專利名稱：一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物油的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及植物油中微量茶多酚的檢測(cè)方 法，更具體地涉及一種植物油中脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
茶多酚(Tea PolypHenols)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，是形成茶葉色香味的主 要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一。脂溶性茶多酚是茶葉的有效提取物 茶多酚經(jīng)過化學(xué)截枝改性而成的，為棕色油狀物或粉末狀，無毒、無異味，是一種高效的具 有特定生理功能的生物抗氧化劑，可以添加在植物油脂中，其抗氧化能力可與特丁基對(duì)苯 二酚(TBHQ)媲美，大于沒食子酸丙酯(PG)、2，6_二叔丁基對(duì)甲苯(BHT)、叔丁基對(duì)羥基茴香 醚(BHA)。添加于食品中無異味，無沉淀，不會(huì)引起產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的變化。茶多酚具有較強(qiáng) 的清除體內(nèi)自由基、抗衰老、防治高脂血癥引起的疾病、增強(qiáng)人體免疫功能等作用，已被諸 多研究所證實(shí)，茶多酚及其衍生物的開發(fā)利用已引起國(guó)內(nèi)外茶學(xué)、醫(yī)藥學(xué)及食品等領(lǐng)域的 極大關(guān)注。食用植物油經(jīng)精煉各個(gè)工序后，脫除了維生素E、磷脂等大部分天然抗氧化劑，易 發(fā)生氧化反應(yīng)，導(dǎo)致油脂變質(zhì)。同時(shí)，一些富油食品中的油脂在空氣中易發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn) 生自由基和過氧化物，過氧化物進(jìn)一步分解成小分子的醛、酮、酸等有機(jī)化合物，對(duì)人體健 康有極大的損害。將茶多酚應(yīng)用在植物油脂領(lǐng)域，取代合成抗氧化劑，一方面可以防止油脂 氧化變質(zhì)，另一方面可以增加植物油脂中微量營(yíng)養(yǎng)成分，有利于營(yíng)養(yǎng)健康。水溶性茶多酚的研究已經(jīng)十分廣泛，脂溶性茶多酚的報(bào)道還不多，其較高含量的 檢測(cè)可以參照水溶性茶多酚的方法，但在植物油脂中加入微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)技術(shù)國(guó) 內(nèi)外還沒有報(bào)道。在GB2760-2007中規(guī)定茶多酚在基本不含水的脂肪和油里最大添加量為 0.4g/kgo

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于改進(jìn)已有技術(shù)的不足而提供一種操作簡(jiǎn)便、成本低廉、重復(fù)性 好、準(zhǔn)確度高的植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特 點(diǎn)是該方法包括以下步驟(1)制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量；(2)制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線在純凈植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6種 以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚的油樣2-15g，其中必須有植物油空白樣品1份，即含有 Oppm的脂溶性茶多酚，分別加入有機(jī)溶劑、堿液進(jìn)行皂化、萃取，得萃取液，將萃取液定容， 取一定量溶液，加入顯色劑反應(yīng)50-70min，顯色后，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A3，繪制加標(biāo) 曲線1，為y = 9*10_7Χ2+0· 0002χ+0. 0014，R2 = 0. 999，χ為油樣中脂溶性茶多酚的濃度，單 位為ppm，y為吸光度A3;
(3)檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含量取3份以上等量待測(cè)油樣及等量的植 物油空白樣品1份，分別加入有機(jī)溶劑、堿液進(jìn)行皂化、萃取，得萃取液，將萃取液定容，取 一定量溶液，加入顯色劑反應(yīng)50-70min，顯色后，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定植物油空白樣品的吸光 度Atl，待測(cè)油樣的吸光度為八#，所測(cè)Ati-Aci的值代入加標(biāo)曲線，即得出油樣品中脂溶性茶多 酚的含量。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是所述的制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線是(1)在純凈植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6種以上含有0-400ppm脂溶性茶多 酚的油樣2-15g，其中必須有植物油空白樣品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚；(2)在待測(cè)油樣及空白樣中加入5_15mL乙醚并轉(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，靜置10-30min后分取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH至6_7，剩余 的醚層再用2-10mL5% KOH重復(fù)萃取2次，每次各15-25min，收取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH 至6-7，合并3次萃取液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待測(cè)，得待測(cè)液；(3)顯色反應(yīng)用移液管分別移取待測(cè)液0. 5-1. 5mL于IOmL試管內(nèi)，加入3_7mL 福林酚試劑，搖勻，反應(yīng):3min 8min，加入2_6mL 5_10 %的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置 50-70min，得樣液；(4)將樣液置于IOmm比色皿，在750-780nm波長(zhǎng)條件下，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度 A3，繪制加標(biāo)曲線1，為y = 9*10_7X2+0. 0002X+0. 0014，R2 = 0. 999，χ為油樣中脂溶性茶多 酚的濃度，單位為ppm，y為吸光度A3。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是所述的檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含
量是(1)取3份以上等量待測(cè)油樣及1份等量的植物油空白樣品，均為2_15g ；(2)在待測(cè)油樣及空白樣中加入5_15mL乙醚并轉(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，靜置10-30min后分取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH至6_7，剩余 的醚層再用2-10mL5% KOH重復(fù)萃取2次，每次各15-25min，收取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH 至6-7，合并3次萃取液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待測(cè)，得待測(cè)液；(3)顯色反應(yīng)用移液管分別移取待測(cè)液0. 5-1. 5mL于IOmL試管內(nèi)，加入3_7mL 福林酚試劑，搖勻，反應(yīng):3min 8min，加入2-6mL5_10 %的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置 50-70min，得樣液；(4)將樣液置于IOmm比色皿，在750-780nm波長(zhǎng)條件下，用分光光度計(jì)測(cè)定植物油 空白樣品的吸光度Atl，待測(cè)油樣的吸光度為六#，所測(cè)Ati-Aci的值代入加標(biāo)曲線，即得出油樣 品中脂溶性茶多酚的含量。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線和檢測(cè)待測(cè)油 樣中脂溶性茶多酚的含量，先將待測(cè)溶液加入有機(jī)溶劑，上樣到硅膠層析柱，用有機(jī)溶劑洗 脫層析柱，收集洗脫液，減壓蒸干，然后加入有機(jī)溶劑、堿液皂化，萃取，得萃取液，得到的加 標(biāo)曲線2為y = 9*10_7X2+0. 00019X+0. 0013，R2 = 0. 9991，χ均為油樣中脂溶性茶多酚的 濃度，單位為ppm，y為吸光度A3。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是用20_30mL石油醚溶解待測(cè)油樣后上樣， 待樣液接近全部過柱時(shí)，用10_15mL石油醚繼續(xù)淋洗，最后用10-15mL含2%冰乙酸的甲醇 洗脫層析住，收集甲醇洗脫液，于40°C以下減壓蒸干，然后加入有機(jī)溶劑、堿液皂化，萃取，得萃取液。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是所述的制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分 析脂溶性茶多酚的有效成分含量是配制6種以上濃度在0. 01-0. 05mg/mL之間的沒食子酸 乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用酒石酸亞鐵比色法，在MOnm波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度Al， 以沒食子酸乙酯濃度χ為橫坐標(biāo)，單位為mg/mL，以吸光度y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線y =14. 248x, R2 = 0. 9994 ；準(zhǔn)確稱取0. 1-0. 3g脂溶性茶多酚，加入2_15mL無水乙醇，用超聲波輔助溶解， 用水定容至25mL容量瓶中，取ImL加水稀釋到50mL容量瓶中待測(cè)，利用酒石酸亞鐵比色 法，在MOnm波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A2，依據(jù)沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 14. 248x，得到脂溶性茶多酚相對(duì)于沒食子酸乙酯的濃度，再乘以換算系數(shù)1. 5，即得脂溶性 茶多酚的有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之間，其中χ為濃度，單位為mg/mL， y為吸光度A2。本發(fā)明不使用GC、HPLC等大型實(shí)驗(yàn)設(shè)備，通過顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定植物油脂 中含有脂溶性茶多酚含量，具有實(shí)驗(yàn)儀器簡(jiǎn)單、成本低廉、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，易于準(zhǔn)確測(cè) 定油脂中脂溶性茶多酚的含量，能夠很方便的應(yīng)用于生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)的監(jiān)督和管理，特別適合基 層使用，具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明使用的沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液為采用購(gòu)置sigma公司的沒食子酸乙酯標(biāo) 準(zhǔn)品配制濃度在0. 01-0. 05mg/mL之間的標(biāo)準(zhǔn)溶液；脂溶性茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液是稱取脂溶性 茶多酚0. 1-0. 3g，加入適量乙醇，超聲波輔助溶解，用水定容配制成濃度為0. 05-0. 25mg/ mL的溶液。本發(fā)明是將沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液在MOnm波長(zhǎng)條件下顯色，測(cè)得吸光度Al，得 到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線y = 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；將脂溶性茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液在540nm波長(zhǎng)條件下顯色，每個(gè)樣品取三份，分別測(cè)得 吸光度A2，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 14. M8x，得到對(duì)應(yīng)的相對(duì)于沒食子酸乙酯的濃度，再乘以換 算系數(shù)1. 5，即得脂溶性茶多酚的有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之間。其中χ為濃度，單位為mg/mL，y為吸光度，線性相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 9994用來表示標(biāo) 準(zhǔn)曲線線性的好壞，一般在0. 999以上，理想狀態(tài)是1。本發(fā)明中，沒食子酸乙酯和脂溶性茶多酚中最主要的成分均為“表沒食子兒茶素 沒食子酸酯”(-)-EGCG，(-)-EGCG占兒茶素的50%以上，大約相當(dāng)于脂溶性茶多酚總量的 1/3，即IOmg沒食子酸乙酯與15mg脂溶性茶多酚相當(dāng)。因此，沒食子酸乙酯和脂溶性茶多 酚的換算系數(shù)為1.5，該系數(shù)是在制定GB8313-1987時(shí)以茶葉的乙酸乙酯提取物作為100% 純品得到的。本發(fā)明中，由于脂溶性茶多酚具有抗氧化功能，加入量非常少時(shí)起到了抗氧化作 用，有部分損失，添加量達(dá)到一定濃度時(shí)，添加量與測(cè)得量呈線性關(guān)系，在有層析洗脫步驟 的檢測(cè)方法得到的加標(biāo)曲線2為y = 9*10_7Χ2+0· 00019Χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，而沒有層 析洗脫步驟的檢測(cè)方法得到的加標(biāo)曲線1為y = 9*10_7x2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，其 中χ為濃度，單位為ppm，y為吸光度，二者的精度略有差異。本發(fā)明可以檢測(cè)的為花生油、葵花仁油、大豆油、山茶油、菜籽油、棉籽油、茶籽油、 棕櫚油、芝麻油、玉米油、紅花油、亞麻油、葡萄籽油、橄欖油、米糠油、小麥胚芽油、豬油、牛油、羊油、魚油等植物油脂中的任意一種或者多種植物油脂混合的調(diào)和油。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例1，一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，是制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量配制6種以 上濃度在0. 01-0. 05mg/mL之間的沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，本實(shí)施例是選取0. 015mg/mL、 0. 02mg/mL、0. 025mg/mL、0. 03mg/mL、0. 035mg/mL、0. 04mg/mL、0. 045mg/mL 沒食子酸乙酉旨標(biāo) 準(zhǔn)溶液，利用酒石酸亞鐵比色法，在MOnm波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度Al，以沒食 子酸乙酯濃度χ為橫坐標(biāo)，以吸光度y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線為y= 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；準(zhǔn)確稱取0. 2g脂溶性茶多酚，加入2-15mL無水乙醇，用超聲波輔助溶解，用水定容 至25mL容量瓶中，取ImL加水稀釋到50mL容量瓶中待測(cè)，利用酒石酸亞鐵比色法，在540nm 波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A2，依據(jù)沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線y= 14. 248x，得到脂 溶性茶多酚相對(duì)于沒食子酸乙酯的濃度，再乘以換算系數(shù)1. 5，即得脂溶性茶多酚的有效成 分含量為26. 61 %，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之間，其中，χ為濃度，單位為mg/mL，y為 吸光度；制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線在純凈植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6種以上 含有0-400ppm脂溶性茶多酚的油樣2-15g，其中必須有植物油空白樣品1份，即含有Oppm 的脂溶性茶多酚，本實(shí)施例中選取其他六份油樣的濃度分別為50ppm、100ppm、150ppm、 200ppm、250ppm、300ppm，在待測(cè)油樣及空白樣中分別加入5_15mL乙醚并轉(zhuǎn)移至60mL分液 漏斗中，加入2-7mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，靜置10-30min后分取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH 至6-7，剩余的醚層再用2-10mL5% KOH重復(fù)萃取2次，每次各15-25min，收取下層，用10% 鹽酸調(diào)節(jié)PH至6-7，合并3次萃取液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待測(cè)，得待測(cè) 液，用移液管分別移取待測(cè)液05-1. 5mL于IOmL試管內(nèi)，加入3_7mL福林酚試劑，搖勻，反應(yīng) 3min 8min，加入2_6mL 7. 5%的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置50-70min，得樣液，將樣液 置于IOmm比色皿，在750-780nm波長(zhǎng)條件下，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A3，繪制加標(biāo)曲線， 為y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，χ為油樣中脂溶性茶多酚的濃度，單位為ppm， y為吸光度A3;檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含量是準(zhǔn)確稱取三份IOg待測(cè)大豆調(diào)和油樣， 以及一份空白油樣，用IOmL乙醚溶解，轉(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入5mL6% KOH進(jìn)行皂化 萃取，60min后取下層，用10%鹽酸調(diào)pH值至6 7，剩余的溶液用5mL 0.5% KOH再萃取 兩次，各30min，取下層，用10%鹽酸調(diào)pH值至6 7，合并3次萃取相，轉(zhuǎn)移至60mL分液漏 斗中，加入IOmL石油醚反萃取，分層，IOmin后取下層，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至 刻度，同時(shí)以不添加脂溶性茶多酚的油樣作為空白，方法同上；取待測(cè)液、水，水用于做試劑 空白對(duì)照用，各ImL于IOmL試管內(nèi)，在每個(gè)試管分別加入5. OmL的福林酚試劑，搖勻，反應(yīng) ;3min anin內(nèi)加入4. 0mL7. 5%的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置60min，于IOmm比色皿、在 765nm波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A#，空白為Atl，所測(cè)Att-Atl的值代入加標(biāo)曲線 1 :y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，取平均值即得出油樣品中脂溶性茶多酚的含 量為192ppm，精密度RSD在0.5% -0. 97%之間。
實(shí)施例2，一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲 線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量的方法與實(shí)施例1相同，制作脂溶性茶多酚加標(biāo) 曲線是在純凈花生油中加入脂溶性茶多酚，配制6種以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚 的油樣2-15g，其中必須有一份植物油空白樣品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚，本實(shí) 施例中選取其他七份油樣的濃度分別為lOOppm、150ppm、200ppm、250ppm、300ppm、350ppm、 400ppm，每一份油樣都經(jīng)過如下步驟取一支層析管，稱取Ig層析用硅膠，懸于石油醚中后 濕法裝柱，準(zhǔn)確稱取油樣5g，用25mL石油醚溶解后上樣，待樣品接近全部過柱時(shí)，用12mL石 油醚繼續(xù)淋洗，最后用12mL含2%冰乙酸的甲醇洗脫層析柱，收集甲醇洗脫液，于40°C以下 減壓蒸干，用IOmL乙醚溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入5mlL5% KOH進(jìn)行皂化萃 取，后續(xù)步驟與實(shí)施例1相同，得到的加標(biāo)曲線2為y = 9*10_7Χ2+0· 00019Χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，χ均為油樣中脂溶性茶多酚的濃度，單位為ppm，y為吸光度A3 ；檢測(cè)待測(cè)油樣含量是準(zhǔn)確稱取五份5g待測(cè)花生油油樣，以及空白油樣一份， 每一份分別用25mL石油醚溶解后上樣，待樣品接近全部過柱時(shí)，用12mL石油醚繼續(xù)淋 洗，最后用12mL含2%冰乙酸的甲醇洗脫層析柱，收集甲醇洗脫液，于40°C以下減壓蒸 干，用IOmL乙醚溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入5mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，后 續(xù)步驟與實(shí)施例1相同，測(cè)定吸光度A#，空白為Atl，所測(cè)Aff-Atl的值代入加標(biāo)曲線2 :y =9*10_7Χ2+0· 00019χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，取平均值即得油樣中脂溶性茶多酚的含量為 95ppm,精密度 RSD 在 0. 58 % -0. 95 % 之間。本發(fā)明中，由于脂溶性茶多酚具有抗氧化功能，加入量非常少時(shí)起到了抗氧化作 用，有部分損失，添加量達(dá)到一定濃度時(shí)，添加量與測(cè)得量呈線性關(guān)系在低濃度樣品添加量 與響應(yīng)值呈二次方關(guān)系，在高濃度呈線性關(guān)系。本發(fā)明中用脂溶性茶多酚對(duì)空白油樣進(jìn)行了添加回收分析，結(jié)果表明，在 100-300ppm加標(biāo)水平，回收率會(huì)隨加標(biāo)水平的提高而有規(guī)律的上升，加標(biāo)回收率在 80% -101. 05%之間，可以用于實(shí)際檢測(cè)，本發(fā)明的方法簡(jiǎn)易、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高。
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權(quán)利要求
1.一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是該方法包括以下步驟(1)制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量；(2)制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線在純凈植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6種以上含 有0-400ppm脂溶性茶多酚的油樣2-15g，其中必須有植物油空白樣品1份，即含有Oppm的 脂溶性茶多酚，分別加入有機(jī)溶劑、堿液進(jìn)行皂化、萃取，得萃取液，將萃取液定容，取一定 量溶液，加入顯色劑反應(yīng)50-70min，顯色后，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A3，繪制加標(biāo)曲線1， 為y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，χ為油樣中脂溶性茶多酚的濃度，單位為ppm， y為吸光度A3;(3)檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含量取3份以上等量待測(cè)油樣及等量的植物油 空白樣品1份，分別加入有機(jī)溶劑、堿液進(jìn)行皂化、萃取，得萃取液，將萃取液定容，取一定 量溶液，加入顯色劑反應(yīng)50-70min，顯色后，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定植物油空白樣品的吸光度 Atl，待測(cè)油樣的吸光度為六#，所測(cè)Ati-AciW值代入加標(biāo)曲線，即得出油樣品中脂溶性茶多酚 的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是所述 的制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線是(1)在純凈植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6種以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚的 油樣2-15g，其中必須有植物油空白樣品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚；(2)在待測(cè)油樣及空白樣中加入5-15mL乙醚并轉(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，靜置10-30min后分取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6_7，剩 余的醚層再用2-10mL5% KOH重復(fù)萃取2次，每次各15-25min，收取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié) PH值至6-7，合并3次萃取液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待測(cè)，得待測(cè)液；(3)顯色反應(yīng)用移液管分別移取待測(cè)液0.5-1. 5mL于IOmL試管內(nèi)，加入3_7mL福 林酚試劑，搖勻，反應(yīng):3min 8min，加入2_6mL 5_10 %的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置 50-70min，得樣液；(4)將樣液置于IOmm比色皿，在750-780nm波長(zhǎng)條件下，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A3， 繪制加標(biāo)曲線1，為y = 9*10_7χ2+0· 0002χ+0. 0014，R2 = 0. 999，χ為油樣中脂溶性茶多酚的 濃度，單位為ppm，y為吸光度A3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是所述 的檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含量是(1)取3份以上等量待測(cè)油樣及1份等量的植物油空白樣品，均為2-15g；(2)在待測(cè)油樣及空白樣中加入5-15mL乙醚并轉(zhuǎn)移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH進(jìn)行皂化萃取，靜置10-30min后分取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6_7，剩 余的醚層再用2-10mL5% KOH重復(fù)萃取2次，每次各15-25min，收取下層，用10%鹽酸調(diào)節(jié) PH值至6-7，合并3次萃取液，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待測(cè)，得待測(cè)液；(3)顯色反應(yīng)用移液管分別移取待測(cè)液0.5-1. 5mL于IOmL試管內(nèi)，加入3_7mL福 林酚試劑，搖勻，反應(yīng):3min 8min，加入2-6mL5_10 %的碳酸鈉溶液，搖勻，室溫下放置 50-70min，得樣液；(4)將樣液置于IOmm比色皿，在750-780nm波長(zhǎng)條件下，用分光光度計(jì)測(cè)定植物油空白 樣品的吸光度Atl，待測(cè)油樣的吸光度為々#，所測(cè)Ati-Aci的值代入加標(biāo)曲線，即得出油樣品中脂溶性茶多酚的含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是 制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線和檢測(cè)待測(cè)油樣中脂溶性茶多酚的含量，先將待測(cè)溶液加入有 機(jī)溶劑，上樣到硅膠層析柱，用有機(jī)溶劑洗脫層析柱，收集洗脫液，減壓蒸干，然后加入有機(jī) 溶劑、堿液皂化，萃取，得萃取液，得到的加標(biāo)曲線2為y = 9*10_7X2+0. 00019X+0. 0013，R2 =0. 9991，χ均為油樣中脂溶性茶多酚的濃度，單位為ppm，y為吸光度A3。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是用 20-30mL石油醚溶解待測(cè)油樣后上樣，待樣液接近全部過柱時(shí)，用10-15mL石油醚繼續(xù)淋 洗，最后用10-15mL含2%冰乙酸的甲醇洗脫層析住，收集甲醇洗脫液，于40°C以下減壓蒸 干，然后加入有機(jī)溶劑、堿液皂化，萃取，得萃取液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，其特征是所述 的制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量是配制6種以上濃 度在0. 01-0. 05mg/mL之間的沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用酒石酸亞鐵比色法，在540nm波 長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度Al，以沒食子酸乙酯濃度χ為橫坐標(biāo)，單位為mg/mL，以 吸光度y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線y = 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；準(zhǔn)確稱取0. 1-0. 3g脂溶性茶多酚，加入2-15mL無水乙醇，用超聲波輔助溶解，用水 定容至25mL容量瓶中，取ImL加水稀釋到50mL容量瓶中待測(cè)，利用酒石酸亞鐵比色法，在 MOnm波長(zhǎng)條件下用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A2，依據(jù)沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 14. 248x, 得到脂溶性茶多酚相對(duì)于沒食子酸乙酯的濃度，再乘以換算系數(shù)1. 5，即得脂溶性茶多酚的 有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之間，其中χ為濃度，單位為mg/mL，y為吸光 度A2。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種植物油中微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)方法，是首先制作沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量、制作脂溶性茶多酚加標(biāo)曲線、然后檢測(cè)待測(cè)油樣的吸光度，所測(cè)吸光度的值代入加標(biāo)曲線，即得出油樣品中脂溶性茶多酚的含量，本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、成本低廉、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/78GK102128827SQ20101057721
公開日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月8日
發(fā)明者崔同, 王曉玲, 王洋, 王珊珊 申請(qǐng)人:山東魯花集團(tuán)有限公司