專(zhuān)利名稱(chēng)：一種同時(shí)檢測(cè)奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及了一種同時(shí)檢測(cè)奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，具體涉及一種高效液相色譜法測(cè)定奶粉中香蘭素、乙基香蘭素含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
香蘭素(3-甲氧基-4-羥基苯甲醛)、乙基香蘭素(3-乙氧基-4-羥基苯甲醛)均為合成香精，兩者均為白色或微黃色結(jié)晶性粉末，微溶于水，溶于乙醇、甘油、乙醚、氯仿及香料中。香蘭素具有香莢蘭香氣及濃郁的奶香，乙基香蘭素香氣是香蘭素的3-4倍，廣泛用于食品、巧克力、冰淇淋、飲料以及日用化妝品中起增香和定香作用。據(jù)歐盟專(zhuān)家委員會(huì)2000年報(bào)道，大劑量可導(dǎo)致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至損傷肝、腎。
GB2760-2011《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定較大嬰兒和幼兒配方食品中可以使用香蘭素、乙基香蘭素和香莢蘭豆浸膏，最大使用量分別為5mg/100mL、5mg/100mL和按照生產(chǎn)需要適量使用，其中IOOmL以即食食品計(jì)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照沖調(diào)比例折算成配方食品中的使用量。我國(guó)禁止在0-6月的I階段嬰兒配方奶粉中添加。目前，香蘭素的檢測(cè)方法較多，主要包括高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、離子色譜法等，但提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的前處理方法不盡相同。李小運(yùn)、史海良等采用50°C熱水溶解奶粉，超聲提取，經(jīng)酸沉淀蛋白后，過(guò)濾，濾液分別采用高效液相色譜儀、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。(李小運(yùn)等，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中甲基香蘭素和乙基香蘭素，農(nóng)業(yè)機(jī)械，2012(9) =126-127 ；史海良等，HPLC法測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素，糧油加工，2012 (12) : 175-176)歐菊芳等將奶粉樣品加水，振蕩混勻后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加稀硫酸溶液、乙醇、乙醚萃取，合并乙醚層于另一分液漏斗。用稀NaOH溶液分兩次洗滌乙醚液，棄乙醚層，合并水層，用稀硫酸調(diào)PH至酸性。再用乙醚分兩次萃取，收集乙醚層，旋轉(zhuǎn)蒸干，無(wú)水乙醇復(fù)溶，氣相色譜儀測(cè)定。(歐菊芳等，氣相色譜法測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中香蘭素和乙基香蘭素，江西科學(xué)，2011，29 (I) 23-26)經(jīng)實(shí)驗(yàn)得知，乙基香蘭素在熱水中的溶解性不好，在甲醇、乙醇中的溶解度較高，為實(shí)現(xiàn)兩種香精的同時(shí)檢測(cè)，迫切需要尋找一種簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確度高的前處理方法，以滿(mǎn)足奶粉中兩種物質(zhì)檢測(cè)工作的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于尋找一種簡(jiǎn)便、快速、有效的前處理方法，提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，從而提聞檢測(cè)效率。本發(fā)明所述的的技術(shù)問(wèn)題可通過(guò)以下技術(shù)方案得以解決(I)準(zhǔn)確稱(chēng)取l-2g奶粉樣品于50mL離心管中，加入10_20mL無(wú)水乙醇，超聲提取20_30min ；
(2)提取液在8000-9000r/min條件下離心3-5min,取上清液過(guò)O. 22 μ m微孔濾
月吳，濾液待測(cè)；(3)濾液經(jīng)高效液相色譜分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，定量分析。采用如下的高效液相色譜條件儀器=Agilent 1200液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱碳十八燒基鍵合娃膠為填充劑的色譜柱4. 6 X 150mm, 5 μ m ;
流動(dòng)相乙腈O. 02mo 1/L磷酸二氫鈉溶液=25 75，v/v ；流速0.8-1. 2mL/min ;進(jìn)樣量10-50yL;柱溫25-40O;檢測(cè)波長(zhǎng)278nm。本發(fā)明的有益效果在于，所建立的奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時(shí)檢測(cè)方法，具有前處理簡(jiǎn)單、基質(zhì)干擾小、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，能夠滿(mǎn)足日常檢測(cè)工作的需要。說(shuō)明書(shū)附I香蘭素、乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于具體實(shí)施例。實(shí)施例I某品牌幼兒配方奶粉(3段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測(cè)定I、分析步驟稱(chēng)取奶粉樣品l.OOg，精確到O. OOOlg，于50mL離心管中，加入IOmL無(wú)水乙醇，混勻后超聲提取20min，8000r/min冷凍離心5min，上清液過(guò)0. 22 μ m微孔濾膜，待HPLC測(cè)定。2、高效液相色譜條件流動(dòng)相乙腈:0. 02mol/L磷酸二氫鈉溶液=25 : 75, v/v ;流速:1. OmL/min ;進(jìn)樣量=IOyL ;柱溫30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)278nm。3、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)將1000 μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋得 I. 00，2. 00，5. 00，10. O, 25. O μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。按照上述儀器條件測(cè)定，香蘭素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為Y = 28. 3Χ+6. 8，相關(guān)系數(shù)R2 =
O.9996 ;乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為=Y = 15. 5Χ+4. 2，相關(guān)系數(shù)R2 = O. 9995。4、試樣測(cè)定及加標(biāo)回收結(jié)果經(jīng)3次平行實(shí)驗(yàn)測(cè)定，該品牌幼兒奶粉中未檢出香蘭素和乙基香蘭素。采用該樣品進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)回收率在77. 6-92. 4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0. 6-4. 4%之間。實(shí)施例2某品牌幼兒配方奶粉(4段)中香蘭素、乙基香蘭素含量的測(cè)定該品牌幼兒配方奶粉(4段)食品標(biāo)簽配料中有乙基香蘭素，采用同實(shí)施例I相同的方法，測(cè)定其香蘭素、乙基香蘭素的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該樣品中香蘭素未檢出，乙基香蘭素含量為129. 3mg/kg。上述實(shí)施例僅供說(shuō)明本發(fā)明之用，而并非是對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利的限制；應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍 ；因此，凡跟本發(fā)明權(quán)利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應(yīng)屬于本發(fā)明權(quán)利要求的覆蓋范圍。
權(quán)利要求
1.一種同時(shí)檢測(cè)奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，其特征包括如下步驟 (1)樣品加入有機(jī)溶劑，提取樣品中的香蘭素、乙基香蘭素，同時(shí)沉淀樣品中蛋白質(zhì)； (2)提取液經(jīng)離心處理后，取上清液過(guò)微孔濾膜； (3)濾液經(jīng)高效液相色譜分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量，計(jì)算奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)I所述的方法，其特征在于，所用的提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的有機(jī)溶劑為無(wú)水乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求書(shū)I所述的方法，其特征在于，所述的提取方式為超聲提取。
全文摘要
本方法公開(kāi)了一種同時(shí)檢測(cè)奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的方法，包括以下步驟利用無(wú)水乙醇超聲提取奶粉中香蘭素、乙基香蘭素，同時(shí)沉淀蛋白，提取液經(jīng)離心過(guò)膜后，用碳十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。本方法具有前處理簡(jiǎn)單、定性準(zhǔn)確、定量快速等特點(diǎn)，適合于奶粉中香蘭素、乙基香蘭素的同時(shí)檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102944616SQ201210388809
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月15日
發(fā)明者宋薇 申請(qǐng)人:青島譜尼測(cè)試有限公司