專利名稱：一種阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素的含量測定，特別是以藥用輔料聚卡波菲(P0IycarbopHil)為緩釋基質(zhì)的阿奇霉素緩釋滴眼液的中阿奇霉素的含量測定方法。阿奇霉素為15元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，抗菌譜廣，除了對大部分細菌有抗菌作用外，對衣原體、支原體也有較好的活性。作用機制與紅霉素相同，主要與細菌核糖體的50S 亞單位結(jié)合，抑制依賴于RNA的蛋白合成。臨床廣泛用于化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎；敏感細菌引起的皮膚軟組織感染。美國FDA于2007. 4. 27批準Inspire醫(yī)藥公司的I %阿奇霉素滴眼液(商品名 AzaSite )上市，用于治療細菌性結(jié)膜炎。該制劑采用緩釋藥物傳輸技術(shù)DuraSite，可加強抗生素停留在組織表面的時間，從而達到每天用藥I次的緩釋效果，目前市售AzaSite 1% 阿奇霉素滴眼液的緩釋基質(zhì)為藥用輔料聚卡波菲。聚卡波菲屬聚丙烯酸類高分子的一種，是丙烯酸與丁二烯乙二醇共聚得到的一種輕度交聯(lián)的網(wǎng)狀高分子聚合物。分子量大于106，分子結(jié)構(gòu)式聚卡波菲為白色粉末狀固體，不溶于水，亦不溶于強酸強堿。1%水分散體的pH值為3. 5-4.0。聚卡波菲具有吸水膨脹性，每克吸水量可達62g(USP24);其溶脹性受pH值的影響，酸性條件下，能夠吸收自身重量10倍的水分，在pH值4以上溶脹率顯著增加；中性條件下，可吸收自身重量70倍的水分。聚卡波菲的溶脹性還受離子強度的影響，隨著離子強度的增加溶脹率降低，二價金屬離子能夠改變這種溶脹平衡，但有鈉離子存在時，影響較小。由于阿奇霉素緩釋滴眼液中含有上述的高分子聚合物輔料，且不能直接濾除，因此不能直接進入色譜柱進行高效液相色譜法測定藥物含量?，F(xiàn)有技術(shù)人員對樣品處理方法進行了多項研究，處理方法包括(I)增強離子強度法依據(jù)聚卡波菲的結(jié)構(gòu)特性，試圖通過改變離子強度來使聚卡波菲變性從而達到去除的目的，但去除聚卡波菲的同時，主藥也被大量沉淀，回收率極低，無法滿足測定要求；(2)透析法將阿奇霉素緩釋滴眼液裝入
背景技術(shù)：
透析袋中，置適量溶質(zhì)中透析，無法將主藥全部透出，回收率低，無法滿足測定要求；(3)萃取法采用三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚等有機溶劑萃取主藥，結(jié)果是主藥被降解，無法采用；
(4)超濾法將阿奇霉素緩釋滴眼液適當稀釋，通過超濾膜，同樣是回收率低，無法滿足測定要求。因此，現(xiàn)有的樣品處理方法均不能準確檢測阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素的含量。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，發(fā)明人提供一種以聚卡波菲為緩釋介質(zhì)的阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素含量測定方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，包括如下步驟(I)采用有機溶劑與緩沖液按體積比(40 90) (60 20)配制流動相，所述有機溶劑為甲醇、乙醇或乙腈之一或組合，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液濃度為 O. 01mol/L-0. 04mol/L ;流動相的 pH 值為 5-10 ；(2)用步驟(I)配制的流動相分別溶解阿奇霉素滴眼液樣品和對照品，所述流動相與樣品的體積比為(5 10) I ;所述流動相與對照品的體積比為(5 10) I)；所述樣品是以聚卡波菲為緩釋基質(zhì)的阿奇霉素緩釋滴眼液；所述對照品是阿奇霉素標準品；(3)按照高效液相色譜法測定阿奇霉素的含量，設(shè)置流動相流速為I. Oml/min，檢測波長為210nm ;將步驟⑵配制的樣品溶液、對照品溶液過濾后分別進樣，記錄色譜圖。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所用高效液相色譜儀的色譜柱為)Cterra MS C185 μ m 150mmX4. 6mm色譜柱,色譜柱柱溫為室溫,進樣體積為20 μ I。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，流動相的pH值調(diào)節(jié)劑為磷酸。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述流動相中有機溶劑與緩沖液的體積比為(50 80) (50 20)，進一步優(yōu)選為(60 70) (40 30)。采用該配比可以保證阿奇霉素緩釋滴眼液中的聚卡波非緩釋基質(zhì)的最大化沉淀，同時對阿奇霉素主藥無影響，可以使阿奇霉素的回收率達到99%以上。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述流動相的pH值為6-8，進一步優(yōu)選pH值為8。本發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)在PH偏堿性的情況下，主藥穩(wěn)定性好、回收率高，因此將其作為流動相的必須條件之一。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述磷酸鹽緩沖液為磷酸氫二鉀緩沖液、磷酸二氫鉀緩沖液或磷酸氫二鈉緩沖液、磷酸二氫鈉緩沖液之一或組合。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為O. Olmol/L-O. 02mol/L，優(yōu)選 O. 02mol/L。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)磷酸鹽緩沖液的濃度過高或過低都不能使阿奇霉素緩釋滴眼液中的聚卡波非完全沉淀，影響樣品進液相柱。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的流動相與樣品的體積比為5 I。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明所述的比例，可使阿奇霉素緩釋滴眼液中的聚卡波非完全沉淀，主藥回收率達到99%以上。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述流動相為甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液或乙醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采用上述優(yōu)選的緩沖液及有機溶劑作流動相時，其檢測結(jié)果最為準確，且成本較低，能夠有效準確地檢測阿奇霉素緩釋滴眼液的主藥阿奇霉素的含量。
根據(jù)本發(fā)明進一步優(yōu)選的，所述流動相為下列之一甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二二鉀緩沖液，體積比501040，pH =7. 2 ；
甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二二鈉緩沖液，體積比205030，pH =7. 2 ；
甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二二鉀緩沖液，體積比602020，pH =6. 8 ；乙醇-乙腈-O. 01mol/L的磷酸二氫鈉，體積比20 30 50，pH = 8。根據(jù)色譜圖的峰面積，按外標法計算樣品的濃度即可。例如按A對照品濃度/B 樣品濃度=S對照峰面積/S樣品峰面積，求B樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中
阿奇霉素含量。本發(fā)明的技術(shù)特點本發(fā)明的方法采用特定比例的有機溶劑與緩沖液的混合物作為流動相，能夠使得阿奇霉素緩釋滴眼液中所采用的高分子物質(zhì)被沉淀從而可以過微孔濾膜后進高效液相色譜儀。此沉淀過程不影響主藥的回收率，并且主藥阿奇霉素和輔料的色譜峰完全分離開來，因此檢測數(shù)據(jù)準確。本發(fā)明的方法用于以聚卡波菲為緩釋基質(zhì)的阿奇霉素緩釋滴眼液的含量檢測。綜上所述，采用本發(fā)明所述的高效液相色譜法分析阿奇霉素緩釋滴眼液的含量， 解決了現(xiàn)有的檢測方法中，制劑無法直接進行檢測的問題，并且不會影響最終的檢測結(jié)果， 降低了檢測所需的時間和成本。與其他的檢測方法相比，本發(fā)明所提供的含量測定方法具有專屬性強、準確度高，操作簡便等優(yōu)點。


圖I為實施例2條件下的色譜圖；1號峰為阿奇霉素峰，2號峰為阿奇霉素的一個雜質(zhì)峰，其余均為輔料峰。a為輔料圖譜，b為阿奇霉素滴眼液樣品圖譜。圖2為阿奇霉素對照品圖譜。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做詳細說明。實施例中的儀器、試劑均為市購產(chǎn)品。實施例中的阿奇霉素滴眼液樣品是按照AzaSite 的處方配制1%阿奇霉素滴眼液；所述對照品是阿奇霉素標準品；儀器與條件如下高效液相色譜儀waters1525-717-2487色譜柱XterraMS C185 μ m 1 50mm X 4. 6mm流速1.Oml/min ；檢測波長2IOnm；柱溫室溫；進樣體積20 μ I。依據(jù)對照品的濃度、峰面積和測試樣品的峰面積可計算出測試樣品的濃度。按A 對照品濃度/B樣品濃度=S對照峰面積/S樣品峰面積，求B樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中阿奇霉素含量。實施例I
流動相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氫二鉀緩沖液(用磷酸調(diào)pH = 7. 2)= 50 10 40 ；測定步驟稱取阿奇霉素緩釋滴眼液樣品5g，置于25ml容量瓶中，加入流動相至容量瓶一半時，輕輕振搖，定容至刻度。稱取阿奇霉素對照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流動相溶解對照品并用流動相稀釋至刻度。分別取對照品溶液和樣品溶液過O. 22 μ m濾膜后按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。所得色譜圖顯示在此條件下，阿奇霉素主峰可以和輔料峰完全分離開來。按對照品濃度/樣品濃度=對照峰面積/樣品峰面積，求出樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中阿奇霉素含量，測得的阿奇霉素含量是樣品標示含量的99. 8%0實施例2流動相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氫二鈉緩沖液體積比(用磷酸調(diào)pH = 7. 2)= 20 50 30 ；測定步驟定量稱取阿奇霉素緩釋滴眼液樣品5g,置于25ml容量瓶中，加入流動相至容量瓶一半時，輕輕振搖，定容至刻度。稱取阿奇霉素對照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度。分別取對照品溶液和樣品溶液過O. 22 μ m濾膜后按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，所得色譜圖如附圖I所示，可以看出在該條件下阿奇霉素主峰I可以和輔料峰完全分離開來，且阿奇霉素主峰在Ilmin左右。將圖I與圖2對比可知本方法檢測的阿奇霉素緩釋滴眼液樣品中的活性成分阿奇霉素與阿奇霉素對照品出峰是一致的。按對照品濃度/樣品濃度=對照峰面積/樣品峰面積，求出樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中阿奇霉素含量，測得的阿奇霉素含量是樣品標示含量的99. 9%。實施例3流動相甲醇-乙腈-O. 02mol磷酸氫二鉀緩沖液體積比(用磷酸調(diào)pH = 6. 8)= 60 20 20 ；測定步驟定量稱取阿奇霉素緩釋滴眼液樣品5g,置于25ml容量瓶中，加入流動相至容量瓶一半時，輕輕振搖，定容至刻度。稱取阿奇霉素對照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度。分別取對照品溶液和樣品溶液過O. 22 μ m濾膜后按上述條件進行高效液相色譜分析，所得圖譜顯示該條件下阿奇霉素主峰可以和輔料峰完全分離開來。按對照品濃度/樣品濃度=對照峰面積/樣品峰面積，求出樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中阿奇霉素含量，測得的阿奇霉素含量是樣品標示含量的99. 6%。實施例4流動相乙醇-乙腈-O. Olmol磷酸二氫鈉體積比(用磷酸調(diào)pH = 8)= 20 30 50 ；實驗步驟定量稱取阿奇霉素緩釋滴眼液樣品5g,置于25ml容量瓶中，加入流動相至容量瓶一半時，輕輕振搖，定容至刻度。稱取阿奇霉素對照品50mg，置于25ml容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度。分別取對照品溶液和樣品溶液過O. 22 μ m濾膜后按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。在該條件下阿奇霉素主峰可以和輔料峰完全分離開來。按對照品濃度/樣品濃度=對照峰面積/樣品峰面積，求出樣品的濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)換算成樣品中阿奇霉素含量，測得的阿奇霉素含量是樣品標示含量的99. 7%。由上述各個實施例可見，阿奇霉素主峰可以和輔料峰完全分離，本方法主藥的回收率高，采用本發(fā)明的檢測方法可以有效的檢出阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素的含量，準確度高，簡單易行。
權(quán)利要求
1.一種阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，包括如下步驟(1)采用有機溶劑與緩沖液按體積比(40 90) (60 20)配制流動相，所述有機溶劑為甲醇、乙醇或乙腈之一或組合，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液濃度為O.01mol/L-0. 04mol/L ;流動相的 pH 值為 5-10 ；(2)用步驟(I)配制的流動相分別溶解阿奇霉素滴眼液樣品和對照品，所述流動相與樣品的體積比為(5 10) I;所述流動相與對照品的體積比為(5 10) I ；所述樣品是以聚卡波菲為緩釋基質(zhì)的阿奇霉素緩釋滴眼液；所述對照品是阿奇霉素標準品；(3)按照高效液相色譜法測定阿奇霉素的含量，設(shè)置流動相流速為l.Oml/min，檢測波長為210nm;將步驟⑵配制的樣品溶液、對照品溶液過濾后分別進樣，記錄色譜圖。
2.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于采用高效液相色譜儀的色譜柱為Xterra MS C18 5 μ m 150mmX 4. 6mm色譜柱,色譜柱柱溫為室溫，進樣體積為20 μ I。
3.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述流動相中有機溶劑與緩沖液的體積比為(50 80) (50 20)。
4.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述流動相中有機溶劑與緩沖液的體積比為(60 70) (40 30)。
5.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述流動相的PH值為6-8 ;優(yōu)選為流動相的pH值為8。
6.如權(quán)利要求I或5所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于流動相的PH值調(diào)節(jié)劑為磷酸。
7.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述磷酸鹽緩沖液為磷酸氫二鉀緩沖液、磷酸二氫鉀緩沖液或磷酸氫二鈉緩沖液、磷酸二氫鈉緩沖液之一或組合。
8.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述磷酸鹽緩沖液的濃度為O. Olmol/L-O. 02mol/L ;優(yōu)選為O. 02mol/L。
9.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述流動相為下列之一甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二鉀緩沖液，體積比50 10 40，pH = 7. 2 ;或，甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二鈉緩沖液，體積比20 : 50 : 30，pH = 7. 2 ;或，甲醇-乙腈-O. 02mol/L的磷酸氫二鉀緩沖液，體積比60 : 20 : 20，pH = 6. 8 ;或，乙醇-乙腈-O. Olmol/L的磷酸二氫鈉，體積比20 : 30 : 50, pH = 8。
10.如權(quán)利要求I所述的阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素含量的測定方法，其特征在于所述的流動相與樣品的體積比為5 I。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種阿奇霉素緩釋滴眼液中阿奇霉素的含量測定方法。采用有機溶劑與緩沖液按體積比(40～90)∶(60～20)配制流動相，流動相的pH值為5-10；用該流動相分別溶解阿奇霉素滴眼液樣品和對照品，按照高效液相色譜法測定阿奇霉素的含量，將配制的樣品溶液、對照品溶液分別進樣，記錄色譜圖。本發(fā)明采用特定比例的流動相溶解樣品，使得阿奇霉素緩釋滴眼液中含有的高分子聚合物聚卡波菲能夠完全沉淀而不影響藥物的含量測定，并能將主藥阿奇霉素和輔料的色譜峰完全分離開來，提高檢測的準確性。
文檔編號G01N30/02GK102590392SQ20121006679
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月14日
發(fā)明者張明會, 李磊, 李紅英, 王晶翼, 邱麗明 申請人:齊魯制藥有限公司