專利名稱：通過(guò)測(cè)定adm和bnp的水平在患有心力衰竭的患者中進(jìn)行預(yù)后和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于臨床診斷學(xué)領(lǐng)域。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及通過(guò)測(cè)定標(biāo)志物肽的水平在患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者中進(jìn)行結(jié)果預(yù)后和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
背景技術(shù)：
心力衰竭(HF)、也稱為充血性心力衰竭(CHF)，是一種當(dāng)心臟的結(jié)構(gòu)或功能問(wèn)題損傷了其供應(yīng)充足血流以滿足身體需要的能力時(shí)發(fā)生的心臟病癥。它能夠引起大量各不相同的癥狀，特別是在靜息時(shí)或用力和/或疲勞期間呼吸短促(SOB)、流體潴留的征兆例如肺充血或踝腫脹，以及靜息時(shí)心臟的結(jié)構(gòu)或功能異常的客觀證據(jù)。然而，一些患者可能完全無(wú)癥狀，并且心臟的無(wú)癥狀結(jié)構(gòu)或功能異常被認(rèn)為是有癥狀心力衰竭的先兆，并伴有高死亡率(Wang等，2003. Circulation 108 =977-82) 心力衰竭是常見(jiàn)疾病影響超過(guò)2% 的美國(guó)人口或幾乎5百萬(wàn)人，并且30%至40%的患者在接受診斷后1年內(nèi)死于心力衰竭 (McMurray JJ.，Pfeffer Μ. A. 2005. Lancet 365:1877-89)。由于缺乏公認(rèn)的定義和確定性診斷的困難，心力衰竭通常不能被診斷，特別是在早期階段。使用適合的療法，心力衰竭在大多數(shù)患者中可以被控制，但它是潛在的威脅生命的病癥，并且進(jìn)行性疾病伴有10%的總年度死亡率。它是年齡超過(guò)65歲的人群中住院治療的主要原因(Haldemarm G. A.等， 1999. Am Heart J 137:352-60)。結(jié)果，在歐洲國(guó)家，心力衰竭的控制消耗總健康護(hù)理費(fèi)用的 1-2% (Berry 等，2001. Eur J Heart Fail 3 :749-53)。發(fā)明描述本發(fā)明的主題是提供用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，所述方法包括下列步驟a.提供來(lái)自所述患者的樣品，b.測(cè)定所述樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，c.測(cè)定所述樣品中BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，d.將所述ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估相關(guān)聯(lián)。所述結(jié)果或所述風(fēng)險(xiǎn)事項(xiàng)可以是指存活和/或功能性結(jié)果。在本文中，心力衰竭優(yōu)選是指急性心力衰竭(AHF)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)90日后、優(yōu)選為60日后、更優(yōu)選為45日后、最優(yōu)選為30日后的結(jié)果。本發(fā)明還提供了用于將患者分層到風(fēng)險(xiǎn)組中的方法，所述患者患有心力衰竭和/ 或呼吸短促，并且所述方法包含上面描述的步驟。在本文中，優(yōu)選情況下ADM或其片段或其前體或所述前體的片段是中段腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM)。此外，優(yōu)選情況下，BNP或其片段或其前體或所述前體的片段是NT-proBNP。在本發(fā)明方法的具體實(shí)施方案中，ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平被差分加權(quán)。功能性結(jié)果可以被確定為疾病嚴(yán)重性的排序或程度，例如確定時(shí)間后患者的健康狀態(tài)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，附加地測(cè)定選自下列的至少一種臨床參數(shù)年齡、性別、收縮壓、舒張壓、抗高血壓治療、體重指數(shù)、心率、體溫、糖尿病的存在、當(dāng)前吸煙嗜好，最優(yōu)選情況下選自心率、體溫、體重指數(shù)、收縮壓和舒張壓。在某些特定實(shí)施方案中，可以附加地測(cè)定其他實(shí)驗(yàn)室參數(shù)，例如其他預(yù)后標(biāo)志物、 特別是其他肽激素及其片段或其前體或所述前體的片段的水平。其他預(yù)后標(biāo)志物可以選自肌鈣蛋白、髓過(guò)氧化物酶、CRP、新喋呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，以及采取成熟肽、前體、激素原和相關(guān)激素原片段形式的下列肽心房利尿鈉肽、內(nèi)皮素、血管加壓素。
在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及按照上面描述的方法對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，其中ADM或其片段或其前體或其片段和BNP 或其片段或其前體或其片段的水平單獨(dú)地或與其他預(yù)后有用的實(shí)驗(yàn)室或臨床參數(shù)組合，通過(guò)可以選自下列可選方案的方法，用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估-與患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群體中全部預(yù)定樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的中位數(shù)進(jìn)行比較，-與患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群體中全部預(yù)定樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的分位數(shù)進(jìn)行比較，-根據(jù)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析或使用風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)計(jì)算例如NRI(凈重新分類指數(shù))或 IDI (綜合鑒別指數(shù))進(jìn)行計(jì)算。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，所述方法包含下列步驟a.提供來(lái)自所述患者的樣品，b.測(cè)定所述樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，c.將所述ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估相關(guān)聯(lián)。當(dāng)使用ADM作為標(biāo)志物時(shí)，本發(fā)明的方法的優(yōu)選實(shí)施方案是除了 ADM或其片段或其前體或所述前體的片段之外還測(cè)定肌鈣蛋白。ADM增加了肌鈣蛋白的有效性，肌鈣蛋白為 MR-ADM增加有效性。在該特定實(shí)施方案中，優(yōu)選預(yù)測(cè)短期結(jié)果，即45日后、40日后、35日后、30日后、 25日后、20日后、15日后、10日后或5日內(nèi)或其后、優(yōu)選為30日后的結(jié)果。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)90日后的結(jié)果。本發(fā)明還涉及用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的試劑盒，所述試劑盒包含至少一種針對(duì)ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針和至少一種針對(duì)BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針。
優(yōu)選情況下，針對(duì)ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針是針對(duì) MR-proADM。針對(duì)BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針優(yōu)選針對(duì)NT-proBNP。本發(fā)明還涉及所述方法和試劑盒的應(yīng)用，用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。此外，本發(fā)明涉及方法和試劑盒的應(yīng)用，用于在患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者中監(jiān)測(cè)治療。通過(guò)本發(fā)明的方法或通過(guò)使用本發(fā)明的方法獲得的標(biāo)志物的水平，可以本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員熟知的各種方式進(jìn)行分析。例如，可以將獲得的每個(gè)測(cè)定結(jié)果與“正?！敝祷虮砻魈囟膊』蚪Y(jié)果的值進(jìn)行比較。具體的診斷/預(yù)后可以取決于每個(gè)測(cè)定結(jié)果與這種值的比較，所述值可以被稱為診斷或預(yù)后“閾值”。在某些實(shí)施方案中，用于一種或多種診斷或預(yù)后指示物的測(cè)定方法，僅僅通過(guò)測(cè)定方法中指示物的存在或不存在與病癥或疾病相關(guān)聯(lián)。例如，可以設(shè)計(jì)測(cè)定方法，使得只有當(dāng)高于特定目標(biāo)閾值濃度時(shí)才出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)，并且低于該濃度時(shí)測(cè)定方法不提供高于背景的信號(hào)。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏度和特異性不僅取決于測(cè)試的分析“質(zhì)量”，而且還取決于構(gòu)成異常結(jié)果的定義。在實(shí)踐中，典型地通過(guò)將“正?！?即表觀健康的)和“患病”群體的變量值對(duì)其相對(duì)頻率進(jìn)行作圖，計(jì)算出受試者工作特征曲線(R0C曲線)。對(duì)于任何特定標(biāo)志物來(lái)說(shuō)，患有或未患疾病的對(duì)象的標(biāo)志物水平分布可能交疊。在這些條件下，測(cè)試不能以100%準(zhǔn)確性絕對(duì)辨別正常與疾病，并且交疊的區(qū)域表示測(cè)試不能辨別正常與疾病的地方。選擇一個(gè)閾值，高于它(或低于它，取決于標(biāo)志物隨著疾病如何變化)時(shí)測(cè)試被認(rèn)為是異常的，低于它時(shí)測(cè)試被認(rèn)為是正常的。ROC曲線下的面積是感覺(jué)到的測(cè)量值將允許正確鑒定病癥的概率的度量。即使在測(cè)試結(jié)果不一定給出準(zhǔn)確數(shù)字的情況下，ROC曲線也能使用。只要人們能夠?qū)Y(jié)果排序，人們即能產(chǎn)生ROC曲線。例如，在“患病”樣品上進(jìn)行的測(cè)試的結(jié)果可以按照程度排序(例如1 =低，2 =正常，3 =高)。這種排序可以與“正?！比后w中的結(jié)果相關(guān)聯(lián)，并產(chǎn)生ROC曲線。這些方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的。參見(jiàn)例如Hanley 等，1982. Radiology 143 :29-36.優(yōu)選情況下，所選的閾值能夠提供的ROC曲線面積大于約 0. 5、更優(yōu)選大于約0. 7、更優(yōu)選大于約0. 8、更優(yōu)選大于約0. 85，并且最優(yōu)選大于約0. 9。在該上下文中，術(shù)語(yǔ)“約”是指給定測(cè)量值的+/-5 %。ROC曲線的水平軸表示(1-特異性)，其隨著假陽(yáng)性率而增加。曲線的垂直軸表示靈敏度，其隨著真陽(yáng)性率而增加。因此，對(duì)于所選的具體截止值來(lái)說(shuō)，可以測(cè)定(ι-特異性) 的值，并可以獲得相應(yīng)的靈敏度。ROC曲線下的面積是測(cè)量到的標(biāo)志物水平將允許正確鑒定疾病或病癥的概率的度量。因此，ROC曲線下的面積可用于確定測(cè)試的有效性。在某些實(shí)施方案中，不依賴于組中的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物的具體閾值來(lái)確定從對(duì)象獲得的標(biāo)志物水平分布情況是否指示了特定診斷/預(yù)后。相反，本發(fā)明可以利用標(biāo)志物組 “分布情況”作為不可分割的整體進(jìn)行評(píng)估。這種標(biāo)志物組中變化的特定“指紋”組合形式能夠有效用作特定的診斷或預(yù)后指示物。正如在本文中討論的，變化的組合形式可以從單一樣品或組的一個(gè)或多個(gè)成員的時(shí)間變化(或組的響應(yīng)值)獲得。這里的組是指一組標(biāo)志物。正如在本文后面所描述的，組的響應(yīng)值優(yōu)選通過(guò)對(duì)在各種截止值下特定標(biāo)志物組的靈敏度(即真陽(yáng)性)對(duì)組的1_(特異性)(即假陽(yáng)性)進(jìn)行ROC曲線作圖來(lái)確定。在這些方法中，來(lái)自對(duì)象的標(biāo)志物測(cè)量值的分布情況合在一起，被認(rèn)為提供了診斷或預(yù)后的全局概率(表示成數(shù)字分值或風(fēng)險(xiǎn)百分率)。在這樣的實(shí)施方案中，標(biāo)志物的某些子集的增加可能足以在一個(gè)患者中指示特定診斷/預(yù)后，而標(biāo)志物的不同子集的增加可能足以在另一個(gè)患者中指示相同或不同的診斷/預(yù)后。也可以向組中的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)志物施加權(quán)重因數(shù)，例如，當(dāng)標(biāo)志物在鑒定特定診斷/預(yù)后中效用特別高時(shí)，可以將其權(quán)重成使得在給定水平下，它單獨(dú)即足以傳遞陽(yáng)性結(jié)果的信號(hào)。同樣，也可以提供權(quán)重因數(shù)，使得特定標(biāo)志物的任何給定水平都不足以傳遞陽(yáng)性結(jié)果的信號(hào)，而只有當(dāng)另一個(gè)標(biāo)志物也有助于分析時(shí)才傳遞結(jié)果的信號(hào)。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組被選擇成表現(xiàn)出至少約70%的靈敏度、更優(yōu)選至少約80%的靈敏度、更優(yōu)選至少約85%的靈敏度、更優(yōu)選至少約90%的靈敏度以及最優(yōu)選至少約95%的靈敏度，與至少約70%的特異性、更優(yōu)選至少約80%的特異性、更優(yōu)選至少約85%的特異性、更優(yōu)選至少約90%的特異性以及最優(yōu)選至少約95%的特異性的組合。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，靈敏度和特異性兩者均為至少約75%、更優(yōu)選至少約80%、更優(yōu)選至少約85%、更優(yōu)選至少約90%以及最優(yōu)選至少約95%。在這種情況下， 術(shù)語(yǔ)“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。在其他實(shí)施方案中，陽(yáng)性似然比、陰性似然比、機(jī)會(huì)比或風(fēng)險(xiǎn)比被用作測(cè)試的預(yù)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)或診斷疾病的能力的度量。在陽(yáng)性似然比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陽(yáng)性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在患病組中陽(yáng)性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對(duì)照組中陽(yáng)性結(jié)果可能性更大。在陰性似然比的情況下，值為1表示在“患病” 和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陰性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在測(cè)試組中陰性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對(duì)照組中陰性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/ 或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1. 5或1. 5以上或約0. 67或0. 67以下、更優(yōu)選至少約2或2以上或約0. 5或0. 5以下、更優(yōu)選至少約5或5以上或約0. 2或0. 2以下、更優(yōu)選至少約10或10以上或約0. 1或0. 1以下，以及最優(yōu)選至少約20或20以上或約0. 05或 0. 05以下的陽(yáng)性或陰性似然比。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“約”是指給定測(cè)量值的+/_5%。在機(jī)會(huì)比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者的對(duì)象中陽(yáng)性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在患病組中陽(yáng)性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對(duì)照組中陽(yáng)性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約2或2以上或約0. 5或0. 5以下、更優(yōu)選至少約3或3以上或約0. 33或0. 33以下、更優(yōu)選至少約4或4以上或約0. 25或0. 25以下、更優(yōu)選至少約5或5以上或約0. 2或0. 2 以下以及最優(yōu)選至少約10或10以上或約0. 1后0. 1以下的機(jī)會(huì)比。在這種情況下，術(shù)語(yǔ) “約”是指給定測(cè)量值的+/-5%。在風(fēng)險(xiǎn)比的情況下，值為1表示在“患病”和“對(duì)照”組二者中終點(diǎn)(例如死亡) 的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)相等；值大于1表示在患病組中風(fēng)險(xiǎn)更高；值小于1表示在對(duì)照組中風(fēng)險(xiǎn)更高。 在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組優(yōu)選被選擇成表現(xiàn)出至少約1. 1或1. 1以上或約0. 91或0. 91以下、更優(yōu)選至少約1. 25或1. 25以上或約0. 8或0. 8以下、更優(yōu)選至少約1. 5或1. 5以上或約0. 67或0. 67以下、更優(yōu)選至少約2或2以上或約0. 5或0. 5以下以及最優(yōu)選至少約2. 5或2. 5以上或約0.4或0.4以下的風(fēng)險(xiǎn)比。在這種情況下，術(shù)語(yǔ) “約”是指給定測(cè)量值的+/-5%。
專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)理解，將診斷或預(yù)后指示物與診斷或與將來(lái)臨床結(jié)果的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)，是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。例如，標(biāo)志物水平大于X可以傳遞患者與水平低于或等于X 的患者相比更可能遭受不利后果的信號(hào)，正如通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平所確定的。此外，標(biāo)志物濃度從基線水平的改變可以反映患者的預(yù)后，并且標(biāo)志物水平變化的程度可能與不利事件的嚴(yán)重性相關(guān)。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通常通過(guò)比較兩個(gè)或多個(gè)群體并確定置信區(qū)間和/或ρ值來(lái)確定。參見(jiàn)例如Dowdy和Wearden，《用于研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)》(Statistics for Research), John Wiley & Sons，New York，1983。本發(fā)明的優(yōu)選置信區(qū)間是 90%、95%、97. 5%、98%、 99 %,99. 5 %,99. 9 % 和 99. 99 %,而優(yōu)選的 ρ 值是 0. 1、0· 05,0. 025,0. 02,0. 01,0. 005、 0. 001 和 0. 0001。在其他實(shí)施方案中，可以進(jìn)行多次診斷或預(yù)后標(biāo)志物的測(cè)定，并使用標(biāo)志物的時(shí)間變化確定診斷或預(yù)后。例如，可以在初始時(shí)間測(cè)定對(duì)象樣品中的標(biāo)志物濃度，并在第二個(gè)時(shí)間從第二個(gè)對(duì)象樣品再次測(cè)定。在這樣的實(shí)施方案中，從初始時(shí)間到第二個(gè)時(shí)間標(biāo)志物的增加可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。同樣地，從初始時(shí)間到第二個(gè)時(shí)間標(biāo)志物的減少可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“樣品”是指出于對(duì)目標(biāo)對(duì)象例如患者進(jìn)行診斷、預(yù)后或評(píng)估的目的而獲得的體液樣品。優(yōu)選的測(cè)試樣品包括血液、血清、血漿、腦脊液、尿液、唾液、 痰液和胸膜腔積液。此外，本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，某些測(cè)試樣品在分級(jí)或純化步驟、例如將全血分離成血清或血漿組分后，可以更容易地分析。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品、腦脊液樣品、唾液樣品和尿液樣品，或上面提到的任何樣品的提取物。優(yōu)選情況下，樣品是血液樣品，最優(yōu)選為血清樣品或血漿樣品。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“患者”是指由于疾病而接受醫(yī)療護(hù)理或?qū)⒔邮茚t(yī)療護(hù)理的活的人類或非人類生物體。這包括患有正對(duì)其病征進(jìn)行研究的未確定疾病的人。因此，本文描述的方法和測(cè)定方法適用于人類和獸醫(yī)疾病兩者。當(dāng)在本文中用于指稱診斷和預(yù)后標(biāo)記物的用途時(shí)，術(shù)語(yǔ)“相關(guān)聯(lián)”是指將患者中標(biāo)記物的存在或量，與其在已知患有給定病癥或已知具有給定病癥風(fēng)險(xiǎn)的人、或已知沒(méi)有給定病癥的人中的存在或量進(jìn)行比較。正如上面討論的，可以將患者樣品中的標(biāo)志物水平與已知與特定預(yù)后相關(guān)的水平進(jìn)行比較。樣品的標(biāo)志物水平被說(shuō)成已經(jīng)與診斷相關(guān)聯(lián)；也就是說(shuō)，專業(yè)技術(shù)人員可以使用標(biāo)志物水平確定患者是否具有特定類型的診斷，并做出相應(yīng)應(yīng)答?？商孢x地，樣品的標(biāo)志物水平可以與已知與良好結(jié)果(例如不存在疾病等)相關(guān)的標(biāo)志物水平進(jìn)行比較。在優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志物水平組與總體概率或特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)。呼吸困難或呼吸短促(SOB)被美國(guó)胸科學(xué)會(huì)(American Thoracic Society)定義為“由強(qiáng)度不等的性質(zhì)不同的感覺(jué)所構(gòu)成的呼吸不適的主觀經(jīng)歷”(American Heart Society 1999. Am J Respir Crit Care Med 159:321-40)。它是大量醫(yī)學(xué)障礙、特別是涉及心血管和呼吸系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)障礙的常見(jiàn)癥狀。這些障礙包括阻塞性肺病(例如支氣管炎， C0PD)、肺炎、膿毒病、心肌癥、心力衰竭和缺血性心臟病。患有由外傷或明顯心肌梗塞(MI) 引起的SOB的患者不是本發(fā)明的對(duì)象。急性心力衰竭(AHF)被定義為異常心功能繼發(fā)癥狀和征兆的快速發(fā)作。它可能在以前患有或未患心臟病的情況下發(fā)生。心臟機(jī)能障礙可以涉及收縮或舒張機(jī)能障礙、心律異?；蚯柏?fù)荷與后負(fù)荷失諧。AHF自身可以表現(xiàn)為急性新發(fā)(在以前沒(méi)有已知心臟機(jī)能障礙的患者中AHF的新發(fā)作)或慢性心力衰竭的急性代償失調(diào)(Nieminen等，2005. Eur Heart J 26 :384-416 ；Dickstein 等，2008. Eur Hear J 29 :2388-442)。在本發(fā)明的上下文中，ADM涉及腎上腺髓質(zhì)素或其片段或其前體或所述前體的片段。ADM前體的優(yōu)選片段是中段proADM(MR-proADM)。在本發(fā)明的情形中，ProADM24_71 (或 PreproADM45^92)是特別優(yōu)選的標(biāo)志物肽。標(biāo)志物肽的“片段”是指長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸、優(yōu)選長(zhǎng)度為至少6個(gè)氨基酸殘基的片段。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“水平”是指從患者獲取的樣品中標(biāo)志物肽的濃度(優(yōu)
選表示成重量/體積，M。本文中的術(shù)語(yǔ)“結(jié)果”是指例如患者在預(yù)定時(shí)間后例如3日后、5日后、10日后、14 日后、20日后、3周后、4周后、30日后、45日后、60日后、90日后、3個(gè)月后、6個(gè)月后、1年后， 優(yōu)選在30日后存活。在本發(fā)明的情形中，術(shù)語(yǔ)“功能性結(jié)果”是指在預(yù)定時(shí)間后例如3日后、5日后、10 日后、14日后、20日后、3周后、4周后、30日后、45日后、60日后、90日后、3個(gè)月后、6個(gè)月后、1年后，優(yōu)選在30日后疾病嚴(yán)重性的程度，即患者的健康狀態(tài)。本文中標(biāo)志物肽的水平的測(cè)定(或測(cè)量或檢測(cè))使用下面解釋的檢測(cè)方法和/或診斷測(cè)定方法來(lái)進(jìn)行。當(dāng)在本文中提到時(shí)，“測(cè)定方法”或“診斷測(cè)定方法”可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類型的測(cè)定方法。這樣的測(cè)定方法可以基于待檢測(cè)被分析物與具有一定親和性的一種或多種捕獲探針的結(jié)合。對(duì)于捕獲分子與靶分子或目標(biāo)分子之間的相互作用來(lái)說(shuō)，親和常數(shù)優(yōu)選大于IO8M4。在本發(fā)明的上下文中，“捕獲分子”是可用于結(jié)合來(lái)自樣品的靶分子或目標(biāo)分子、 即被分析物(即在本發(fā)明的情況下是心血管肽)的分子。因此，捕獲分子必須在空間上和表面特征例如表面電荷、疏水性、親水性、路易斯供體和/或受體是否存在等方面適當(dāng)塑造， 以特異性結(jié)合靶分子或目標(biāo)分子。因此，結(jié)合可以由例如捕獲分子與靶分子或目標(biāo)分子之間的離子、范德華、n-n、S-Ji、疏水或氫鍵相互作用或兩種以上上面提到的相互作用的組合來(lái)介導(dǎo)。在本發(fā)明的情形中，捕獲分子可以例如選自核酸分子、糖類分子、RNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽或糖蛋白。優(yōu)選情況下，捕獲分子是抗體，包括其與靶分子或目標(biāo)分子具有足夠親和性的片段，并包括重組抗體或重組抗體片段，以及所述抗體或其源自于變體鏈的長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸的片段的化學(xué)和/或生物化學(xué)修飾的衍生物。優(yōu)選的檢測(cè)方法包括各種格式的免疫測(cè)定法，例如放射免疫測(cè)定法(RIA)、化學(xué)發(fā)光和熒光免疫測(cè)定法、酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)、基于Luminex的珠子陣列、蛋白質(zhì)微陣列測(cè)定法，以及快速檢測(cè)格式例如免疫層析條樣試驗(yàn)。測(cè)定法可以是均相或非均相測(cè)定法、競(jìng)爭(zhēng)和非競(jìng)爭(zhēng)性?shī)A心測(cè)定法。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)定法采用夾心測(cè)定法形式，其是非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定法，其中待檢測(cè)和/或定量分子與第一抗體并與第二抗體結(jié)合。第一抗體可以結(jié)合到固相例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或條上，并且第二抗體是例如用染料、放射性同位素或反應(yīng)性或催化活性部分標(biāo)記的抗體。然后通過(guò)適合的方法測(cè)量與被分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量?！皧A心測(cè)定法”所涉及的通用組合物和步驟是已確立的，并為專業(yè)技術(shù)人員所公知。(《免疫測(cè)定手冊(cè)》(The Immunoassay Handbook) ,David Wild Elsevier LTD，Oxford ；第三片反(2005 年 5 月)， ISBN-13 :978-0080445267 ；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb ；10(1) :4-10. PMID :16376134)，在此引為參考。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定方法包含兩種捕獲分子，優(yōu)選為都作為分散相存在于液體反應(yīng)混合物中的抗體，其中第一種標(biāo)記組分附著在第一種捕獲分子上，其中所述第一種標(biāo)記組分是基于熒光或化學(xué)發(fā)光淬滅或擴(kuò)增的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分，并且所述標(biāo)記系統(tǒng)的第二種標(biāo)記組分附著于第二種捕獲分子上，使得當(dāng)兩種捕獲分子與被分析物結(jié)合后產(chǎn)生可測(cè)量信號(hào)，允許檢測(cè)在包含樣品的溶液中形成的夾心復(fù)合物。在更優(yōu)選情況下，所述標(biāo)記系統(tǒng)包含稀土穴狀化合物或稀土螯合物與熒光染料或化學(xué)發(fā)光染料、特別是花青類型的染料的組合。在本發(fā)明的情形中，基于熒光的測(cè)定方法包含使用染料，所述染料可以例如選自 FAM(5-或6-羧基熒光素)、VIC、NED、熒光素、熒光素異硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、 花青染料例如CY3、CY5、CY3. 5、CY5. 5、Cy7、占噸、6-羧基-2’，4’，7’，4，7-六氯熒光素 (HEX)、TET、6-羧基-4，，5，- 二氯-2，，7，- 二甲氧基熒光素(J0E)、N，N，N' , N'-四甲基-6-羧基羅丹明(TAMRA)、6-羧基-X-羅丹明(ROX)、5_羧基羅丹明-6G (R6G5)、6_羧基羅丹明_6G(RG6)、羅丹明、羅丹明綠、羅丹明紅、羅丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒岡綠、香豆素類例如傘形酮、苯并亞胺類例如Hoechst 33258 ；菲啶類例如德克薩斯紅、 雅吉瓦黃、Alexa Fluor、PET、溴化乙錠、吖啶類染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、嚇啉染料、聚甲炔染料等。在本發(fā)明的情形中，基于化學(xué)發(fā)光的測(cè)定方法包含使用基于化學(xué)發(fā)光材料的物理原理的染料，所述原理描述在Kirk-Othmer的《化學(xué)技術(shù)百科全書(shū)》(Encyclopedia of chemical technology) H四 ，J. I. KroschwitzΜ. Howe-GrantJohn Wiley & Sons，1993，vol. 15，p. 518-562中，在此引為參考，包括在551-562頁(yè)中的引用文獻(xiàn)。優(yōu)選的化學(xué)發(fā)光染料是吖啶酯。將患者樣品中的一種或多種標(biāo)志物肽(或其片段或其前體或所述前體的片段)的水平、即濃度，與患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估相關(guān)聯(lián)。例如，標(biāo)志物肽的濃度高于某個(gè)閾值表明患者的不利結(jié)果或高風(fēng)險(xiǎn)。這樣的閾值，對(duì)于MR-proADM來(lái)說(shuō)優(yōu)選在約0. 5至5. Onmol/ 1、更優(yōu)選在1. 0至2. 5pmol/l的范圍內(nèi)，最優(yōu)選為1. 985nmol/l，對(duì)于NT-proBNP來(lái)說(shuō)，優(yōu)選在約250至15000pg/ml、更優(yōu)選為5000至15000pg/ml的范圍內(nèi)，最優(yōu)選為10472pg/ml。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)將患者個(gè)體的標(biāo)志物肽水平與健康群體的某個(gè)百分位數(shù)(例如97. 5百分位數(shù))相關(guān)聯(lián)，來(lái)確定患者的風(fēng)險(xiǎn)和/或結(jié)果。Kaplan-Meier估量值可用于評(píng)估或預(yù)測(cè)患者的結(jié)果或風(fēng)險(xiǎn)(例如發(fā)病率)。序列腎上腺髓質(zhì)素的前體肽(前腎上腺髓質(zhì)素原)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO=I 中。腎上腺髓質(zhì)素原是指前腎上腺髓質(zhì)素原序列的22至185位氨基酸殘基。腎上腺髓質(zhì)素原(pro-ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID N0. 2中。pro-ADM N-端20肽(PAMP)是指 pre-proADM的22-41位氨基酸殘基。PAMP的氨基酸序列提供在SEQ ID NO 3中。MR-pro-腎上腺髓質(zhì)素(MR-pro-ADM)是指pre-pro_ADM的45-92位氨基酸殘基。MR-pro_ADM的氨基酸序列提供在SEQ ID N0:4中。成熟的腎上腺髓質(zhì)素(ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO :5 中。 134個(gè)氨基酸的腦利尿鈉肽的前體肽(pre-pro-BNP)的序列提供在SEQ ID NO 6 中。Pro-BNP是指pre-pro-BNP的27至1；34位氨基酸殘基。pro-BNP的序列顯示在SEQ ID NO :7 中。Pro-BNP 被切割成 N-端 pro-BNP (NT-pro-BNP)和成熟 BNP。NT-pro-BNP 包含 27 至102位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQ ID NO :8中。SEQ ID NO 9顯示了 BNP的序列，其包含pre-pro-BNP肽的103至134位氨基酸殘基。SEQID NO 1 (pre-pro-ADM 的氨基酸序列)
1MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEFRKKffNKffALSRGKRELRMSS
51SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMN
101NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRR
151RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGSAPHFL
SEQID NO :2(pro-ADM的氨基酸序列)
1ARLDVASEFR KKffNKffALSR GKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQ
51DMKGASRSPE DSSPDAARIR VKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLA
101HQIYQFTDKD KDNVAPRSKI SPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAH
151GAPAPPSGSA PHFL
SEQID NO :3(pro-ADM N20的氨基酸序列)
1ARLDVASEFR KKffNKffALSR
SEQID NO :4(MR-pro-ADM 的氨基酸序列)
1ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMKGASRSPEDSS
SEQID NO :5(ADM的氨基酸序列)
1YRQSMNNFQG LRSFGCRFGT CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQ
51GY
SEQID NO 6 (pre-pro-BNP 的氨基酸序列)
1MDPQTAPSRA LLLLLFLHLA FLGGRSHPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHL
51QGKLSELQVE QTSLEPLQES PRPTGVffKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRA
101PRSPKMVQGS GCFGRKMDRI SSSSGLGCKVLRRH
SEQID NO 7 (pro-BNP的氨基酸序列)
1HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV
51WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPRSPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGL
101GCKVLRRH
SEQID NO 8 (NT-pro-BNP 的氨基酸序列)
1HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV
51WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPR
SEQID NO :9(BNP的氨基酸序列)
1SPKMVQGSGC FGRKMDRISS SSGLGCKVLR RH


圖1 存活率對(duì)AHF患者中MR-proADM水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖。圖2 存活率對(duì)AHF患者中MR-proADM水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖，四分位數(shù)1至 3已被合并。圖3 存活率對(duì)AHF患者中BNP水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖。圖4 存活率對(duì)AHF患者中BNP水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖，四分位數(shù)1至3已被合并。圖5 存活率對(duì)AHF患者中NT-proBNP水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖。圖6 存活率對(duì)AHF患者中NT-proBNP水平的四個(gè)四分位數(shù)的作圖，四分位數(shù)1至 3已被合并。圖7 來(lái)自不同天數(shù)下對(duì)標(biāo)志物BNP、NT-proBNP和MR-proADM的ROC圖的曲線下面積(AUC)。圖 8 對(duì)標(biāo)志物 BNP、NT-proBNP 和 MR-proADM 的 ROC 圖。圖9 :MR-proADM高于和低于1. 985pmol/L的閾值的患有或未患AHF的患者中的存活率(依賴于天數(shù)的累積存活率)作圖。圖10患者概述。
圖11= SEQIDNO:1 (pre-pro-ADM的氨基酸序列)
圖12= SEQIDNO:2(pro-ADM的氨基酸序列)
圖13= SEQIDNO:3(pro-ADM N20的氨基酸序列)
圖14= SEQIDNO4 (MR-pro-ADM的氨基酸序列)
圖15= SEQIDNO5 (ADM的氨基酸序列)
圖16= SEQIDNO:6(pre-pro-BNP的氨基酸序列)
圖17= SEQIDNO:7(pro-BNP的氨基酸序列)
圖18= SEQIDNO8 (NT-pro-BNP的氨基酸序列)
圖19= SEQIDNO:9 (BNP的氨基酸序列)
實(shí)施例實(shí)施例1 臨床研究15個(gè)登記中心——召集1641位具有呼吸短促(SoB)和急性心力衰竭(AHF)的患者表1:患者概述
權(quán)利要求
1.一種對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，所述方法包含下列步驟a.提供來(lái)自所述患者的樣品，b.測(cè)定所述樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，c.將所述ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估相關(guān)聯(lián)。
2.一種對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，所述方法包含下列步驟a.提供來(lái)自所述患者的樣品，b.測(cè)定所述樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，c.測(cè)定所述樣品中BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平，d.將所述ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估相關(guān)聯(lián)。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述結(jié)果或所述風(fēng)險(xiǎn)是指存活和/或功能性結(jié)果。
4.權(quán)利要求1到3的方法，其中預(yù)測(cè)3天后、5天后、10天后、14天后、20天后、3周后、 4周后、30天后、90天后、3個(gè)月后、6個(gè)月后、1年后后，優(yōu)選30天后的結(jié)果。
5.用于將患者分層到風(fēng)險(xiǎn)組中的方法，其中所述患者患有心力衰竭和/或呼吸短促， 并且所述方法包含權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的步驟。
6.權(quán)利要求1到5的方法，其中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段是 MR-proADM。
7.權(quán)利要求1到6的方法，其中BNP或其片段或其前體或所述前體的片段是 NT-proBNPo
8.權(quán)利要求1到7的方法，其中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平被差分加權(quán)。
9.權(quán)利要求1到8的方法，其中功能性結(jié)果被確定為結(jié)果嚴(yán)重性的排序或程度。
10.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，其中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平單獨(dú)地或與其他預(yù)后有用的實(shí)驗(yàn)室或臨床參數(shù)組合，通過(guò)可以選自下列可選方案的方法，用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)測(cè)或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估-與患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群體中全部預(yù)定樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的中位數(shù)進(jìn)行比較，-與患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群體中全部預(yù)定樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平的分位數(shù)進(jìn)行比較，-根據(jù)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析或使用風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)計(jì)算例如NRI (凈重新分類指數(shù))或IDI (綜合鑒別指數(shù))進(jìn)行計(jì)算。
11.權(quán)利要求1到10的方法，其中附加地測(cè)定選自下列的至少一種臨床參數(shù)年齡、性別、收縮壓、舒張壓、抗高血壓治療、體重指數(shù)、心率、體溫、糖尿病的存在、當(dāng)前吸煙嗜好。
12.權(quán)利要求1到11的方法，其中附加地測(cè)定選自下列的至少一種其他實(shí)驗(yàn)室參數(shù) 肌鈣蛋白、髓過(guò)氧化物酶、CRP、新喋呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，以及采取成熟肽、前體、激素原和相關(guān)激素原片段形式的下列肽心房利尿鈉肽、內(nèi)皮素、血管加壓素。
13.用于對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的試劑盒， 所述試劑盒包含至少一種針對(duì)ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針和至少一種針對(duì)BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針。
14.權(quán)利要求13的試劑盒，其中針對(duì)ADM或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針是針對(duì)MR-proADM。
15.權(quán)利要求15的試劑盒，其中針對(duì)BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的捕獲探針是針對(duì)NT-proBNP。
16.權(quán)利要求1到12任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求13到15的試劑盒在對(duì)患有心力衰竭和 /或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的應(yīng)用。
17.權(quán)利要求1到12任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求13到15的試劑盒在對(duì)患有心力衰竭和 /或呼吸短促的患者監(jiān)測(cè)治療中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法，所述方法包含測(cè)定所述患者的所述樣品中ADM或其片段或其前體或所述前體的片段和BNP或其片段或其前體所述前體的片段的水平。
文檔編號(hào)G01N33/74GK102317790SQ200980145015
公開(kāi)日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月11日
發(fā)明者奧利弗·哈特曼, 安德烈亞斯·貝格曼 申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S有限公司