一種苦參蒼術口服液質量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種苦參蒼術口服液質量檢測方法，所述質量檢測方法包括鑒別和含量測定方法，利用薄層色譜法定性鑒別該口服液中一種或幾種有效成分，以及使用高效液相色譜法測定該口服液中苦參含量，通過建立專屬性強的鑒別方法、有效的檢查方法及重復性、準確性好的含量測定方法，能夠有效控制該產品的質量，保證其臨床使用安全、有效、穩(wěn)定。
【專利說明】一種苦參蒼術口服液質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種口服液的質量檢測方法，具體地說，涉及一種中藥口服液的質量檢測方法。
【背景技術】
[0002]自20世紀40年代青霉素發(fā)現(xiàn)以來，抗生素的發(fā)展突飛猛進，為控制和治療細菌引起的感染提供了有力的工具。但是由于抗生素的不合理使用，導致產生日趨嚴重的耐藥性問題。耐藥菌不僅使抗生素的療效減弱，治療費用增加，而且還會引起并發(fā)癥，甚至使抗生素失去療效，導致病人、患畜死亡率升高。特別是近年來，臨床上出現(xiàn)了多重、超強耐藥菌株，使得抗菌藥失去了原有的療效，從而使得大腸桿菌耐藥性問題的解決變得更加棘手。致病性大腸桿菌可引起禽敗血性大腸桿菌病、腸炎、臍炎、心包炎等，甚至還導致胚胎和幼雛的死亡，因此如何消除或降低大腸桿菌的耐藥性，使其重新恢復對抗菌藥物的敏感性，以及在開發(fā)特效的新藥之前，延緩抗菌藥物耐藥性的產生速度，減少抗菌藥物的用量和毒性，對于解決耐藥性問題具有重要的意義。中藥作用靶點多，恰好針對細菌耐藥機制復雜的特點，以恢復細菌對抗生素的敏感性，現(xiàn)有研究亦提示開發(fā)中藥細菌耐藥逆轉劑有較好的前景。
[0003]復方蒼術口服液是通過對蒼術等多種中藥篩選出的中藥復方制劑，由蒼術和苦參經一定的制備工藝制得的口服液，具有清熱解毒、燥濕利水、殺蟲去積、祛風散寒、健脾明目等功效，對大腸桿菌感染的疾病具有很好的治療作用。
[0004]苦參蒼術口服液是基于臨床經驗處方開發(fā)的中藥口服溶液制劑，尚無質量標準，不利于控制其質量，為保證臨床使用安全、有效、穩(wěn)定，有必要建立一個完善的質量標準及其檢測方法。

【發(fā)明內容】

[0005]為解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的主要目的在于提供一個苦參蒼術口服液的質量標準及其檢測方法，通過確定其質量標準和檢測方法，可增強該藥的有效性、質量可控性和穩(wěn)定性。
[0006]本發(fā)明提供了一種苦參蒼術口服液質量檢測方法，所述質量檢測方法包括鑒別和/或含量測定方法:
[0007]所述鑒別方法包括:
[0008](I)將所述苦參蒼術口服液待測樣品和蒼術對照溶液分別點于同一薄層板，利用薄層色譜法分離成分，所述待測樣品色譜中，在與所述蒼術對照溶液色譜相應的位置上，應顯相同顏色的主斑點；
[0009](2)將所述待測樣品和苦參堿對照溶液分別點于同一薄層板，利用薄層色譜法分離成分，所述待測樣品色譜中，在與所述苦參堿對照溶液色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；
[0010]所述苦參蒼術口服液待測樣品中苦參含量測定方法包括:[0011]使用高效液相色譜法測定所述待測樣品中苦參含量，其中，色譜條件為以氨基鍵合硅膠為填充劑；以80:10:10的乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相；系統(tǒng)適用性條件為檢測波長220nm，理論塔板數按苦參堿峰計算應不低于1500 ；
[0012]分別精密吸取對照品溶液與待測樣品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀進行測定。
[0013]優(yōu)選地，所述鑒別方法(1)中，所述薄層板為硅膠G薄層板，展開劑為比例為20:1的石油醚^(T90°C )-乙酸乙酯，所述分離步驟結束后使用5%對二甲基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液顯色；
[0014]所述鑒別方法⑵中，所述薄層板為硅膠G薄層板，展開劑為比例為16:6:1的甲苯-丙酮-甲醇混合溶液，所述分離步驟結束后使用改良碘化鉍鉀試液顯色。
[0015]優(yōu)選地，所述質量檢測方法還包括溶劑殘留測定法，所述溶劑殘留測定法包括:精密稱取三氯甲烷對照品適量，用DMF配制60μ g/ml的三氯甲烷溶液，作為對照品溶液；直接取供試品做為供試品溶液；分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖；所述供試品溶液色譜圖中如有三氯甲烷峰，所述三氯甲烷峰峰面積不得大于所述對照品溶液主峰面積。
[0016]優(yōu)選地，所述苦參蒼術口服液待測樣品中苦參含量測定方法包括:
[0017]制備苦參含量對照溶液，使用80:20的乙腈-無水乙醇溶解苦參堿，配制成每Iml含50 μ g的所述苦參對照溶液；
[0018]制備待測含量樣品溶液，采用系列稀釋法，以80:20的乙腈-無水乙醇為溶劑稀釋所述苦參蒼術口服液待測樣品。
[0019]優(yōu)選地，所述苦參蒼術口服液待測樣品按下述方法制備:
[0020]蒼術1160g，苦參2500g。制法:蒼術加水蒸餾，收集蒸餾液，4°C冷藏，分離油層，得蒼術揮發(fā)油；苦參加水煎煮二次，每次2小時，合并所述煎液，過濾，所述濾液濃縮至70°C時相對密度為1.l(Tl.20，所述濾液用75%乙醇沉淀，并在4°C靜置過夜，過濾，回收乙醇，加水至每Iml含生藥約1.5g，用20%氫氧化鈉溶液調pH值至fl I，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，過濾，回收溶劑至無三氯甲烷氣味，得浸膏；
[0021]所述蒼術揮發(fā)油加入30g吐溫-80，攪拌均勻，加30%乙醇200ml溶解，所述苦參浸膏加30%乙醇200ml溶解，所述兩種溶液混合均勻，調節(jié)pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸鈉2g，加水至 1000mlo
[0022]更優(yōu)選地，所述苦參蒼術口服液待測樣品中每Iml含苦參以苦參堿(C15H24N2O)計，不得少于4.0mg0
[0023]本發(fā)明提供了苦參蒼術口服液的質量標準及其檢驗方法，與之前的經驗處方相t匕，通過建立專屬性強的鑒別方法、有效的檢查方法及重復性、準確性好的含量測定方法，能夠有效控制該產品的質量，保證其臨床使用安全、有效、穩(wěn)定。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為蒼術鑒別薄層色譜圖；
[0025]圖2為苦參鑒別薄層色譜圖；
[0026]圖3a_3c分別為供試品，苦參堿對照品，缺苦參陰性對照高效液相色譜圖。
【具體實施方式】[0027]下面結合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內。
[0028]苦參蒼術口服液的藥物配方為:蒼術1160g，苦參2500g。制法:蒼術加水蒸餾，收集蒸餾液，4°C冷藏，分離油層，得蒼術揮發(fā)油，備用?？鄥⒓铀逯蠖危看?小時，合并煎液，濾過，濃縮至相對密度1.l(Tl.20 (70°C )，用75%乙醇沉淀，4°C靜置過夜，濾過，回收乙醇，加水至每Iml含生藥約1.5g，用20%氫氧化鈉溶液調pH值至9~11，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷液，濾過，回收溶劑至無三氯甲烷氣味，得浸膏，備用。蒼術揮發(fā)油加入30g吐溫-80，攪拌均勻，加30%乙醇200ml溶解，苦參浸膏加30%乙醇200ml溶解，以上溶液混合均勻，調pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸鈉2g，加水至1000ml。
[0029]質量控制方法如下:
[0030]鑒別:
[0031 ] (I)取本品Iml,加水9ml,用正己燒提取二次,每次IOml,合并正己燒液,揮干,殘渣加正己烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取蒼術對照藥材0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2飛μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6(T90°C)-乙酸乙酯(20:1)為展開劑，取出，晾干，噴以5%對二甲基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，應顯相同的烏綠色主斑點(蒼術素)。
[0032](2)取本品1ml，加水9ml混勻，加濃氨試液調節(jié)pH至11，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷IOml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加三 氯甲烷制成每Iml含0.2g的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2~4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(16:6:1)為展開劑，置氨蒸汽預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點。
[0033]檢查:
[0034]pH值應為5.5~7.5 (《中國獸藥典》2005年版一部附錄51頁)。
[0035]相對密度應為0.90~1.05 (《中國獸藥典》2005年版一部附錄43頁)。
[0036]該苦參蒼術口服液待測樣品相對密度的檢測方法按照《中國獸藥典》2005年版一部附錄43頁所述方法進行，優(yōu)選地，該檢測方法為比重瓶法，詳情如下:
[0037]A取潔凈、干燥并精密稱定重量的比重瓶，裝滿供試品(溫度應低于20°C或各品種項下規(guī)定的溫度)后，裝上溫度計(瓶中應無氣泡)，置20°C (或各品種項下規(guī)定的溫度)的水浴中放置若干分鐘，使內容物的溫度達到20°C (或各品種項下規(guī)定的溫度)，用濾紙除去溢出側管的液體，立即蓋上罩。然后將比重瓶自水浴中取出，再用濾紙將比重瓶的外面擦凈，精密稱定，減去比重瓶的重量，求得供試品的重量后，將供試品傾去，洗凈比重瓶，裝滿新沸過的冷水，再照上法測得同一溫度時水的重量，按下式計算，即得。
[0038]
【權利要求】
1.一種苦參蒼術口服液質量檢測方法，所述質量檢測方法包括鑒別和/或含量測定方法: 所述鑒別方法包括: (1)將所述苦參蒼術口服液待測樣品和蒼術對照溶液分別點于同一薄層板，利用薄層色譜法分離成分，所述待測樣品色譜中，在與所述蒼術對照溶液色譜相應的位置上，應顯相同顏色的主斑點； (2)將所述待測樣品和苦參堿對照溶液分別點于同一薄層板，利用薄層色譜法分離成分，所述待測樣品色譜中，在與所述苦參堿對照溶液色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑占.所述苦參蒼術口服液待測樣品中苦參含量測定方法包括: 使用高效液相色譜法測定所述待測樣品中苦參含量，其中， 色譜條件為以氨基鍵合硅膠為填充劑；以80:10:10的乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相；系統(tǒng)適用性條件為檢測波長220nm，理論塔板數按苦參堿峰計算應不低于1500 ； 分別精密吸取對照品溶液與待測樣品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀進行測定。
2.根據權利要求1所述的質量檢測方法，其中，所述鑒別方法(I)中，所述薄層板為硅膠G薄層板，展開劑為比例為20:1的6(T90°C級石油醚-乙酸乙酯，所述分離步驟結束后使用5%對二甲基苯甲醒的10%硫酸乙醇溶液顯色； 所述鑒別方法(2)中，所述薄層板為硅膠G薄層板，展開劑為比例為16:6:1的甲苯-丙酮-甲醇混合溶液，所述·分離步驟結束后使用改良碘化鉍鉀試液顯色。
3.根據權利要求1所述的質量檢測方法，所述質量檢測方法還包括溶劑殘留測定法，所述溶劑殘留測定法包括:精密稱取三氯甲烷對照品適量，用DMF配制60 μ g/ml的三氯甲烷溶液，作為對照品溶液；直接取供試品作為供試品溶液；分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各1μ 1，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖；所述供試品溶液色譜圖中如有三氯甲烷峰，所述三氯甲烷峰峰面積不得大于所述對照品溶液主峰面積。
4.根據權利要求1所述的質量檢測方法，其中，所述苦參蒼術口服液待測樣品中苦參含量測定方法包括: 制備苦參含量對照溶液，使用80:20的乙腈-無水乙醇溶解苦參堿，配制成每Iml含50 Ug的所述苦參對照溶液； 制備待測含量樣品溶液，采用系列稀釋法，以80:20的乙腈-無水乙醇為溶劑稀釋所述苦參蒼術口服液待測樣品。
5.根據權利要求1所述的質量檢測方法，其中，所述苦參蒼術口服液待測樣品按下述方法制備: 蒼術1160g，苦參2500g。制法:蒼術加水蒸餾，收集蒸餾液，4°C冷藏，分離油層，得蒼術揮發(fā)油；苦參加水煎煮二次，每次2小時，合并所述煎液，過濾，所述濾液濃縮至70°C時相對密度為1.l(Tl.20，所述濾液用75%乙醇沉淀，并在4°C靜置過夜，過濾，回收乙醇，加水至每Iml含生藥約1.5g，用20%氫氧化鈉溶液調pH值至fl I，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，過濾，回收溶劑至無三氯甲烷氣味，得浸膏； 所述蒼術揮發(fā)油加入30g吐溫-80，攪拌均勻，加30%乙醇200ml溶解，所述苦參浸膏加30%乙醇200ml溶解，所述兩種溶液混合均勻，調節(jié)pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸鈉2g，加水至1000ml0
6.根據權利要求6所述的質量檢測方法，其中，所述苦參蒼術口服液待測樣品每Iml含苦參以苦參堿C15H24N2·O計，不得少于4.0mg。
【文檔編號】G01N30/02GK103852553SQ201210495546
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年11月28日 優(yōu)先權日:2012年11月28日
【發(fā)明者】張許科, 劉興金, 張曉會 申請人:洛陽惠中獸藥有限公司