專利名稱：用于檢測(cè)血管緊張素ii的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用診斷試劑領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)結(jié)合磁微粒偶聯(lián)和分離技術(shù)檢測(cè)血管緊張素II含量的試劑盒。
背景技術(shù)：
血管緊張素是一種能夠收縮血管升高血壓的多肽，它是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的一部分。許多降血壓藥物以血管緊張素為靶分子。血管緊張素也能夠刺激腎上腺皮質(zhì)分泌醛固酮。醛固酮促進(jìn)遠(yuǎn)端腎單位的鈉潴留，同時(shí)也能夠升高血壓。血管緊張素II是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)調(diào)節(jié)血壓的一個(gè)直接作用物質(zhì)。 同時(shí)，血管緊張素II也能夠作為促生長(zhǎng)因子直接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生。最近的研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素II直接和血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，血管狹窄和動(dòng)脈血管阻力增加有直接關(guān)系。 因此，血管緊張素II用于高血壓的診斷和治療效果的檢測(cè)被越來(lái)越重視。攝取ACEI后，活性腎素和ANGl的水平會(huì)立即升高，同時(shí)伴有血漿血管緊張素II 水平的降低。因此，短期內(nèi)血漿血管緊張素II的水平體現(xiàn)了 RAS系統(tǒng)對(duì)ACEI的一個(gè)調(diào)整和適應(yīng)過(guò)程。長(zhǎng)期ACEI的治療通常會(huì)伴有血漿血管緊張素II水平的反彈。這可能主要是由于血管緊張素II的其他合成途徑的代償升高。血管緊張素II的水平反彈提示，在高血壓的長(zhǎng)期治療過(guò)程中，要對(duì)血管緊張素II的水平進(jìn)行連續(xù)和不間斷的監(jiān)測(cè)。血管緊張素II的檢測(cè)是一個(gè)非常有幫助的工具，能夠監(jiān)測(cè)藥物的作用和效果，評(píng)價(jià)療效。同時(shí)對(duì)于充血性心力衰竭和高血壓的治療可以起到很好的評(píng)價(jià)和指導(dǎo)作用。目前檢測(cè)血管緊張素II的方法以放射免疫技術(shù)為主，采用放射免疫技術(shù)測(cè)定血管緊張素II，其靈敏度和抗干擾能力嚴(yán)重不足，由于在測(cè)定血管緊張素II方面操作方法的復(fù)雜性，操作過(guò)程不易控制，造成測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性差、變異大，另外放射免疫方法存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、穩(wěn)定性差的缺陷，同時(shí)還存在放射源污染的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速準(zhǔn)確且污染小的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案
本發(fā)明所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙海?zhǔn)品，生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，化學(xué)發(fā)光底物A、化學(xué)發(fā)光底物B以及洗液。所述偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒先包被羊抗兔IgG，再間接包被兔抗血管緊張素II抗體。所述校準(zhǔn)品以0. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質(zhì)，力口入血管緊張素II純品配制而成。所述生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質(zhì)，工作濃度為1:10000。所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質(zhì)， 工作濃度為1:6000。所述化學(xué)發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒(méi)食子酸0. 35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調(diào)pH7. 4 ；化學(xué)發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0.85 mM組成，最后調(diào)pH7. 4。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于可實(shí)現(xiàn)操作的簡(jiǎn)便性、自動(dòng)化性，檢測(cè)結(jié)果具有更好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，檢測(cè)時(shí)間短，穩(wěn)定性可達(dá)12個(gè)月，不存在放射污染。


圖1是本發(fā)明試劑盒檢測(cè)血管緊張素II的校準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，包括偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙海?zhǔn)品，生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，化學(xué)發(fā)光底物A、化學(xué)發(fā)光底物B以及洗液。偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒上先偶聯(lián)羊抗兔IgG，再間接免疫偶聯(lián)兔抗血管緊張素II抗體，采用氨基戊二醛法；校準(zhǔn)品以ο. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質(zhì)加入血管緊張素II純品配制而成；生物素偶聯(lián)的血管緊張素 II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質(zhì)稀釋到1 10000的工作濃度；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA為緩沖液基質(zhì)稀釋至1:6000的工作濃度；
所述化學(xué)發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒(méi)食子酸0.35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調(diào)pH7. 4 ；化學(xué)發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0.85 mM組成，最后調(diào)pH7. 4。洗液由0. IM磷酸鹽緩沖液和l%TWeen20配制而成，使用時(shí)用蒸餾水20倍稀釋。使用本發(fā)明試劑盒檢測(cè)血管緊張素II的使用操作程序如下
1、在反應(yīng)杯中依次加入100μ 1校準(zhǔn)品、100 μ 1待測(cè)樣本、20 μ 1磁微?；鞈乙?、50 μ 1 生物抗原、50 μ 1酶標(biāo)記物；
2、將反應(yīng)杯中溶液混合均勻，37°C溫育30分鐘；
3、使用磁分離器洗滌設(shè)備，將反應(yīng)杯中的磁微粒用洗液洗滌3次；
4、加入化學(xué)發(fā)光底物A和化學(xué)發(fā)光底物B各50μ 1，混勻后室溫避光反應(yīng)5分鐘；
5、使用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)發(fā)光信號(hào)值并記錄；
6、采用四參數(shù)擬合方式，建立定標(biāo)曲線，計(jì)算測(cè)定結(jié)果。檢測(cè)時(shí)采用一步法加樣，即將參與反應(yīng)的磁微粒混懸液、待測(cè)樣本、生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素在一個(gè)操作步驟中加入反應(yīng)杯中，減少了操作步驟和反應(yīng)時(shí)間，降低了操作過(guò)程引入的誤差。使用本發(fā)明試劑盒檢測(cè)血管緊張素II，所用時(shí)間較短，測(cè)定結(jié)果僅需40分鐘即可得出，方便快捷。使用本試劑盒檢測(cè)血管緊張素II時(shí)可達(dá)到如下指標(biāo)
校準(zhǔn)曲線范圍0pg/ml — 1000pg/ml ；校準(zhǔn)曲線線性濃度值和檢測(cè)發(fā)光值以四參數(shù)擬和方式進(jìn)行線性擬合，線性系數(shù)
R>0. 999，見(jiàn)圖1，圖1原始數(shù)據(jù)，用四參數(shù)擬合，X為濃度值，Y為發(fā)光值取log ；
權(quán)利要求
1.用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于包括偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙?，校準(zhǔn)品，生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，化學(xué)發(fā)光底物A、化學(xué)發(fā)光底物B以及洗液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒先包被羊抗兔IgG，再間接包被兔抗血管緊張素II抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述校準(zhǔn)品以0. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質(zhì)，加入血管緊張素II純品配制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質(zhì)，工作濃度為1:10000。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質(zhì)，工作濃度為 1:6000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒(méi)食子酸0. 35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調(diào)pH7. 4 ；化學(xué)發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0. 85 mM組成，最后調(diào)pH7. 4。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于檢測(cè)血管緊張素II的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，包括偶聯(lián)有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙海?zhǔn)品，生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，化學(xué)發(fā)光底物A、化學(xué)發(fā)光底物B以及洗液。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于可實(shí)現(xiàn)操作的簡(jiǎn)便性、自動(dòng)化性，檢測(cè)結(jié)果具有更好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，檢測(cè)時(shí)間短，穩(wěn)定性可達(dá)12個(gè)月，不存在放射污染。測(cè)試時(shí)采用一步法加樣，即將參與反應(yīng)的磁微?；鞈乙?、待測(cè)樣本、生物素偶聯(lián)的血管緊張素II抗原、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素在一個(gè)操作步驟中加入反應(yīng)杯中，減少了操作步驟和反應(yīng)時(shí)間，降低了操作過(guò)程引入的誤差。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102539419SQ201210006880
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月11日
發(fā)明者付光宇, 劉功成, 吳學(xué)煒, 李文娟, 渠海, 王敏, 秦東春, 趙鵬, 鄭立運(yùn), 陸瑩, 陳科, 馬建軍 申請(qǐng)人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司