專利名稱：一種采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃酒的分析檢測(cè)方法，具體涉及利用鄰苯二胺衍生草酸，再通過反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法。
背景技術(shù)：
草酸即乙二酸，是最簡(jiǎn)單的有 機(jī)二元酸之一，廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物組織中。草酸為食品中的一種抗?fàn)I養(yǎng)因子，若在日常飲食中攝入量過高，易造成草酸和鈣離子結(jié)合形成草酸鈣沉淀甚至導(dǎo)致結(jié)石，對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。黃酒中也含有一定量的草酸，主要是由釀酒原料帶入和發(fā)酵過程中的微生物代謝產(chǎn)生。成品黃酒中草酸含量與釀酒原料品質(zhì)、釀造工藝及陳化貯存技術(shù)等因素有關(guān)，草酸含量高的成品酒其底部會(huì)出現(xiàn)草酸鈣沉淀，嚴(yán)重?fù)p害成品黃酒的風(fēng)味和品質(zhì)，是困擾黃酒行業(yè)的難題，一旦出現(xiàn)沉淀，黃酒生產(chǎn)廠家就要對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行召回，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，為解決黃酒草酸鈣沉淀問題，需要對(duì)釀酒原料和釀造過程中的草酸含量進(jìn)行監(jiān)控。目前，針對(duì)黃酒、啤酒和果酒中包括草酸在內(nèi)的有機(jī)酸的檢測(cè)方法主要有分光光度法、高效毛細(xì)管電泳法、氣相色譜法、反相高效液相色譜法等，但均存在一定局限性。其中，分光光度法檢測(cè)分辨率低、靈敏度差、易受其他物質(zhì)的干擾、檢測(cè)誤差較大，而且由于黃酒顏色較深，比色效果不明顯；高效毛細(xì)管電泳法檢測(cè)分辨率高，但在檢測(cè)草酸時(shí)高效毛細(xì)管電泳圖譜基線嚴(yán)重傾斜，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性；氣相色譜法要求有機(jī)酸具有較好的揮發(fā)性，但草酸沸點(diǎn)較高，不適合用該項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)；反相高效液相色譜是當(dāng)今液相色譜最主要的分離模式，在食品、生物和醫(yī)藥領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用，在黃酒、啤酒和果酒有機(jī)酸的測(cè)定方面也有應(yīng)用，但現(xiàn)有技術(shù)中直接用反相高效液相色譜方法測(cè)定草酸，存在草酸峰和酒石酸峰出峰重合、分離度不夠的缺點(diǎn)，對(duì)草酸分辨率和檢測(cè)靈敏度低，回收率不高，不能準(zhǔn)確定量。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)人針對(duì)現(xiàn)有黃酒草酸含量測(cè)定方法存在的上述缺陷，提供一種采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，該方法檢測(cè)靈敏度高、對(duì)草酸分辨率高、重復(fù)性好、回收率高，能對(duì)黃酒中的草酸準(zhǔn)確地定性和定量。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，步驟如下(I)衍生處理將待測(cè)黃酒樣品調(diào)節(jié)pH值至0. 5 I. 5，加入其體積的20 40%的鄰苯二胺溶液，混勻后對(duì)所得溶液進(jìn)行稱重，并于100 120°C加熱4 8h，冷卻至室溫后，加入雙蒸水至溶液重量與加熱前一致，所述鄰苯二胺溶液的質(zhì)量濃度為8 12g/L ；(2)進(jìn)樣前處理用NaOH調(diào)節(jié)上述溶液pH值至5. 0 6. 0，離心后收集上清液并用濾膜過濾，取濾液；(3)草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制和處理配制草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，并按照步驟(I) (2)所述方法對(duì)其進(jìn)行處理；(4)色譜分析和數(shù)據(jù)處理進(jìn)樣，采用反相高效液相色譜系統(tǒng)對(duì)步驟(2)所得待測(cè)黃酒樣品濾液和步驟(3)所得草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品濾液進(jìn)行色譜分析和數(shù)據(jù)處理，分別得到所述待測(cè)黃酒樣品濾液和草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品濾 液的液相色譜圖以及所述兩種濾液中草酸衍生物峰面積值，最后經(jīng)公式計(jì)算得到待測(cè)黃酒樣品中的草酸含量，所述公式如下
權(quán)利要求
1.一種采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，其特征在于步驟如下 (1)衍生處理將待測(cè)黃酒樣品調(diào)節(jié)pH值至0.5 I. 5，加入其體積的20 40%的鄰苯二胺溶液，混勻后對(duì)所得溶液進(jìn)行稱重，并于100 120°C加熱4 8h，冷卻至室溫后，力口入雙蒸水至溶液重量與加熱前一致，所述鄰苯二胺溶液的質(zhì)量濃度為8 12g/L ； (2)進(jìn)樣前處理用NaOH調(diào)節(jié)上述溶液pH值至5.0 6. 0，離心后收集上清液并用濾膜過濾，取濾液； (3)草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制和處理配制草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，并按照步驟(I) (2)所述方法對(duì)其進(jìn)行處理； (4)色譜分析和數(shù)據(jù)處理進(jìn)樣，采用反相高效液相色譜系統(tǒng)對(duì)步驟(2)所得待測(cè)黃酒樣品濾液和步驟(3)所得草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品濾液進(jìn)行色譜分析和數(shù)據(jù)處理，分別得到所述待測(cè)黃酒樣品濾液和草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品濾液的液相色譜圖以及所述兩種濾液中草酸衍生物峰面積值，最后經(jīng)公式計(jì)算得到待測(cè)黃酒樣品中的草酸含量，所述公式如下
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，其特征在于步驟(I)所述草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量濃度( 為100mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，其特征在于步驟(4)所述色譜分析的條件為流動(dòng)相為甲醇與乙酸銨，體積比為13:87 17 83；流動(dòng)相流速為I. I I. 3mL/min ;進(jìn)樣量為40 60 y L ;色譜柱柱溫為20 30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為310 320nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種采用反相高效液相色譜測(cè)定黃酒中草酸含量的方法，步驟如下利用衍生劑鄰苯二胺在強(qiáng)酸(pH 0.5～1.5)、高溫(100～120℃)條件下對(duì)黃酒中的草酸進(jìn)行衍生處理，進(jìn)樣前調(diào)pH值、離心、過濾取濾液，草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制和處理，采用反相高效液相色譜系統(tǒng)分別對(duì)待測(cè)黃酒樣品和草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行色譜分析和數(shù)據(jù)處理，分別得到所述待測(cè)黃酒樣品濾液和草酸標(biāo)準(zhǔn)樣品濾液的液相色譜圖以及所述兩種濾液中草酸衍生物峰面積值，最后經(jīng)公式計(jì)算得到待測(cè)黃酒樣品中的草酸含量。本發(fā)明檢測(cè)靈敏度高、對(duì)草酸分辨率高、重復(fù)性好、回收率高，能對(duì)黃酒中的草酸準(zhǔn)確地定性和定量。
文檔編號(hào)G01N30/36GK102735774SQ201210237798
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月10日
發(fā)明者孫軍勇, 譚新勇, 陸健 申請(qǐng)人:江南大學(xué)