專利名稱：干試劑的制造方法、干試劑、以及使用其的分析用具的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于分析液體試樣所含的成分的干試劑的制造方法、干試劑、以及使用該干試劑的分析用具。
背景技術(shù)：
在用于通過酶法測定液體試樣中所含的AST (天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)或LDH (乳酸脫氫酶)等成分的量的試劑中，經(jīng)常使用煙酰胺輔酶(例如β-NAD+、β-NADH、β-NADP+、β-NADPH)作為檢測試劑。例如，專利文獻I中記載了含有煙酰胺輔酶、并用于測定液體試樣中所含的成分的液狀試劑。在該液狀試劑中，通過使用了紫外光區(qū)的波長(340nm)的光的透射法，來測定煙酰胺輔酶的增加或減少。已提出了一種具備含有煙酰胺輔酶的干試劑作為檢測試劑的、用于簡易測定液體試樣中所含的成分的量的分析用具。例如，專利文獻2中記載了在基板上形成多層的膠質(zhì)層、并在其中含有作為煙酰胺輔酶的一種的β-NAD+的分析用具。該分析用具不是直接檢測β-NAD+被還原而生成的β-NADH,而是含有電子轉(zhuǎn)移劑和甲膜染料(formazan dye)前體作為β-NADH檢測劑。具體地，使用黃遞酶來作為電子轉(zhuǎn)移劑。另外，使用硝基四氮唑藍(以后稱NTB)來作為甲臜染料前體。該NTB的顏色變化通過使用可見光區(qū)的波長的光的反射法來進行檢測。另外，專利文獻3中記載了由將液體試樣提供到內(nèi)部的試樣提供口、對所述液體試樣進行測定的測定室、以及連通所述試樣提供口和所述測定室的流路構(gòu)成的分析用具。所述流路和所述測定室通過多個板部件的層疊而形成，這些多個板部件中的至少一個為具有通氣性的多孔質(zhì)的板部件。在該分析用具中，液體試樣的移送不是通過毛細管現(xiàn)象，而是通過從試樣提供口施加壓力等來進行。該分析用具的測定室中配置有干試劑。該干試劑也使用β-MD+作為檢測試劑。并且，該干試劑也不直接測定還原β-MD+而產(chǎn)生的β-NADH，而是含有檢測還原β -NAD+而產(chǎn)生的β -NADH的β -NADH檢測劑。使用黃遞酶來作為電子轉(zhuǎn)移劑。使用作為水溶性四唑鹽的WST-4來作為甲臜染料前體。該WST-4的顏色變化通過使用可見光區(qū)的波長的透射法來進行檢測。另一方面，專利文獻4中記載了由透明基板和透明蓋構(gòu)成的分析用具以及用于測定其的分析裝置。在該分析用具中，通過貼合透明基板和透明蓋，而形成了配置有干試劑的測定室和將液體試樣移送到所述測定室的毛細管流路。移送到測定室中的液體試樣溶解所述干試劑。所述分析裝置通過使用可見光區(qū)的光的透射法來測定干試劑中所含的檢測試劑與液體試樣中的特定成分反應(yīng)而發(fā)生的顏色變化。該分析用具由于將液體試樣密封而進行測定，因此能夠防止所述分析裝置內(nèi)變臟。由此，不需要對所述分析裝置內(nèi)進行清洗。另外，該分析裝置通過改良光學(xué)系統(tǒng)而小型化。此外，該干試劑并不是包含煙酰胺輔酶作為檢測試劑的干試劑。但是，在所述現(xiàn)有技術(shù)中，如下所述，還存在應(yīng)當(dāng)改善的余地。即，如專利文獻1至3中所述，廣泛采用了使用煙酰胺輔酶的酶法。但是，其測定值中若沒有相容性，則不能比較患者數(shù)據(jù)，有可能阻礙診斷。因此，國際上，由國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(IFCC)提示了標(biāo)準測定法(IFCC推薦法)。另外，在日本，由日本臨床化學(xué)會(JSCC)公布了 JSCC推薦法。這些推薦法的主要特征在于，使用紫外光區(qū)的波長的340nm直接測定煙酰胺輔酶的量。這樣的推薦法一般應(yīng)用于記載在專利文獻I中的液狀試劑，但在專利文獻2和3所記載的那樣的簡易測定用分析用具中也優(yōu)選采用。但是，在反射法中，通過紫外光區(qū)的波長(340nm)的光進行的測定在原理上是困難的。因此，在如專利文獻2中記載的那樣的使用反射法的分析用具中，不得不采用與上述推薦法不同的、使用可見光區(qū)的光的測定原理。專利文獻3和4所記載的分析用具通過透射法來進行測定。如上所述，專利文獻3和4中記載的分析用具并不是使用紫外光區(qū)的波長直接測定煙酰胺輔酶的量的。在專利文獻3中記載的分析用具中，液體試樣的移送通過從試樣提供口施加壓力等來進行。這種用于測定分析用具的分析裝置由于具備移送液體試樣的泵等，因此有大型化的傾向。就能夠?qū)⒎治鲅b置小型化的觀點來說，優(yōu)選采用如專利文獻4中記載的那樣的、通過毛細管現(xiàn)象來移送液體試樣的分析用具。在專利文獻4記載的分析用具中，使用配置在測定室中的干試劑，通過可見光進行測定。為了對這樣的分析用具應(yīng)用上述推薦法，尤其是為了通過使用紫外光的透射法來進行精度良好的測定，需要在所述測定室中均勻地溶解干試劑。因此，配置在所述測定室中的干試劑必須沒有龜裂而且平滑。但是，已弄清了溶解了煙酰胺輔酶的試劑溶液如果僅單純地干燥，則變得不平滑，并會發(fā)生龜裂。這樣的干試劑在不經(jīng)攪拌地溶解的情況下，由于產(chǎn)生不均，因此在使用紫外光區(qū)的光進行測定的情況下，難以獲得目標(biāo)吸光度。另外，干試劑的龜裂是液體試樣流入測定室時帶入氣泡的原因。這種存在于測光部的氣泡是導(dǎo)致測定值的誤差的原因?，F(xiàn)有技術(shù)文獻專利文獻專利文獻1:日本特開平8-248028號公報專利文獻2:日本特公平5-60360號公報專利文獻3:國際公開第2009/090756號小冊子專利文獻4:日本特開平10-197526號公報

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的課題本發(fā)明是鑒于上述問題而作出的，其目的在于，提供如下干試劑的制造方法、干試齊U、以及使用其的分析用具，所述干試劑在為了定量液體試樣所含的成分而通過使用紫外光區(qū)的光的透射法來測定煙酰胺輔酶的增減的情況下，能夠進行精度良好的測定。用于解決問題的手段為了解決上述問題，本發(fā)明考慮如下技術(shù)手段。通過本發(fā)明的第I方面提供的干試劑的制造方法是用于對液體試樣中所含的特定成分進行定量分析的干試劑的制造方法，其特征在于，包括:將煙酰胺輔酶和用于平滑所述干試劑的平滑化劑溶解在溶解液中，來調(diào)制試劑溶液的步驟，其中，通過使用紫外光區(qū)的光的透射法來測定所述煙酰胺輔酶的增加或減少；以及在分析用具的基材或蓋上滴下預(yù)定量的所述試劑溶液之后，進行干燥的步驟。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述平滑化劑為選自糖類和表面活性劑中的至少一種與堿的組合。此外，本發(fā)明中所述的“糖類”的概念包括單糖類、二糖類等的寡糖、以及糖醇。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述糖類為蔗糖，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的蔗糖的濃度調(diào)節(jié)為6W/V%以上。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述表面活性劑為選自η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺和3-[(3_膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺的濃度調(diào)節(jié)為2W/V%以上。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述平滑化劑含有所述糖類和所述表面活性劑，所述糖類為選自D-山梨醇和蔗糖中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的D-山梨醇的濃度調(diào)節(jié)為6W/V%以上，蔗糖的濃度調(diào)節(jié)為3W/V%以上，所述表面活性劑為選自η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺的濃度調(diào)節(jié)為3W/V%以上，所述試劑溶液中的3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽的濃度調(diào)節(jié)為0.1W/V%以上。通過本發(fā)明的第2方面提供的干試劑，是用于進行液體試樣中所含的特定成分的定量分析的干試劑，其特征在于， 包括:煙酰胺輔酶、和用于平滑所述干試劑的平滑化劑，其中，所述干試劑被構(gòu)成為通過使用紫外光區(qū)的光的透射法，來測定所述煙酰胺輔酶的增加或減少。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述平滑化劑為選自糖類和表面活性劑中的至少一種與堿的組
合優(yōu)選的構(gòu)成為:所述堿為氫氧化鈉。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述糖類為選自D-山梨醇和蔗糖中的至少一種化合物。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述表面活性劑為選自η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺和3-[(3_膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述干試劑容納在分析用具的內(nèi)部，所述分析用具具備使所述紫外光區(qū)的光透射的測定室，所述干試劑配置在所述測定室中。優(yōu)選的構(gòu)成為:所述分析用具具備用于通過毛細管現(xiàn)象將所述液體試樣移送到所述測定室的毛細管流路，所述干試劑在不攪拌的情況下通過由所述毛細管流路移送的所述液體試樣溶解。通過本發(fā)明的第3方面提供的分析用具是用于進行液體試樣中所含的特定成分的定量分析的分析用具，其特征在于，所述分析用具的內(nèi)部容納有通過本發(fā)明的第2方面提供的干試劑。優(yōu)選的構(gòu)成為:分析用具的內(nèi)部具備測定室，所述測定室是為了測定所述煙酰胺輔酶的增減而使所述紫外光區(qū)的光透射的部分，所述干試劑配置在所述測定室中。優(yōu)選的構(gòu)成為:分析用具具備用于通過毛細管現(xiàn)象來將所述液體試樣移送到所述測定室的毛細管流路，所述干試劑在不攪拌的情況下通過由所述毛細管流路移送的所述液體試樣溶解。
通過以下參照附圖對發(fā)明的實施方式進行的說明，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將會
變得更為清楚。


圖1是示出本發(fā)明涉及的具備干試劑的分析用具的示例的平面圖；圖2是沿著圖1所示的分析用具的I1-1I線的截面圖；圖3A至圖3C是說明圖1所示的分析用具的動作的截面圖；圖4是示出比較例I的干試劑的表面狀態(tài)的照片；圖5是示出液體試樣被移送到比較例I的干試劑上的狀態(tài)的照片；圖6是示出比較例2的干試劑的表面狀態(tài)的照片；圖7是示出實施例2的干試劑的表面狀態(tài)的照片；圖8是示出實施例5的干試劑的表面狀態(tài)的照片；圖9是比較比較例I和實施例2的吸光度的時間進程(time course)的曲線圖；圖10是比較比較例I和實施例5的吸光度的時間進程的曲線圖；圖11是比較比較例I和實施例6的吸光度的時間進程的曲線圖；圖12是示出比較例3的干試劑的表面狀態(tài)的照片；圖13是示出實施例7的干試劑的表面狀態(tài)的照片。符號說明A分析用具S血清(液體試樣)I 蓋2 基材30毛細管流路31測定室4干試劑
具體實施例方式下面，參照附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行具體說明。圖1和圖2不出了應(yīng)用了本發(fā)明的干試劑和含有該干試劑的分析用具的一個例子。該分析用具A安裝在診療所、醫(yī)院的病房中設(shè)置的小型的分析裝置中，用于對血清中所含的成分的量進行定量分析。血清相當(dāng)于本發(fā)明所述的液體試樣的一個示例。分析用具A也能夠應(yīng)用于血清以外的液體試樣。作為血清以外的液體試樣，具體地，例如可舉出全血、血漿、尿、唾液、間質(zhì)液等生物體試樣。這些液體試樣可以直接應(yīng)用，也可以用稀釋液稀釋后應(yīng)用。如圖1和圖2所示，分析用具A具備蓋1、基材2、隔片3、毛細管流路30、32、測定室31、和干試劑4。此外，在以后的說明中，上下方向等方向假定按照附圖所記載的方向。蓋I例如為以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)為材料并具有紫外線透射性的透明的板狀部件。該板狀部件的厚度為0.1mm。作為蓋1，只要是具有紫外線透射性的板狀部件則可以使用任何的部件。具體地，例如可舉出以聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)為材料的板狀部件。另外，厚度也不限于0.1mm。具體地,例如厚度優(yōu)選0.1mm 1.0mm,更優(yōu)選為0.1mm 0.2mm。蓋I上形成有試樣提供口 10和通氣口 11。如圖2所示，試樣提供口 10為用于分析裝置所具備的噴嘴5將血清S提供給分析用具A的開口部。通氣口 11是為了在分析用具A的內(nèi)部使通過毛細管現(xiàn)象的血清S的移送順暢地進行而形成的開口部?；?與蓋I同樣，例如為以PMMA為材料的具有紫外線透射性的透明板狀部件。該板狀部件的厚度為0.1mm0作為基材2，只要是具有紫外線透射性的板狀部件則可以使用任何部件。具體地，例如，可以舉出以PET為材料的板狀部件。另外，厚度也不限于0.1_。具體地，例如厚度優(yōu)選0.1mm 1.0mm,更優(yōu)選為0.1mm 0.2mm。如圖1和圖2所示,干試劑4形成并配置在基材2的作為后述的測定室31的底壁部的部分上。如圖1和圖2所示，隔片3用于在貼合蓋I和基材2的同時在分析用具A的內(nèi)部形成毛細管流路30、32和測定室31。作為隔片3，例如，使用厚度為0.5_的雙面膠帶。通過該厚度來限定測定室的池長(力力長)。該雙面膠帶是在合成樹脂制的薄膜的兩面上涂布粘接劑而形成的。通過在隔片3上形成后述的毛細管流路30、32和測定室31的形狀的貫通口，并使用隔片3貼合蓋I和基材2，來形成毛細管流路30、32和測定室31。此外，隔片3的厚度不限于0.5mm。在分析用具A用于測定血清S中大量含有的成分的量的情況下，通過減少隔片3的厚度來降低靈敏度。反之，在分析用具A用于測定血清S中僅微量含有的成分的量的情況下，通過增加隔片3的厚度來提高靈敏度。如圖2所示，毛細管流路30用于通過毛細管現(xiàn)象將由噴嘴5從試樣提供口 10提供的血清S移送到后述的測定室31。另外，毛細管流路32用于將血清S從測定室31移送至通氣口 11。毛細管流路32為了 將測定室31中可靠地裝滿血清S而設(shè)置。如圖1和圖2所示，測定室31是形成在分析用具A的內(nèi)部的、由上壁部、側(cè)壁部和底壁部包圍的小空間。測定室31用于容納后述的干試劑4。如圖2所示，干試劑4固定在測定室31的底壁面31a上。血清S從毛細管流路30流入測定室31。流入的血清S溶解干試劑4。溶解的試劑在測定室31中擴散。此時，不攪拌溶解的試劑和血清S。此外，也能夠?qū)⒏稍噭?固定在測定室31的上壁面31b上。另外，在存在如不與其他試劑分離就不能保持穩(wěn)定性的試劑的情況下，也可以將分開含有這些試劑的多個干試劑4固定在上壁面31b和底壁面31a兩者上來配置。如圖1和圖2所示，毛細管流路30、32和測定室31的上壁部由蓋I形成。側(cè)壁部由隔片3形成。另外，底壁部由基材2形成。為了容易產(chǎn)生毛細管現(xiàn)象，對蓋I和基材2的表面進行紫外線處理或等離子處理等物理處理。另外，蓋I和基材2的表面處理不限于物理處理，也可以通過涂布表面活性劑來進行。干試劑4是混合了用于檢測血清S中所含的特定成分的多種試劑、并進行了干燥的試劑。干試劑4含有煙酰胺輔酶作為檢測試劑。煙酰胺輔酶是某種氧化還原酶進行催化的反應(yīng)所需要的。作為煙酰胺輔酶，具體地，可舉出煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(β -NAD+)、β -煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(β -NADH)、β -煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(β -NADP+), β -煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸還原型(β -NADPH)。通過氧化還原酶進行催化的反應(yīng)，β -NAD+與β -NADH相互轉(zhuǎn)變。另夕卜，β -NADP+和β -NADPH相互轉(zhuǎn)變。其中，作為還原型的煙酰胺輔酶的β-NADH和β-NADPH在340nm附近具有極大吸收。因此，在需要煙酰胺輔酶的檢測體系中，分析裝置通過檢測β-NADH或β-NADPH的增加或減少來對血清S中所含的特定成分進行定量。
作為通過煙酰胺輔酶所參與的檢測體系可檢測的成分，可舉出葡萄糖、尿酸、中性脂肪、氨、肌酐等物質(zhì)、以及肌酸激酶、轉(zhuǎn)氨酶、亮氨酸氨肽酶、α -淀粉酶、乳酸脫氫酶等酶。例如，乳酸脫氫酶(LDH)催化由乳酸生成丙酮酸的反應(yīng)。此時，β-NAD+被還原成β-NADH。如上所述，β-NAD+和β-NADH在紫外光區(qū)的波長處的吸收光譜顯著不同。β -NAD+僅在260nm附近有吸收，β -NADH在340nm附近也有吸收。由此，通過測定340nm處的β -NADH的吸光度的增加，能夠檢測LDH的活性?；瘜W(xué)反應(yīng)式I
權(quán)利要求
1.一種干試劑的制造方法，其中，所述干試劑用于進行液體試樣中所含的特定成分的定量分析，所述制造方法包括: 將煙酰胺輔酶和用于平滑所述干試劑的平滑化劑溶解在溶解液中，來調(diào)制試劑溶液的步驟，其中，通過使用紫外光區(qū)的光的透射法來測定所述煙酰胺輔酶的增加或減少；以及 在分析用具的基材或蓋上滴下預(yù)定量的所述試劑溶液之后，進行干燥的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干試劑的制造方法，其中， 所述平滑化劑為選自糖類和表面活性劑中的至少一種與堿的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干試劑的制造方法，其中， 所述糖類為蔗糖，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的蔗糖的濃度調(diào)節(jié)為6W/V%以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的干試劑的制造方法，其中， 所述表面活性劑為選自η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺的濃度調(diào)節(jié)為2W/V%以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干試劑的制造方法，其中， 所述平滑化劑含有所述糖類和所述表面活性劑， 所述糖類為選自D-山梨醇和蔗糖中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的D-山梨醇的濃度調(diào)節(jié)為6W/V%以上，蔗糖的濃度調(diào)節(jié)為3W/V%以上， 所述表面活性劑為選自η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種，在調(diào)制所述試劑溶液的步驟中，所述試劑溶液中的η-辛?；?N-甲基-D-葡糖胺的濃度調(diào)節(jié)為3W/V%以上，所述試劑溶液中的3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽的濃度調(diào)節(jié)為0.1W/V%以上。
6.—種干試劑，用于進行液體試樣中所含的特定成分的定量分析，并包含: 煙酰胺輔酶；和 用于平滑所述干試劑的平滑化劑， 其中，所述干試劑被構(gòu)成為通過使用紫外光區(qū)的光的透射法，來測定所述煙酰胺輔酶的增加或減少。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的干試劑，其中， 所述平滑化劑為選自糖類和表面活性劑中的至少一種與堿的組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的干試劑，其中， 所述堿為氫氧化鈉。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的干試劑，其中， 所述糖類為選自D-山梨醇和蔗糖中的至少一種化合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項所述的干試劑，其中， 所述表面活性劑為選自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸鹽中的至少一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求6至10中任一項所述的干試劑，其中， 所述干試劑容納在分析用具的內(nèi)部， 所述分析用具具備使所述紫外光區(qū)的光透射的測定室，所述干試劑配置在所述測定室中。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的干試劑，其中， 所述分析用具具備用于通過毛細管現(xiàn)象將所述液體試樣移送到所述測定室的毛細管流路， 所述干試劑在不攪拌的情況下通過由所述毛細管流路移送的所述液體試樣溶解。
13.一種分析用具，用于進行液體試樣中所含的特定成分的定量分析，其中， 所述分析用具的內(nèi)部容納有權(quán)利要求6至12中任一項所述的干試劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的分析用具，其中， 所述分析用具的內(nèi)部具備測定室， 所述測定室是為了測定所述煙酰胺輔酶的增加或減少而使所述紫外光區(qū)的光透射的部分，所述干試劑配置在所述測定室中。
15.根據(jù)權(quán)利要 求14所述的分析用具，其中， 所述分析用具具備用于通過毛細管現(xiàn)象來將所述液體試樣移送到所述測定室的毛細管流路，所述干試劑在不攪拌的情況下通過由所述毛細管流路移送的所述液體試樣溶解。
全文摘要
本發(fā)明提供一種干試劑的制造方法、干試劑、以及使用其的分析用具，該干試劑在為了定量液體試樣中所含的成分而通過使用紫外光區(qū)的光的透射法來測定煙酰胺輔酶的增減的情況下，能夠進行精度良好的測定。干試劑(4)用于進行液體試樣(S)中所含的特定成分的定量分析，并包含煙酰胺輔酶以及用于平滑干試劑(4)的平滑化劑，其中，所述煙酰胺輔酶的增加或減少通過使用紫外光區(qū)的光的透射法來測定。所述平滑化劑為選自糖類和表面活性劑中的至少一種與堿的組合。
文檔編號G01N33/52GK103217521SQ20131002376
公開日2013年7月24日 申請日期2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月22日
發(fā)明者矢里優(yōu)衣, 今井敏博, 中村勤 申請人:愛科來株式會社