專利名稱：細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到細(xì)菌定量測定的方法，具體的講就是細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其屬于微生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
測定微生物數(shù)量的方法較多，根據(jù)細(xì)菌數(shù)量檢測的不同目的，常采用不同的方法。 細(xì)菌數(shù)量檢測主要用于兩大方面一是用于醫(yī)學(xué)、動植物病原的檢測及藥敏、微生物等實(shí)驗(yàn)中。這些實(shí)驗(yàn)往往是分離細(xì)菌后或細(xì)菌復(fù)蘇后，要進(jìn)行增菌過程，當(dāng)細(xì)菌達(dá)到一定濃度后，將其定量，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對其定菌量的方法主要有顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待檢測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容量的計菌器上，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法；平板法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的菌落，是由一個單細(xì)胞繁殖而成的，它測出樣品的活菌數(shù)；光電比濁法通過測定菌懸液的光密度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較對其定量；麥?zhǔn)媳葷岱ㄓ貌煌瑵舛鹊腂aC12與稀H2S04配制成10個梯度的BaS04，將菌懸液在透射光下用肉眼與某一比濁管進(jìn)行比較，即可目測出該菌液的大致濃度。二是用于食品、飲用水中細(xì)菌的檢測，這是對微量菌進(jìn)行檢測，目前用得較多的有平板計數(shù)法同前；濾膜法一定數(shù)量的樣液通過濾膜時，細(xì)菌被截留在濾膜表面，將濾膜置于培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，計數(shù)生長的菌數(shù)，這種方法跟普通平板菌落計數(shù)法相近；紙片法原理是一種預(yù)先預(yù)備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，冷水可溶性的凝膠劑和氯化三苯四氮唑指示劑，菌落在測試片上呈紅色或粉紅色，這樣可增強(qiáng)菌落計數(shù)效果，其操作過程為加 Iml樣液到紙片上，后壓上壓板，靜置Imin后培養(yǎng)，培養(yǎng)條件與普通平板法一樣；電阻抗法 該方法原理是根據(jù)微生物生長代謝將培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)和碳水化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榘被峒叭樗岬龋鹋囵B(yǎng)基電阻抗微弱變化，可由阻抗檢測儀器記錄；流式細(xì)胞術(shù)，自動免疫技術(shù)，生物熒光法，等新的快速檢測方法出現(xiàn)，生物熒光法是最有望實(shí)現(xiàn)即時檢測細(xì)菌總數(shù)的快速方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是針對用于醫(yī)學(xué)、動植物病原的檢測及藥敏、微生物等實(shí)驗(yàn)中增菌后使細(xì)菌達(dá)到一定濃度，迫切需要一種直觀，快速，簡便的測定方法，細(xì)菌定量比色卡則為此而設(shè)計發(fā)明的，以達(dá)到直觀，快速，簡便測定細(xì)菌數(shù)量的目的。本發(fā)明以現(xiàn)有的技術(shù)的實(shí)際特點(diǎn)，由于現(xiàn)用于醫(yī)學(xué)、動植物病原的檢測及藥敏、微生物等實(shí)驗(yàn)中細(xì)菌顯微鏡直接計數(shù)法，對一些運(yùn)動菌檢測不準(zhǔn)，還需儀器等；平板法，較為準(zhǔn)確但比較繁瑣，需配培養(yǎng)基，時間較長；麥?zhǔn)媳葷岱?，較為簡單快速，但每次標(biāo)準(zhǔn)品需要現(xiàn)配現(xiàn)用，相對麻煩；光電比濁法，較為準(zhǔn)確但需一定的儀器設(shè)備。因而，目前在醫(yī)學(xué)、動植物病原的檢測及藥敏、微生物等實(shí)驗(yàn)中細(xì)菌定量中，迫切需要一種較為準(zhǔn)確，直觀，快速，簡便的測定方法，并能用于任何一種細(xì)菌的數(shù)量的測定。因此，本發(fā)明針對現(xiàn)有測定方法存在的問題，利用現(xiàn)有技術(shù)比色的原理，即在菌中加脫氫酶的底物(顯色液)，通過比色測菌脫氫酶活性，根據(jù)酶活力與菌體生物量呈正比關(guān)系，計算細(xì)菌的數(shù)量，還利用該原理測定的菌數(shù)與菌的種類無關(guān)，提供了一種細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，達(dá)到了直觀，快速，簡便細(xì)菌定量的目的，不需要任何儀器設(shè)備，并可用于任何一種細(xì)菌的數(shù)量的測定。本發(fā)明是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，研制一種細(xì)菌定量比色卡，其包括標(biāo)準(zhǔn)比色卡 1，比色杯2，終止液。所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡1，上面設(shè)有在定量顯色液作用下不同濃度的菌顯現(xiàn)的不同顏色， 用于比色。標(biāo)準(zhǔn)比色卡1制備方法為將增殖后的菌，按比例稀釋，取100-200yL菌，加入比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min，加終止液20-100 μ L，空白對照以100-200 μ L蒸餾水代替菌，其他同前。用數(shù)碼相機(jī)拍照，制成標(biāo)準(zhǔn)色卡。所述比色杯2內(nèi)預(yù)固定量顯色液，顯色液為0. 01-0. 4 %噻唑藍(lán)(MTT)或 0.01-0. 4%氯化三苯基四氮唑(TTC)。比色杯2內(nèi)加顯色液20-100 μ L，干燥滅菌后封口。所述終止液為5-10%甲醛。所述的細(xì)菌定量比色卡使用方法為將被測菌取100-200 μ L加入比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min，加終止液20-100 μ L，然后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡1對比， 找出與其相同顏色或相似顏色，即標(biāo)準(zhǔn)比色卡1上對應(yīng)的菌濃度則為該被測菌的濃度。本發(fā)明主要優(yōu)點(diǎn)(1)操作簡單本發(fā)明的細(xì)菌定量比色卡比色簡單，不需每次比色時現(xiàn)配標(biāo)準(zhǔn)液， 與標(biāo)準(zhǔn)比色卡1比色即可。(2)快速靜放10-30min可出結(jié)果。(3)直接讀數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)比色卡1比色，直接讀出細(xì)菌的量即個/ml(4)不需任何儀器設(shè)備，只用該比色卡1和比色杯2即可。(5)精確度可達(dá)到平板測定水平。


本發(fā)明的實(shí)施例結(jié)合附圖進(jìn)一步描述如下圖1:標(biāo)準(zhǔn)比色卡1圖2:比色杯具體實(shí)施例方式參見圖1，2本發(fā)明細(xì)菌定量比色卡，其包括標(biāo)準(zhǔn)比色卡1，比色杯2，終止液。實(shí)施例1.比色杯2的制備空比色杯2內(nèi)加入20-100 μ L的0. 01-0. 4%噻唑藍(lán) (MTT)或0.01-0. 4%氯化三苯基四氮唑(TTC)，干燥滅菌后封口。實(shí)施例2.標(biāo)準(zhǔn)比色卡1的制備取不同濃度的菌(范圍1-50億/ml) 100-200 μ L， 加入比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min，加5_10 %甲醛終止液 20-100 μ L，菌量顯色液量終止液量比值為4 1 1。用數(shù)碼相機(jī)拍照，制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡1。實(shí)施例3.細(xì)菌定量比色卡的應(yīng)用取3個未知濃度菌液，取100-200 μ L分別加入 3個比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min，加終止液20-100 μ L，然后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡1對比，找出與其相同顏色或相似顏色，即標(biāo)準(zhǔn)比色卡1上對應(yīng)的菌濃度則為該被測菌的濃度。取該3個未知濃度菌液，用平板計數(shù)法測定菌的濃度。結(jié)果見表1表1細(xì)菌定量比色卡測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其特征為細(xì)菌定量比色卡包括標(biāo)準(zhǔn)比色卡 1，比色杯2，終止液。
2.如權(quán)利要求1所述細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其特征為所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡 1，上面設(shè)有在定量顯色液作用下不同濃度的菌顯現(xiàn)的不同顏色，用于比色。
3.如權(quán)利要求2所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡1制備方法為將增殖后的菌，按比例稀釋，取 100-200 μ L菌，加入比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min，加終止液 20-100 μ L，空白對照以100-200 μ L蒸餾水代替菌，其他同前。用數(shù)碼相機(jī)拍照，制成標(biāo)準(zhǔn)色卡。
4.如權(quán)利要求1所述細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其特征為所述比色杯2內(nèi)預(yù)固定量顯色液。
5.如權(quán)利要求4所述比色杯2其制備方法為比色杯2內(nèi)加顯色液20-100μ L，干燥滅菌后封口。
6.如權(quán)利要求4所述顯色液為0.01-0. 4%噻唑藍(lán)(MTT)或0. 01-0. 4%氯化三苯基四氮唑(TTC)。
7.如權(quán)利要求1所述細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其特征為所述終止液為 5-10%甲醛。
8.如權(quán)利要求1所述細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法，其特征為所述使用方法為將被測菌取100-200 μ L加入比色杯2中，搖動比色杯2約Imin后，室溫下靜止10-30min， 加終止液20-100 μ L，然后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡1對比，找出與其相同顏色或相似顏色，即標(biāo)準(zhǔn)比色卡1上對應(yīng)的菌濃度則為該被測菌的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌定量比色卡及其制備、使用方法。涉及微生物定量器具技術(shù)領(lǐng)域。該細(xì)菌定量比色卡包括標(biāo)準(zhǔn)比色卡1，比色杯2。該細(xì)菌定量比色卡可以對細(xì)菌數(shù)定量測定，精確度可達(dá)到平板測定水平，整個檢測過程簡單方便不需儀器設(shè)備，10-30min出結(jié)果。
文檔編號G01N21/78GK102507567SQ20111040715
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月22日
發(fā)明者侯月利, 王曉潔 申請人:魯東大學(xué)