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      Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:6169817閱讀:1720來源:國知局
      Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用的制作方法
      【專利摘要】本發(fā)明涉及磷酸化蛋白質(zhì)檢測技術(shù),具體地說就是Stains-All染料在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了應(yīng)用Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測的方法,包括步驟:將蛋白質(zhì)樣品電泳后的凝膠在固定液中固定;漂洗;染色;顯影。本發(fā)明具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、操作簡單迅速、重現(xiàn)性好、線性范圍廣、使用安全、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。
      【專利說明】Stains-AI I在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測 中的應(yīng)用

      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及磷酸化蛋白質(zhì)檢測技術(shù),具體地說就是涉及磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測的 一種新方法。

      【背景技術(shù)】
      [0002] 蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化的可逆反應(yīng),是機(jī)體內(nèi)最常見、最重要的翻譯后修飾之 一。它參與了包括細(xì)胞信號傳導(dǎo),細(xì)胞分化和生長,細(xì)胞代謝凋亡等重要過程。此外,與很 多疾病的發(fā)生機(jī)制,比如癌癥,也密切相關(guān)。但由于存在反應(yīng)瞬時(shí)進(jìn)行以及磷酸化蛋白在細(xì) 胞內(nèi)含量較低等困難,使磷酸化蛋白的檢測受到了一定的限制。因此,對磷酸化蛋白的新型 檢測研究具有重要的意義。目前,聚丙烯酰胺凝膠電泳是高效分離和分析蛋白質(zhì)分子的一 種常用方法,使得凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)的檢測技術(shù)對磷酸化蛋白質(zhì)的相關(guān)研究起著至關(guān)重 要的作用。
      [0003] 測定磷酸化蛋白質(zhì)含量的方法有多種,目前用于聚丙烯酰胺上磷酸化蛋白質(zhì)研究 和測定的方法有熒光染色法、染料染色法、染料染色結(jié)合銀染法等。磷酸化蛋白質(zhì)染料染色 檢測法因具有快速便捷、價(jià)格低廉、低毒等優(yōu)點(diǎn)而成為磷酸化蛋白質(zhì)檢測研究領(lǐng)域的熱點(diǎn) 之一。
      [0004] Stains-All為紫色粉末狀結(jié)晶,屬于陽離子碳青花染料。此前曾有報(bào)道將 Stains-All用于磷酸化蛋白質(zhì)檢測,但靈敏度很低,大約只有考馬斯亮藍(lán)的十分之一。本發(fā) 明對Stains-All原方法進(jìn)行改進(jìn),磷酸化蛋白檢測的選擇性和靈敏度與Pro-Q Diamond相 當(dāng)。


      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005] 本發(fā)明的目的在于提供Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測 中的應(yīng)用。
      [0006] 本發(fā)明所涉及的Stains-All的結(jié)構(gòu)式為
      [0007]

      【權(quán)利要求】
      1. Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用。
      2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于所述的Stains-All為Stains-All甲酰胺溶 液。
      3. -種磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測方法,其包括步驟: 1) 將經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后的蛋白質(zhì)樣品凝膠置于漂洗液中漂洗2次,每次20min, 其中所述漂洗液為含按體積比為20-50%甲酰胺的水溶液,棄漂洗液; 2) 加入染色液染色10_60min,其中所述染色液為含按重量體積比0.005-0. 02 %的 Stains-All、按體積比為20-40%甲酰胺及按摩爾濃度45mM Tris-HCl (pH9. 2)的水溶液, 棄染色液; 3) 加入顯影液顯影30s-15min,其中所述顯影液為含按重量體積比為0. 5-2%的依地 酸二鈉、按體積比為20-40%乙醇的水溶液,棄顯影液。 4) 檢測。
      4. 如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟1)中所述漂洗液為含按體積比為30% 甲酰胺的水溶液。
      5. 如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟2)染色液中Stains-All的濃度按重量 體積比為0.01%。
      6. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟2)中甲酰胺濃度按體積比為 30%。
      7. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟2)中染色的時(shí)間為20min。
      8. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟3)中依地酸二鈉濃度按重量 體積比為1%。
      9. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟3)中乙醇濃度按體積比為 30%。
      10. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟3)中顯影的時(shí)間為lmin。
      【文檔編號】G01N21/29GK104122131SQ201310170887
      【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月24日
      【發(fā)明者】金利泰, 叢維濤, 朱忠欣, 洪國贏 申請人:溫州安得森生物科技有限公司
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