專利名稱：皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)測皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)的技術(shù)。
背景技術(shù)：
本申請人一直以來就著眼于老化而進(jìn)行研究開發(fā)。發(fā)現(xiàn)了伴隨老化而發(fā)生變化的蛋白質(zhì)，從而提出了專利文獻(xiàn)1(國際公開第07/023808號公報(bào))等。
有關(guān)抑制蛋白1，已知有抑制抑制蛋白的產(chǎn)生、改變修正植物生長發(fā)育的技術(shù)(專利文獻(xiàn)2 日本特開平11-69921號公報(bào))；抑制由作為組織損傷的結(jié)果所釋放出的游離肌動(dòng)蛋白產(chǎn)生的二次組織損傷的技術(shù)(專利文獻(xiàn)3 日本特開2005-41881號公報(bào))；檢測神經(jīng)系統(tǒng)障礙、神經(jīng)細(xì)胞障礙，作為診斷標(biāo)記物的技術(shù)(專利文獻(xiàn)4 日本特開2007-532915號公報(bào))；作為上皮性癌的生物標(biāo)記物的技術(shù)(專利文獻(xiàn)5 日本特開2008-5^008號公報(bào))。
專利文獻(xiàn)1國際公開第07/023808號公報(bào) 專利文獻(xiàn)2日本特開平11-69921號公報(bào) 專利文獻(xiàn)3日本特開2005-41881號公報(bào) 專利文獻(xiàn)4日本特開2007-532915號公報(bào) 專利文獻(xiàn)5日本特開2008-5^008號公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于使用利用非侵襲的方法采集的皮膚角質(zhì)層，提供將來的皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)。
本發(fā)明的主要構(gòu)成如下。
(1) 一種皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，將皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量作為指標(biāo)，抑制蛋白1的量越多，評價(jià)皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)越高。
(2)根據(jù)⑴所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，將從皮膚角質(zhì)層中提取的抑制蛋白1的量與預(yù)先測定的被驗(yàn)者年齡層的標(biāo)準(zhǔn)化抑制蛋白的量進(jìn)行比較對比。
(3)根據(jù)(1)或O)中所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，皮膚角質(zhì)層為通過非侵襲膠帶剝離方法采集的皮膚角質(zhì)層。
(4)根據(jù)⑴中所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，從45歲以前的被驗(yàn)者身上采集皮膚角質(zhì)層，從該皮膚角質(zhì)層中檢測出抑制蛋白1的量，45歲以后形成的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)以該抑制蛋白1的量作為指標(biāo)。
(5)根據(jù)(4)所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，所采集的皮膚角質(zhì)層來源于臉頰。
(6) 一種篩選方法，其特征在于，使用(1) (5)中任一項(xiàng)所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法篩選對皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)有影響的成分。
本發(fā)明證實(shí)了在機(jī)體內(nèi)大范圍表達(dá)的蛋白質(zhì)且在細(xì)胞內(nèi)構(gòu)成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)即抑制蛋白1成為皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)的指標(biāo)。
特別是作為老化現(xiàn)象的對象，著眼于皺紋形成。使用通過膠帶剝離等非侵襲方法從臉頰上采集的皮膚角質(zhì)層，通過檢測抑制蛋白1并測定其表達(dá)量，可預(yù)測將來的皺紋形成等。特別是對預(yù)測45歲以后發(fā)生的皺紋形成有效。
可為預(yù)防將來皺紋形成等的老化現(xiàn)象采取選擇有效化妝品等的預(yù)防措施，或者可針對皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)等的皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行恰當(dāng)?shù)拿廊葑稍儭?br>

圖1為表示皺紋面積率和年齡的回歸直線的圖。
圖2為用LOWESS曲線表示皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量多的組、中等的組、少的組各組的測定數(shù)據(jù)的圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中使用的抑制蛋白1(PFN1、Gene ID 5216)是在機(jī)體內(nèi)大范圍表達(dá)的蛋白質(zhì)，作為調(diào)節(jié)在細(xì)胞內(nèi)構(gòu)成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)即肌動(dòng)蛋白的聚合/脫聚合的蛋白質(zhì)而已知。
本申請發(fā)明測量了利用非侵襲方法采集的皮膚角質(zhì)層中存在的蛋白質(zhì)即抑制蛋白1，基于其存在量，可知成為該皮膚角質(zhì)層原來源的人將來的皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)。特別是闡明了即使在年輕時(shí)未表現(xiàn)出來，但45歲以后皺紋的發(fā)生狀況也與年輕時(shí)抑制蛋白1的表達(dá)量相關(guān)。
本發(fā)明者通過按各年齡不同而將抑制蛋白1的表達(dá)量建立高中低3級模型，證實(shí)了雖然在45歲左右之前皺紋有相同程度的增加趨勢，但在45歲左右以后，高度抑制蛋白1 組的皺紋面積的增加加速，而低度抑制蛋白1組的皺紋面積的增加得到抑制。
基于此結(jié)果，通過了解抑制蛋白1的表達(dá)量，即可從年輕時(shí)預(yù)測皺紋形成等的皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)，從而可采取選擇化妝品等的預(yù)防措施。而且，即使在45歲以后，也可推測出今后皺紋等的老化的加速性，并可根據(jù)該推測來研究對策，或者可根據(jù)科學(xué)依據(jù)來進(jìn)行化妝品選擇的咨詢。
另外，可通過利用高度抑制蛋白1的皮膚培養(yǎng)模型，探索影響該抑制蛋白1表達(dá)量的被檢物質(zhì)，而篩選出可抑制皺紋形成等老化的藥劑。
本申請發(fā)明因通過膠帶剝離等非侵襲方法安全且容易地采集皮膚角質(zhì)層，關(guān)注抑制蛋白1的表達(dá)量，可短時(shí)間特定該皮膚角質(zhì)層，所以，可在化妝品柜臺簡單測定并在其柜臺處作為選擇化妝品的資料。測定該抑制蛋白1表達(dá)量的機(jī)器可為一體化小型機(jī)器，并將檢測出的結(jié)果與前述分級指標(biāo)相比較而提示。
而且，基于該結(jié)果，也可表示適合的化妝品和菜單。
本發(fā)明作為醫(yī)療目的以外的目的為可評價(jià)皮膚老化等的皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)，并可基于此在醫(yī)療以外的目的上采取處理措施。
從皮膚角質(zhì)層采集抑制蛋白1的方法 (1)通過膠帶剝離法的角質(zhì)層的采集 膠帶剝離法是指通過在皮膚上粘貼粘附膠帶并揭下粘附膠帶，從而采集粘附面上粘附的角質(zhì)層的方法。
使用市售的粘附膠帶，例如可通過在人臉頰部按壓粘附膠帶，使角質(zhì)層粘附在粘附膠帶上來采集。作為市售的粘附膠帶，可例舉ASAHIBI0MED公司制角質(zhì)檢測儀、M0RITEX 公司制角質(zhì)層seal、PR0M0T00L公司制角質(zhì)檢測儀(盤式W、盤式G、PRO式)、Integral公司制Corneofix、3M公司制透明膠帶、3M公司制透明雙面膠帶等。
(2)提取緩沖液 為了從粘附在粘附膠帶上的角質(zhì)層中提取抑制蛋白1，使用提取緩沖液。作為提取緩沖液，例如可例舉如下組成。組成50mM Tris-HCl (pH7. 5)、120mM NaCl (氯化鈉)，ImM Na3VO4 (正釩酸鈉)。
用粘附膠帶采集的皮膚的角質(zhì)層是角化細(xì)胞分化的角質(zhì)層，富含細(xì)胞骨架系的蛋白質(zhì)。因此，為提高抑制蛋白1的提取效率，優(yōu)選在該提取緩沖液中含有適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣?。作為表面活性劑，?yōu)選使用SDS (月桂基硫酸鈉、CH3 (CH2) n0S03Na)。
(3)抑制蛋白1的提取 通過將采集了角質(zhì)層的粘附膠帶放入圓筒容器，使用高速旋轉(zhuǎn)的均質(zhì)器用研杵 (Pestle)(以下稱為“研杵”)摩擦粘附面，可迅速進(jìn)行抑制蛋白1的提取。此外，可將采集了角質(zhì)層的粘附膠帶浸入提取緩沖液中用刮刀刮擦以提取抑制蛋白1，也可使用振蕩法、超聲波照射法。
將粘附膠帶的粘附面朝向圓筒容器內(nèi)側(cè)，將粘附面的相反面沿圓筒容器的內(nèi)側(cè)放入圓筒容器。通過將粘附膠帶的粘附面的相反面沿圓筒容器的內(nèi)側(cè)放入，可容易地用研杵摩擦粘附面。
研杵可以是棒的先端具有可刮取的突起狀、或是刮鏟狀的結(jié)構(gòu)。作為研杵的結(jié)構(gòu)， 例如也可通過在棒的先端連接比棒的直徑大的同心圓筒，在其圓筒上與軸平行設(shè)置多個(gè)缺口部，可在圓筒的圓周上并列設(shè)置多個(gè)刮鏟狀結(jié)構(gòu)(刮取部)，用該刮鏟可刮擦粘附膠帶。 作為市售品，可使用 Handy pestle (Τ0Υ0Β0 公司、code HMX-301)等。Handy pestle (T0Y0B0 公司、code HMX-301)的刮取部的直徑為約7mm。
(4)抑制蛋白1提取液的采集 將抑制蛋白1提取液靜置約1分鐘，使泡沉靜后，優(yōu)選從圓筒容器中吸引、采集抑制蛋白1提取液。
(5)抑制蛋白1的量分析 所得到的抑制蛋白1提取液中的抑制蛋白1的量可通過ELISA法、抗體芯片法、 FRET法定量分析。
皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià) 與皺紋面積率{皺紋面積率是指根據(jù)日本化妝品工業(yè)聯(lián)合會(http://WWW. jcia. org/)的標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)出的皺紋圖像分析參數(shù)。實(shí)際上，是采集皮膚復(fù)制品后，使用圖像分析軟件進(jìn)行形狀補(bǔ)正，從進(jìn)行了形狀補(bǔ)正的3維形狀中提取皺紋，計(jì)算出占測定范圍中的所提取的皺紋面積比率的值，作為圖像分析軟件，例如可為有限會社ASAHIBI0MED的反射用復(fù)制品分析系統(tǒng)ASA-03-R}最相關(guān)的變量是年齡。而且，可證實(shí)抑制蛋白的量作為皺紋面積率的解釋變量有效。
越是抑制蛋白1的量多的人，越有皺紋面積率大的趨勢。特別是45歲以上時(shí)，抑制蛋白1的量多的人皺紋面積率增大，抑制蛋白1的量少的人皺紋面積率減小的趨勢更為顯著。因此，可預(yù)測出在45歲以前，皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量比平均值高時(shí)，在超過 45歲時(shí)皺紋面積率的增大趨勢比其年齡層的平均強(qiáng)。另一方面，可預(yù)測在45歲以前，皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量比平均值低時(shí)，在超過45歲時(shí)皺紋面積率的增大趨勢比其年齡層的平均弱。
即45歲以前，抑制蛋白1的量的多寡對皺紋面積率沒什么影響，但在超過45歲時(shí)，皮膚角質(zhì)層中抑制蛋白1的量多的人皺紋面積率會增大，可評價(jià)為皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)高。
皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)降低劑的篩選 此外，可通過探索使抑制蛋白1的量減少的成分來篩選皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)降低劑。例如，在對裸鼠照射紫外線使其皺紋形成的實(shí)驗(yàn)系中，通過探索使抑制蛋白1的量減少的成分并投給該成分，確認(rèn)能否降低皺紋面積率。
實(shí)施例 1.被驗(yàn)者 用表1所示的年齡組成對男女人數(shù)191名進(jìn)行試驗(yàn)。
表 1
權(quán)利要求
1.一種皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，將皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量作為指標(biāo)，抑制蛋白1的量越多，評價(jià)皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)越高。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，將從皮膚角質(zhì)層中提取的抑制蛋白1的量與預(yù)先測定的被驗(yàn)者年齡層的標(biāo)準(zhǔn)化抑制蛋白1的量進(jìn)行比較對比。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，皮膚角質(zhì)層為通過非侵襲膠帶剝離方法采集的皮膚角質(zhì)層。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，從45歲以前的被驗(yàn)者身上采集皮膚角質(zhì)層，從該皮膚角質(zhì)層中檢測出抑制蛋白1的量，45歲以后形成的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)以該抑制蛋白1的量作為指標(biāo)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其特征在于，所采集的皮膚角質(zhì)層來源于臉頰。
6.一種篩選方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法篩選對皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)有影響的成分。
全文摘要
一種皮膚老化風(fēng)險(xiǎn)的評價(jià)方法，其將使用非侵襲方法采集的皮膚角質(zhì)層中的抑制蛋白1的量作為指標(biāo)。
文檔編號G01N33/15GK102187229SQ20098014118
公開日2011年9月14日 申請日期2009年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日
發(fā)明者北島誠司, 速水耕介 申請人:株式會社芳珂