，更優(yōu)選IO. 5-12. 0 ug，最優(yōu)選為12ug。
2、 金標(biāo)抗體保護(hù)膜的制備
取上述pH的膠體金以lml/管分裝于1. 5 ml的離心管中。每支管中加 入12ug的抗體，輕搖混勻后放置。每管中加入10。/。的BSA100 pl，混勻放 置。將上面初步制得的膠體金探針在12000 rpm、 4。C下離心30分鐘，棄 上清液。每支離心管中加入l ml重懸液懸浮沉淀后同上離心。棄上清液， 管底得到暗紅色的疏松狀沉淀，加入500 pl重懸液重懸后于4 。C， 1000 rpm，離心10分鐘；取上清液，均勻滴加在lcm寬的玻璃纖維上，37。C干 燥。
3、 硝酸纖維膜的噴涂包被
(1) 利用隔流噴金劃線機(jī)以50mm/s的噴膜速度包被兔抗重組蓖麻 毒素A鏈多克隆抗體和質(zhì)控羊抗鼠IgG兩個(gè)條帶的硝酸纖維膜。
在該噴涂包被膜的步驟中，噴膜速度優(yōu)選是10-100mm/s，更優(yōu)選是 45 - 55mm/s，最優(yōu)選是50mm/s;所述兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體， 其加入量為l-5mg/ml,該多克隆抗體的稀釋液可以為5mM PBS;質(zhì)控羊 抗鼠IgG可以購自鼎國生物技術(shù)公司，其濃度為0. 1-5 mg/ml更優(yōu)選是 0. 5-2. 5 mg/ml，最優(yōu)選為lmg/ml。
(2) 制備一種含有膠體金標(biāo)記的的玻璃纖維膜，將膠體金標(biāo)記的鼠 抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體均勻涂布在玻璃纖維膜上。抗體用5mMPBS稀釋，pH為7-9,優(yōu)選7. 5-9,最適PH值為8. 5。
本發(fā)明還公開了所述試紙?jiān)跈z測蓖麻毒素中的應(yīng)用，參見附圖2。 在本發(fā)明檢測蓖麻毒素的方法中，先將待測標(biāo)本放入裝有稀釋液的 小瓶內(nèi)，再用移液器將樣品混合液加入試紙"4"處(即末端)，樣品中 的液體依靠虹吸作用上行， 一般需10-15分鐘判讀結(jié)果
如標(biāo)本中含有蓖麻毒素，則它將與試紙上M^體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖 麻毒素A鏈多克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物，液體展開上行并與硝酸纖維 膜上的兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在"T" 處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的毒素，膠體金標(biāo)記多克隆抗體繼續(xù)隨液體繼 續(xù)上行并與該膜上的羊抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在"C"處形成紅色 條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會(huì)出現(xiàn)，說明試紙失效。
陽性結(jié)果會(huì)出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線， 如不出現(xiàn)線條說明試紙失效。還可利用金標(biāo)免疫分析儀進(jìn)行半定量枱，測。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用純化的兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗 體、和羊抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上，結(jié)合膠體金標(biāo)記的鼠抗重 組荒麻毒素A鏈多克隆抗體，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測標(biāo)本 中的蓖麻毒素。


圖1A本發(fā)明試紙的正面示意圖。 圖1B本發(fā)明試紙的側(cè)面示意圖。
其中，圖1A和1B: 1:吸水墊；2:》肖酸纖維膜(T:包^:兔抗重組 蓖麻毒素A鏈多克隆抗體檢測條帶；C:包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控條帶)； 3:含有膠體金標(biāo)記鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體多克隆抗體的玻璃 纖維膜；4:樣品墊；5:反應(yīng)支持物。
圖2:檢測結(jié)果示意圖；T、 C兩條線陽性；C一條線陰性；無效。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
9實(shí)施例l、檢測蓖麻毒素的膠體金試紙的制備
1、 膠體金探針的制備
(1)將HAuCl4先配制成0. 01%水溶液，取100ml純水加熱至沸騰?！菲澚?攪拌下準(zhǔn)確加入l ml l"/。的HAuCl4，同時(shí)加入1.5 ml質(zhì)量分凄t為P/。的檸檬 酸三鈉水溶液。顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱煮沸15分鐘，冷卻至室溫后加純水 補(bǔ)足至100ml， 4'C避光保存。
(2 ) LC03調(diào)PH值為8. 0-8. 5左右。
(3)將膠體金調(diào)至適宜的pH,優(yōu)選8.0-8.5，更優(yōu)選8.2，用5mM PBS (pH 7. 2)稀釋抗體至O. 2 mg/ml。
2、 金標(biāo)抗體保護(hù)膜的制備
取pH 8. 2的膠體金以lml/管分裝于1. 5 ml的離心管中。每支管中加 入最佳標(biāo)記劑量的抗體，輕搖混勻后放置5分鐘或稍長，此步為抗體與月交 體金顆粒結(jié)合。每管中加入10。/。的BSA100 混勻放置15分鐘或稍長， 此步為封閉。將上面初步制得的膠體金探針以12000 rpm，離心30分鐘， 4 。C，棄上清液。每支離心管中加入l ml重懸液懸浮沉淀后同上離心。棄 上清液，留下管底暗紅色疏;^狀沉淀，加入500 nl重懸液重懸后于4 。C， 1000 rpm，離心10分鐘；取上清液，均勻的滴加在lcm寬的玻璃纖維上， 37°干燥2. 5-3小時(shí)。
3、 硝酸纖維膜的噴涂包被
(1)利用隔流噴金劃線機(jī)以50mm/s的噴膜速度包被兔抗重組蓖麻 毒素A鏈多克隆抗體(lmg/ml含有1.5。/。BSA)和質(zhì)控羊抗鼠IgG (購自鼎 國生物技術(shù)公司，lmg/ml)兩個(gè)條帶的硝酸纖維膜；
(2 )含有膠體金標(biāo)記鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體12ug的玻 璃纖維膜，5mMPB稀釋；最適PH值為8.2
實(shí)施例2、 蓖麻毒素檢測試紙
參見圖1,反應(yīng)支持物為6. 2cm x 0. 4cm PCV板；吸水墊為2cm x 0. 4cm的濾油紙；1. 8cm x 0. 4cm的硝酸纖維膜依次包纟皮羊抗鼠IgG (購 自鼎國生物技術(shù)公司，lmg/ml )，兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體lmg/ml (含有1. 5%BSA封閉劑)，含有0. 4cm x 0. 4cm膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體(標(biāo)金濃度12ug/ml5mM PB稀釋；最適PH值 為8. 2)玻璃纖維膜；樣品墊為2. 7cm x 0. 4cm的玻璃纖維膜；即形成 了蓖麻毒素檢測試紙。
實(shí)施例3、檢測方法
參見附圖2，將待測標(biāo)本與樣品稀釋液混勻，再用移液器將樣品混合 液加入試紙樣品孔處，樣品中的液體依靠虹吸作用上行，10-15分鐘判 讀結(jié)果
如含有蓖麻毒素，則與試紙上膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈 多抗形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的流兔抗重組蓖麻 毒素A鏈多抗結(jié)合，形成紅色線條，即在"T，，處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的毒素，膠體金標(biāo)記多抗繼續(xù)向上流動(dòng)與包被 在膜上的羊抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在"C"處形成紅色條帶。此線 是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會(huì)出現(xiàn)，說明試紙失效。
陽性結(jié)果會(huì)出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線， 如不出現(xiàn)線條說明試紙失效。
實(shí)施例4、采用DJM-3定量金標(biāo)免疫分析儀半定量檢測
1、 可先用檢測法檢測蓖麻毒素試紙條20個(gè)陰性值，利用金標(biāo)儀檢測試 其T/C的比值平均計(jì)算出蓖麻毒素試紙條的定閾值。
2、 其次利用定閾值來用金標(biāo)儀機(jī)器檢測蓖麻毒素試紙條能達(dá)到的最低濃 度。
3、 判讀結(jié)果時(shí)大于或等于定閾值為陽性，小于定閾值為陰性。
檢測蓖麻毒素標(biāo)準(zhǔn)品各個(gè)濃度下，判定值(CUT-0FF )為O. 037的T/C 讀值(表l )。每個(gè)濃度檢測兩次取平均值?？梢?，0. 925pg /ml ~ 14. 8ng/ml 結(jié)果為陽性;檢測靈敏度為O. 925pg/ml。
ii表l 蓖麻毒素試紙條不同濃度樣品半定量檢測結(jié)果
樣品濃度檢測值T (V)質(zhì)控值C (V)T/C結(jié)果
TjT2c2T/CiT/C2T/C平判讀
00.0110.0071.11.1010.0100—
0.925ng/ml0.1280.0130.5500.7230. 230.010.012+
1.85pg/ml0.0260.0220.67O馬0.030.040.035+
3.7ng/ml0.0250.0260.5230.5220.040.050.05+
7.4ng/ml0.0320.0330.6170.5540.050.060.055+
14.8ng/ml0.0540.0560.7290.6800.070.080.075+
本發(fā)明所述的試紙可以配合小型儀器進(jìn)行半定量檢測，不需專業(yè)培 訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨并能客觀保存數(shù)據(jù)，操作簡單，易于推廣，適合基層， 適合于突發(fā)事件的現(xiàn)場檢測，適合流行病學(xué)調(diào)查，并對蓖麻毒素的感染 診斷起到輔助作用。
權(quán)利要求
1、一種檢測試紙，其特征在于，它包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)硝酸纖維膜，該膜包被有重組蓖麻毒素A鏈抗體和質(zhì)控抗體的檢測條帶和質(zhì)控條帶；(4)金標(biāo)抗體保護(hù)膜，其中含有膠體金標(biāo)記的重組蓖麻毒素A鏈抗體。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙，其中，它還包含樣品墊，該樣品墊的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙，其中，所述吸水墊選用濾紙；所述反應(yīng)支持物選用PVC板；所述金標(biāo)抗體保護(hù)膜的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維，其上均勻涂布有膠體金標(biāo)記的抗體。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙，其中，所述金標(biāo)抗體保護(hù)膜由將膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體均勻涂布在聚脂膜、玻璃纖維膜或?yàn)V紙纖維膜上來制成。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)所述的試紙，其中，所述反應(yīng)支持物(5)位于底層，硝酸纖維膜(2)位于反應(yīng)支持物(5)上的中部，該膜的T處是兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體包被的檢測條帶，并且C處是羊抗鼠IgG包被的質(zhì)控條帶；金標(biāo)拔體保護(hù)膜(3 )位于硝酸纖維膜上部的一側(cè)并與之部分重疊，該膜含有膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體；所述吸水墊(1)位于硝酸纖維膜(2 )上部的相對于金標(biāo)抗體保護(hù)膜(3 )而言的另一側(cè)并與硝酸纖維膜(2 )部分重疊；所述樣品墊(4 )位于硝酸纖維膜(2 )上與吸水墊(1)相反的一側(cè)并與金標(biāo)抗體保護(hù)膜(3)部分重疊。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試紙，其中，所述吸水墊一側(cè)為起始端，所述樣品墊一側(cè)為末端，所述檢測抗體的條帶位于接近末端，所述質(zhì)控條帶接近于起始端。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試紙，其中，所述蓖麻毒素的抗體可以是兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體；所述質(zhì)控抗體根據(jù)金標(biāo)抗體的免疫源可選羊抗鼠IgG。
8、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試紙，其中所述兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體標(biāo)記lml膠體金的量為8-15 ug。
9、 一種制備權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的炭疽芽孢桿菌的檢測試紙的制備方法，該方法包括(1)用隔流噴金劃線機(jī)以一定噴膜速度噴涂抗蓖麻毒素抗體和質(zhì)控抗體兩個(gè)條帶的硝酸纖維膜；(2 )制備一種含有膠體金標(biāo)記的抗重組蓖麻毒素抗體的金標(biāo)抗體保護(hù)膜，將膠體金標(biāo)記的抗重組蓖麻抗體均勻涂布在玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥，制成金標(biāo)抗體保護(hù)膜。
10、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，該噴涂包^皮膜的步驟中，噴膜速度優(yōu)選是10-100mm/s。
11、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體，其加入量為l-5mg/ml，該多克隆抗體的稀釋液可以為5mM PBS。
12、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述質(zhì)控羊抗鼠IgG的濃度為0. 1-5 mg/ml。
13、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，將膠體金標(biāo)記的兔抗重組蓖麻毒素A鏈多克隆抗體均勻涂布在玻璃纖維膜上，其中PH為7-9。
14、 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的試紙?jiān)跈z測蓖麻毒素中的應(yīng)用，其中包括將待測標(biāo)本與樣品稀釋液混勻，再將樣品混合液加入試紙樣品孔處，樣品中的液體依靠虹吸作用上行，10-15分鐘判讀結(jié)果。
15、 由權(quán)利要求9 - 13任一項(xiàng)所述的方法制備的檢測蓖麻毒素的試紙。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測試紙，該試紙包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)硝酸纖維膜，該膜包被有兔抗重組蓖麻毒素A鏈抗體和質(zhì)控抗體的檢測條帶和質(zhì)控條帶；(4)金標(biāo)抗體保護(hù)膜，其中含有膠體金標(biāo)記的鼠抗重組蓖麻毒素A鏈抗體；(5)樣品墊。本發(fā)明試紙可以配合小型儀器進(jìn)行半定量檢測，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨并能客觀保存數(shù)據(jù)，操作簡單，易于推廣，適合基層，適合于突發(fā)事件的現(xiàn)場檢測，適合流行病學(xué)調(diào)查，并對蓖麻毒素的感染診斷起到輔助作用。
文檔編號G01N33/52GK101561434SQ20091008496
公開日2009年10月21日 申請日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者孫肖紅, 張曉龍, 宇 楊, 靜 王, 王景林, 聰 聶, 胡孔新, 姍 高 申請人:中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院