穿刺活檢組織芯片的制作方法
【專利摘要】提供一種制備高通量穿刺活檢組織芯片的技術(shù)和方法。收集42例經(jīng)乳腺穿刺活檢組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌的患者的穿刺活檢剩余石蠟組織標(biāo)本，以相應(yīng)的常規(guī)病理HE染色切片為指引，切取HE染色切片癌灶部分對(duì)應(yīng)的石蠟組織條段（1mm-4mm），制備石蠟組織芯，利用組織芯片儀制備乳腺癌穿刺活檢組織陣列，石蠟切片制備乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片。所制備的穿刺活檢組織芯片可用于相關(guān)疾病的免疫組化、原位雜交等分子醫(yī)學(xué)研究。
【專利說明】穿刺活檢組織芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物芯片領(lǐng)域，涉及一種用于制備微陣列穿刺活檢組織芯片的生物芯片及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生物芯片是指包被在硅片、尼龍膜等固相支持物上的高密度組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、核酸、糖類以及其他生物組分的高通量微陣列。利用高通量生物芯片，通過特異性分子雜交及染色技術(shù)，對(duì)受檢樣本進(jìn)行檢測(cè)，可準(zhǔn)確、快速獲取大量的分子檢測(cè)信息。目前已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、臨床醫(yī)學(xué)分子診斷、以及生物抗體靶向藥物篩查和驗(yàn)證等領(lǐng)域。
[0003]穿刺活檢組織病理學(xué)檢查，已成為臨床病理學(xué)診斷常規(guī)檢查方法之一。穿刺活檢組織直徑一般在約1.0mnT2.0mm之間，組織條常規(guī)固定、脫水包埋、石蠟切片病理診斷后，所剩余組織量更少。如果后續(xù)因?yàn)檠芯啃枰^續(xù)常規(guī)石蠟切片，剩余組織很容易消耗完。為了提高臨床穿刺活檢組織病理學(xué)檢查后剩余組織樣本的使用效率，發(fā)明了一種高通量的穿刺活檢組織芯片的制備技術(shù)與方法。
[0004]目前尚沒有利用穿刺活檢組織制備組織芯片的技術(shù)及應(yīng)用的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種制備高通量的穿刺活檢組織芯片的技術(shù)與方法。所制備的穿刺活檢組織芯片可用于相關(guān)疾病的免疫組化、原位雜交等分子醫(yī)學(xué)研究。
[0006]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的。收集42例經(jīng)乳腺穿刺活檢組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌的患 者的穿刺活檢剩余石蠟組織標(biāo)本，以相應(yīng)的常規(guī)病理HE染色切片為指引，切取HE染色切片癌灶部分對(duì)應(yīng)的石蠟組織條段(1_-4_)，制備石蠟組織芯，利用組織芯片儀制備乳腺癌穿刺活檢組織陣列，石蠟切片制備乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織
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【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1是空心陣列石蠟塊蠟?zāi)５氖疽鈭D:其中，1:為2例乳腺癌石蠟芯預(yù)留的石蠟孔；2:為40例乳腺癌石蠟芯預(yù)留的石蠟孔。所有孔徑為1.5mm，孔間距為1mm。
[0008]圖2是乳腺癌組織陣列石蠟塊的示意圖:其中，1:為2例乳腺癌石蠟芯柱；2:為40例乳腺癌石蠟芯柱。穿刺活檢石蠟組織柱直徑為1.5_，石蠟組織柱間距為1_。
[0009]圖3是穿刺活檢石蠟組織芯片的示意圖:由于病理診斷石蠟切片，穿刺活檢石蠟組織柱縱向已被部分切片切除，組織柱橫向截面成為部分的圓面狀。其中，1:為2例乳腺癌石蠟芯片組織點(diǎn)，同時(shí)也可作為本穿刺活檢石蠟組織芯片的定位判斷位點(diǎn)；2 --為40例乳腺癌石蠟芯片組織點(diǎn)。穿刺活檢石蠟組織芯片組織點(diǎn)的直徑為1.5_，乳腺癌石蠟芯片組織點(diǎn)間距為1mm。3:為精子芯片固相載體(粘附載玻片)上的磨沙標(biāo)記區(qū)域?！揪唧w實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例:收集42例經(jīng)乳腺穿刺活檢組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌的患者的穿刺活檢剩余石蠟組織標(biāo)本，制備乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片。
[0011]1.1病理診斷:乳腺穿刺活檢組織條經(jīng)過常規(guī)病理固定、脫水包埋、石蠟切片染色后，進(jìn)行病理診斷。
[0012]1.2標(biāo)本挑選:選擇42例乳腺穿刺活檢病理診斷確診為乳腺癌的石蠟組織切片，標(biāo)記HE染色切片上乳腺癌病灶的區(qū)域(>lmm)作為組織芯片制備的目標(biāo)組織條。
[0013]1.3石蠟芯制備:以HE染色切片上乳腺癌病灶的區(qū)域的標(biāo)記為指引，用石蠟切片刀將相應(yīng)的石蠟組織塊中的穿刺組織條切斷，切取組織條長(zhǎng)度為1_-4_。將石蠟組織塊放于70°C預(yù)熱的金屬加熱盤上(石蠟塊切片面朝下)，加熱石蠟組織塊切片面約I分鐘，至石蠟組織塊淺表石蠟部分融化，用鑷子小心取下乳腺癌病灶目標(biāo)石蠟組織條。將目標(biāo)石蠟組織條放于金屬加熱盤上繼續(xù)加熱至組織條石蠟完全融化。小心將融化的石蠟組織條縱向放入自制的直徑為1.5mm的塑料小管中(70°C預(yù)熱)。將裝有目標(biāo)石蠟組織條的塑料小管整體水平放入少量融化的石蠟中，以便塑料小管內(nèi)浸滿石蠟。將塑料小管取出置于4°C冷臺(tái)上快速冷卻。肉眼對(duì)光觀察可清晰看見塑料小管內(nèi)組織條所在的位置，并用記號(hào)筆標(biāo)記組織條兩端的位置。用石蠟切片刀在組織條兩端標(biāo)記處切斷塑料小管，小心縱向切開塑料小管(注意盡量不要切到組織條)，取出石蠟組織條，即為:石蠟芯。
[0014]1.4受體蠟?zāi)?制備空白石蠟塊，利用組織芯片制備儀定位鉆取孔徑為1.5_的空心受體蠟?zāi)?，如附圖1。
[0015]1.5組織陣列:依照乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片的設(shè)計(jì)，將總共42例石蠟芯逐一安放到空心受體蠟?zāi)Ｖ邢鄳?yīng)的空白孔位點(diǎn)，以陣列表面齊平為基準(zhǔn)，如附圖2。
[0016]1.6陣列融合:將組織陣列置于干燥箱中，調(diào)節(jié)干燥箱溫度與時(shí)間，確保所有組織石蠟芯與受體蠟?zāi)３浞秩诤锨沂炐静灰莆蛔冃巍?br> [0017]1.7石蠟切片:利用石蠟切片機(jī)切片制作石蠟切片，片厚4um。將石蠟切片平鋪與粘附載玻片上，如附圖3。在載玻片標(biāo)記區(qū)域作好標(biāo)記。
[0018]1.8乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片芯片制作完畢。結(jié)合免疫組化、分子原位雜交等實(shí)驗(yàn)分子研究技術(shù)，所制備的乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片可用于乳腺癌的分子醫(yī)學(xué)研究。
【權(quán)利要求】
1.一種穿刺活檢組織芯片的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: 第一步，病理診斷:乳腺穿刺活檢組織條經(jīng)過常規(guī)病理固定、脫水包埋、石蠟切片染色后，進(jìn)行病理診斷。 第二步，標(biāo)本挑選:選擇42例乳腺穿刺活檢病理診斷確診為乳腺癌的石蠟組織切片，標(biāo)記HE染色切片上乳腺癌病灶的區(qū)域(>lmm)作為組織芯片制備的目標(biāo)組織條。 第三步，石蠟芯制備:以HE染色切片上乳腺癌病灶的區(qū)域的標(biāo)記為指引，用石蠟切片刀將相應(yīng)的石蠟組織塊中的穿刺組織條切斷，切取組織條長(zhǎng)度為1_-4_。將石蠟組織塊放于70°C預(yù)熱的金屬加熱盤上(石蠟塊切片面朝下)，加熱石蠟組織塊切片面約I分鐘，至石蠟組織塊淺表石蠟部分融化，用鑷子小心取下乳腺癌病灶目標(biāo)石蠟組織條。將目標(biāo)石蠟組織條放于金屬加熱盤上繼續(xù)加熱至組織條石蠟完全融化。小心將融化的石蠟組織條縱向放入自制的直徑為1.5mm的塑料小管中(70°C預(yù)熱)。將裝有目標(biāo)石蠟組織條的塑料小管整體水平放入少量融化的石蠟中，以便塑料小管內(nèi)浸滿石蠟。將塑料小管取出置于4°C冷臺(tái)上快速冷卻。肉眼對(duì)光觀察可清晰看見塑料小管內(nèi)組織條所在的位置，并用記號(hào)筆標(biāo)記組織條兩端的位置。用石蠟切片刀在組織條兩端標(biāo)記處切斷塑料小管，小心縱向切開塑料小管(注意盡量不要切到組織條)，取出石蠟組織條，即為:石蠟芯。 第四步，受體蠟?zāi)?制備空白石蠟塊，利用組織芯片制備儀定位鉆取孔徑為1.5mm的空心受體蠟?zāi)＃绺綀D1。 第五步，組織陣列:依照乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片的設(shè)計(jì)，將總共42例石蠟芯逐一安放到空心受體蠟?zāi)Ｖ邢鄳?yīng)的空白孔位點(diǎn)，以陣列表面齊平為基準(zhǔn)，如附圖2。 第六步，陣列融合:將組織陣列置于干燥箱中，調(diào)節(jié)干燥箱溫度與時(shí)間，確保所有組織石蠟芯與受體蠟?zāi)３浞秩诤锨沂炐静灰莆蛔冃巍? 第七步，石蠟切片:利用石蠟切片機(jī)切片制作石蠟切片，片厚4um。將石蠟切片平鋪與粘附載玻片上，如附圖3。在載玻片標(biāo)記區(qū)域作好標(biāo)記。 第八步，乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片芯片制作完畢。結(jié)合免疫組化、分子原位雜交等實(shí)驗(yàn)分子研究技術(shù)，所制備的乳腺癌穿刺活檢組織的石蠟組織芯片可用于乳腺癌的分子醫(yī)學(xué)研究。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穿刺活檢組織芯片的制備方法，其特征在于:所述穿刺活檢組織芯片包含但不限于乳腺癌穿刺活檢組織標(biāo)本，也可以是其他惡性腫瘤的穿刺活檢組織標(biāo)本，或者良性腫瘤以及非腫瘤的穿刺活檢組織標(biāo)本。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穿刺活檢組織芯片的制備方法，其特征在于:臨床穿刺活檢石蠟組織中目標(biāo)組織的獲取方式與操作程序?yàn)?先將目標(biāo)組織在相應(yīng)的HE染色石蠟切片上病理診斷定位、定位切斷目標(biāo)組織條，然后加熱融化獲取目標(biāo)組織條，并將目標(biāo)組織條放入內(nèi)徑相當(dāng)?shù)乃芰闲」苤欣鋮s塑性，制備石蠟芯柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穿刺活檢組織芯片的制備方法，其特征在于:穿刺活檢組織芯片組織點(diǎn)直徑為1.5mm、但不限于1.5mm，可以是1.0mm-2.0mm之間；組織芯片點(diǎn)的間距為1mm。
【文檔編號(hào)】G01N33/48GK103869057SQ201210538814
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月13日
【發(fā)明者】郜恒駿, 張可浩, 張新, 盛海輝, 顏虹, 張宇 申請(qǐng)人:泰州醫(yī)藥城博奧邦科生物科技有限公司