專利名稱：一種超氧化物歧化酶快速檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種超氧化物歧化酶快速檢測卡，是一種檢測超氧化物歧化酶的 檢測器具，屬于酶檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，簡稱SOD)廣泛存在于生物體內(nèi)含Cu、 Zn.Mn.Fe的金屬類酶。它作為生物體內(nèi)重要的自由基清除劑，可以清除體內(nèi)多余的超氧陰 離子，在防御生物體氧化損傷方面起著重要作用。離子(O2- _)是人體氧代謝產(chǎn)物，它在體內(nèi) 過量積累會引起炎癥、腫瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧陰離子與生物體內(nèi)許多疾病的發(fā) 生和形成有關(guān)。SOD的活力測定方法很多，常見的有化學(xué)法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學(xué)法 應(yīng)用最普遍，化學(xué)法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產(chǎn)生有色中間物和02_ -，利用SOD分解而間接推算酶活力。在化學(xué)方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚 法，化學(xué)發(fā)光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學(xué)擴增法，Cyte還原法等。盡管測定SOD的酶活的方法很多，但由于測定方法不同和具體測定條件不同，不 同實驗室測定同一樣品的酶活相差很大，有的甚至相差近千倍，甚至同一人采用不同方法 測定同一樣品所得數(shù)據(jù)相差也較大。為此，本發(fā)明擬發(fā)明一種基于超氧化物歧化酶蛋白質(zhì)抗原性的免疫學(xué)檢測方法， 采取免疫學(xué)競爭法的原理，結(jié)合膠體金標記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計的一種快速檢測試劑， 可快速特異地檢測樣品中的超氧化物歧化酶。根據(jù)檢測卡樣品檢測線⑴和質(zhì)控線(C)的 有無顯色來判定樣品中的超氧化物歧化酶含量。反應(yīng)是利用超氧化物歧化酶抗原性而建立 的一種蛋白檢測方法，具有特異性強的優(yōu)點，可避免其它檢測方法的假陽性導(dǎo)致的誤檢問 題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實驗室進行，也可在超市、家 庭、車間等實地進行測定。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的在于提供一種能檢測超氧化物歧化酶的檢測器具，直接應(yīng)用免 疫學(xué)的方法直接檢測食品、保健品和化妝品樣品超氧化物歧化酶的含量，克服現(xiàn)有超氧化 物歧化酶活性檢測方法的缺陷，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測方法。本實用新型的技術(shù)方案一種超氧化物歧化酶快速檢測卡，在長條扁平薄殼狀的 檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4 ；測試條2是由支 承背板5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9 所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9，另一端 疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝 酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜7 ；膠體金膜為含抗超氧化物歧化 酶抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含超氧化物歧化酶的檢測帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測試條置入檢測卡外殼 內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測樣品中超氧化物歧化酶的含量，檢測樣品為超氧化物 歧化酶SOD食品、SOD保健品及SOD化妝品，對于各種不同的檢測樣品用不同的處理方法稱取1. OOg超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品或SOD化妝品固體樣品置于玻璃 乳缽中，加入9. OmL蒸餾水研磨5min ；若樣品液澄清，則直接取原液測定；若樣品液渾濁，則 移入IOmL離心管，用少量蒸餾水沖洗乳缽，洗滌并入離心管中，加蒸餾水至刻度，經(jīng)4000r/ min離心15min，取上清液測定。當(dāng)檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣 品中超氧化物歧化酶含量未超標；當(dāng)檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示 被檢測樣品中超氧化物歧化酶含量超標；當(dāng)檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本實用新型的優(yōu)點是能檢測SOD食品、SOD保健品、SOD化妝品等樣品中含有的超 氧化物歧化酶，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。

圖1超氧化物歧化酶快速檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測 試條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。圖2檢測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶， 11、質(zhì)控帶。圖3超氧化物歧化酶快速檢測卡的檢測試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖 維素膜，7、膠體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實施方式
本實用新型結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下實施例1一種超氧化物歧化酶快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外 殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm， 寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu) 成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座 內(nèi)。測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試 條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支 承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸 纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢 測帶10，含超氧化物歧化酶；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 — 端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品 墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜7，膠體金膜7是含抗超氧化物歧化酶單克隆抗體或多克隆 抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0. 5-0. 8mm，長5mm，寬4mm。樣品墊8厚 0. 5-0. 8mm,長 20mm，寬 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm,長 16_20mm，寬 4mm。膠體金膜 7、樣品 墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜搭接長度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料 是吸水玻璃纖維膜。本實用新型超氧化物歧化酶檢測卡用于檢測SOD食品、SOD保健品、SOD化妝品等 樣品中的超氧化物歧化酶的檢測。實施例2樣品的處理方法是檢測樣品為超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品及SOD化妝品，對于各種不同的 檢測樣品用不同的處理方法稱取1. OOg超氧化物歧化酶SOD食品、SOD保健品或SOD化妝品固體樣品置于玻 璃乳缽中，加入9. OmL蒸餾水研磨5min ；若樣品液澄清，則直接取澄清液測定；若樣品液渾 濁，則移入IOmL離心管，用少量蒸餾水沖洗乳缽，洗滌并入離心管中，加蒸餾水至刻度，經(jīng) 4000r/min離心15min，取上清液測定。使用超氧化物歧化酶快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中 滴注入超氧化物歧化酶快速檢測卡2的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品 液及膠體金膜7所含的抗超氧化物歧化酶單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標記物一起向 硝酸纖維素膜6擴散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 標記的抗體，在測試帶上分別與含超氧化物歧化酶，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)， 形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢超氧化物歧化酶存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)， 而不會與檢測帶所含的超氧化物歧化酶反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情 況1、當(dāng)顯示檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，說明被檢測樣品中超氧 化物歧化酶含量未超標。2、當(dāng)檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，說 明被檢測樣品中超氧化物歧化酶含量超標。3、當(dāng)檢測帶10和質(zhì)控帶12均不顯色，則表明檢測試條已失效。
權(quán)利要求1. 一種超氧化物歧化酶快速檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼 (1)中設(shè)置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4);測試條(2)是由支承 背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸 水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜 (9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接， 在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7);膠體金膜為含抗 超氧化物歧化酶抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控 帶，依次是含超氧化物歧化酶的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11 )，測試 條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
專利摘要一種超氧化物歧化酶快速檢測卡，屬于酶檢測技術(shù)領(lǐng)域。本實用新型超氧化物歧化酶(SOD)快速檢測卡外殼內(nèi)有測試條，測試條由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗超氧化物歧化酶抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條顯示印記帶，一條為含超氧化物歧化酶的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實用新型優(yōu)點是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測SOD食品、SOD保健品和SOD化妝品樣品中超氧化物歧化酶的含量。本實用新型超氧化物歧化酶快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準確。
文檔編號G01N33/558GK201926661SQ20102067586
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司