專利名稱：壯觀霉素的毛細(xì)管電泳-電致化學(xué)發(fā)光檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于壯觀霉素的檢測方法，尤其涉及一種壯觀霉素的毛細(xì)管電泳-電致化 學(xué)發(fā)光檢測方法。
背景技術(shù)：
壯觀霉素(spectinomycin)屬于氨基糖苷類的抗菌素，主要用于治療淋病，特異 性很強(qiáng)，副作用少，可用于治療孕婦、兒童淋病。此外，壯觀霉素對革蘭氏陰性菌、陽性菌均 有較好的作用，其作用機(jī)理為抑制細(xì)菌內(nèi)蛋白質(zhì)合成。本品口服不吸收，肌注吸收較完全，1 次肌注2g后，平均100mg/L的血藥峰濃度于給藥后Ih到達(dá)，8h后仍可測得15mg/L。本品 主要經(jīng)腎排泄，48h內(nèi)尿中以原形排出70% 80%，尿藥濃度可高達(dá)1000mg/L以上。該藥 不與血漿蛋白結(jié)合。此外，壯觀霉素作為獸藥的應(yīng)用也很廣泛，在動物性產(chǎn)品如牛奶、肝臟 中常有殘留。因此，壯觀霉素的檢測有重要意義。最近多用液相色譜和質(zhì)譜或熒光聯(lián)用檢測壯觀霉素，質(zhì)譜檢測儀靈敏度高、選擇 性強(qiáng)，但所用儀器昂貴，分析成本高。而熒光法則需要對壯觀霉素進(jìn)行衍生，不僅操作麻煩， 而且加入衍生劑勢必會引入其它雜質(zhì)干擾測定。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是利用毛細(xì)管電泳分離_電致化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)而建立 的生物樣品中壯觀霉素的檢測方法，該方法簡單、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確性好。技術(shù)方案壯觀霉素的毛細(xì)管電泳-電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，檢測步驟為樣品 前處理取血液或尿液，向其加入高氯酸溶液，5000 15000轉(zhuǎn)/分鐘離心，取上清液經(jīng) 0. 45 μ m的濾膜過濾，待用；毛細(xì)管電泳分離將經(jīng)過前處理的生物樣品用高壓進(jìn)樣5 10s，用pH5. 0 11. 0的緩沖液做分離介質(zhì)，在8 20KV高壓下進(jìn)行分離；電致化學(xué)發(fā)光檢 測經(jīng)毛細(xì)管電泳分離出來的目標(biāo)組分流入電致化學(xué)發(fā)光檢測池被檢測；選用的檢測體系 是經(jīng)典的三聯(lián)吡啶釕檢測體系，體系中含2 SmM的釕溶液，pH調(diào)節(jié)至7. 0 9. 0，采用三 電極系統(tǒng)，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電極做參比電極，500-μπι的鉬圓盤電極做工作電極； 目標(biāo)組分與干擾組分可完全分離，用內(nèi)標(biāo)法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。所述 分離介質(zhì)為50mM磷酸鹽緩沖液。所述進(jìn)樣電壓為10KV。有益效果本方法可用于生物樣品中壯觀霉素的檢測。不需要液相色譜儀，不使用 有機(jī)溶劑，樣品用量少(約5nL)；檢測方法用電化學(xué)發(fā)光法，與傳統(tǒng)的紫外或熒光法相比， 不需要衍生，操作簡單，成本低廉，易在各基層單位推廣。
四

圖1是血液中壯觀霉素的毛細(xì)管電泳分離_電致化學(xué)發(fā)光檢測圖譜。1空白 2血液a:內(nèi)標(biāo)b:壯觀霉素 c:雜質(zhì)；圖2是尿液中壯觀霉素的毛細(xì)管電泳分離_電致化學(xué)發(fā)光檢測圖譜。
1空白2尿液a:內(nèi)標(biāo)b:壯觀霉素c，d:雜質(zhì)
五具體實施例方式實施例11試劑和儀器壯觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品；生物樣品；烘箱；毛細(xì)管電泳儀；電致化學(xué)發(fā)光儀。2 方法1)樣品的前處理取約0. 5mL左右的血液或尿液，加入同體積0. 2g/mL左右的高氯酸溶液，高速 (5000 15000轉(zhuǎn)/分鐘)離心，取上清液經(jīng)0. 45 μ m的濾膜過濾，待用。2)毛細(xì)管電泳分離技術(shù)經(jīng)過前處理得到的血液或尿液中會有干擾物，必須經(jīng)過分離才能被準(zhǔn)確檢測。在 IOKV的高壓下電動進(jìn)樣10s，用50mM磷酸鹽緩沖液做分離介質(zhì)(堿性環(huán)境，不同生物樣品， PH要求稍有不同)，在15KV的高壓下進(jìn)行分離，目標(biāo)組分約在10分鐘時出峰。3)電致化學(xué)發(fā)光檢測條件選用的檢測體系是經(jīng)典的三聯(lián)吡啶釕檢測體系，體系中含5mM的釕溶液，pH = 8. 0 的磷酸鹽緩沖液。采用三電極系統(tǒng)，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電極(3. OM NaCl)做參比電 極，500-μ m的鉬圓盤電極做工作電極。工作電極和毛細(xì)管的出口距離約為70士5 μ m，保證 檢測組分從毛細(xì)管流出后直接接觸工作電極。一要防止兩者距離太近，毛細(xì)管出口被工作 電極堵嚴(yán)，組分難以流出；二要防止兩者距離太遠(yuǎn)，組分難以直接流至工作電極。光電倍增 管高壓為600V ；檢測電位是1. 13V。當(dāng)組分從毛細(xì)管流出至工作電極后即可在氧化電位下 與體系中的三聯(lián)吡啶釕發(fā)生電致化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，產(chǎn)生光信號，被光電倍增管檢測，同時在電 泳圖上出峰。4)定量選用恒定濃度的三甲胺作內(nèi)標(biāo)，加至含有不同標(biāo)準(zhǔn)濃度壯觀霉素的空白血樣中， 依次進(jìn)樣檢測。以壯觀霉素濃度為橫坐標(biāo)，壯觀霉素與三甲胺峰高比為縱坐標(biāo)做工作曲線。 在待檢測樣品中加入同樣濃度的三甲胺作內(nèi)標(biāo)，根據(jù)目標(biāo)峰與三甲胺的峰高比即可通過工 作曲線求出目標(biāo)組分的含量。實施例2壯觀霉素的毛細(xì)管電泳_電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，檢測步驟為樣品前處理取約 0. 5mL左右的血液或尿液，加入同體積0. 2g/mL左右的高氯酸溶液，高速(5000 15000轉(zhuǎn) /分鐘)離心，取上清液經(jīng)0. 45μπι的濾膜過濾，待用；毛細(xì)管電泳分離將經(jīng)過前處理的生 物樣品用IOKV高壓進(jìn)樣5 10s，用pH5. 0 11. 0的緩沖液做分離介質(zhì)(50mM磷酸鹽緩沖 液)，在8 20KV高壓下進(jìn)行分離；電致化學(xué)發(fā)光檢測經(jīng)毛細(xì)管電泳分離出來的目標(biāo)組分 流入電致化學(xué)發(fā)光檢測池被檢測；選用的檢測體系是經(jīng)典的三聯(lián)吡啶釕檢測體系，體系中 含2 8mM的釕溶液，pH調(diào)節(jié)至7. 0 9. 0，采用三電極系統(tǒng)，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電 極做參比電極，500-μπι的鉬圓盤電極做工作電極；目標(biāo)組分與干擾組分可完全分離，用內(nèi) 標(biāo)法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。
權(quán)利要求
壯觀霉素的毛細(xì)管電泳 電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在于檢測步驟為a.樣品前處理取血液或尿液，向其加入高氯酸溶液，5000～15000轉(zhuǎn)/分鐘離心，取上清液經(jīng)0.45μm的濾膜過濾，待用；b.毛細(xì)管電泳分離將經(jīng)過前處理的生物樣品用高壓進(jìn)樣5～10s，用pH5.0～11.0的緩沖液做分離介質(zhì)，在8～20KV高壓下進(jìn)行分離；c.電致化學(xué)發(fā)光檢測經(jīng)毛細(xì)管電泳分離出來的目標(biāo)組分流入電致化學(xué)發(fā)光檢測池被檢測；選用的檢測體系是經(jīng)典的三聯(lián)吡啶釕檢測體系，體系中含2～8mM的釕溶液，pH調(diào)節(jié)至7.0～9.0，采用三電極系統(tǒng)，鉑絲為對電極，銀 氯化銀電極做參比電極，500 μm的鉑圓盤電極做工作電極；目標(biāo)組分與干擾組分可完全分離，用內(nèi)標(biāo)法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的壯觀霉素的毛細(xì)管電泳_電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在 于所述分離介質(zhì)為50mM磷酸鹽緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的壯觀霉素的毛細(xì)管電泳_電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，其特征在 于所述進(jìn)樣電壓為10KV。
全文摘要
壯觀霉素的毛細(xì)管電泳-電致化學(xué)發(fā)光檢測方法，檢測步驟為樣品前處理；毛細(xì)管電泳分離；電致化學(xué)發(fā)光檢測。本方法可用于生物樣品中壯觀霉素的檢測。不需要液相色譜儀，不使用有機(jī)溶劑，樣品用量少(約5nL)；檢測方法用電化學(xué)發(fā)光法，與傳統(tǒng)的紫外或熒光法相比，不需要衍生，操作簡單，成本低廉，易在各基層單位推廣。
文檔編號G01N27/447GK101949885SQ201010252818
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月12日
發(fā)明者衛(wèi)偉, 康學(xué)軍, 鄧慧華, 陸祖宏 申請人:東南大學(xué)