一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法，所述藥物由黃芪、赤芍和補(bǔ)骨脂制成，所述檢測方法包括補(bǔ)骨脂薄層鑒定。本發(fā)明提供的檢測方法還包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中黃芪和/或赤芍的含量。此外，所述檢測方法還包括檢測藥物性狀和赤芍顯微鑒別。本發(fā)明的檢測方法可以有效控制藥物、特別是補(bǔ)肺活血膠囊的質(zhì)量，從而確保其臨床療效。
【專利說明】一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種用于治療肺心病、慢性阻塞性肺疾病的補(bǔ)肺活血藥物的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]復(fù)方中藥是中醫(yī)臨床用藥的主要形式，是中醫(yī)藥學(xué)的特色與精髓。中藥是一個由多成分、多因素構(gòu)成的復(fù)雜體系，其化學(xué)成分的多樣性與復(fù)雜性是其療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，建立符合中醫(yī)藥特點的現(xiàn)代質(zhì)量控制體系，攻克中藥質(zhì)量分析與評價的難題，改進(jìn)中藥現(xiàn)有質(zhì)量控制方法已成為人們積極研究的課題。
[0003]現(xiàn)代中藥制劑“補(bǔ)肺活血膠囊”(國藥準(zhǔn)字Z20030063)具有益氣活血，補(bǔ)肺固腎之功效，適用于肺腎氣虛血瘀癥。該藥物主要由君藥黃芪、臣藥赤芍和佐藥補(bǔ)骨脂制成，劑型為膠囊劑。方中君藥黃苗，甘、微溫，入肺脾二經(jīng)。益肺健脾，培土生金，大補(bǔ)肺腎之氣。臣藥赤芍，苦、平，入肝、脾二經(jīng)，能通血脈，化瘀血，行血中之滯。補(bǔ)骨脂，辛、大溫，入脾、腎經(jīng)。補(bǔ)腎助陽，壯火益土，納氣平喘。與黃芪合用，一補(bǔ)后天，兩顧脾胃；二補(bǔ)先天，壯之陽，消陰翳。使腎氣充足，攝納正常，氣歸下元，虛喘自平；使腎陽充足，溫煦有根，腰膝酸軟、肢寒畏冷等癥狀得以改善。與赤芍相伍，溫通血脈，是為佐藥。三藥合用，益氣化瘀，溫陽納氣，具有協(xié)同之功效。而每味藥物歸經(jīng)直達(dá)所所需之臟，故可不用使藥。縱觀全方，益氣化瘀、補(bǔ)肺固腎，具有恢復(fù)臟腑功能的作用，為治本之方。
[0004]對于這類藥物的成分含量檢測，2012年公開了膠囊劑的芍藥苷含量測定方法(謝清春等人，“補(bǔ)肺活血膠囊中芍藥苷的含量測定”，《中藥材》，2012年第35卷第8期)，該方法采用高效液相色譜法測定芍藥苷的含量，但是未涉及其它成分的測定，因此存在檢測指標(biāo)不全面、未對其有效成分的含量進(jìn)行控制等不足。
[0005]因此，目前仍需要提供一種能夠簡單、準(zhǔn)確且全面地檢測藥物活性成分含量的方法，以便能夠更有效控制和保證這種藥物、特別是補(bǔ)肺活血膠囊的質(zhì)量，從而確保其臨床療效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法，所述檢測方法能全面有效地控制此類藥物、特別是補(bǔ)肺活血膠囊的質(zhì)量，從而確保其療效。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0008]本發(fā)明提供了一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法，按重量份數(shù)計，所述藥物由黃芪38-42份、赤芍38-42份和補(bǔ)骨脂16-24份制成，所述檢測方法包括補(bǔ)骨脂薄層鑒定，包括以下步驟:
[0009]I)制備對照品溶液:取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得；
[0010]2)制備供試品溶液:取所述藥物約3g，加沸點30?60°C的石油醚20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
[0011]3)測定:吸取供試品溶液6μ 1，對照品溶液4μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8:2的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0012]優(yōu)選地，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物由黃芪40份、赤芍40份和補(bǔ)骨脂20份制成；更優(yōu)選地，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物根據(jù)以下制備方法制成:
[0013]I)取部分赤芍粉碎備用，將剩余赤芍和黃芪與補(bǔ)骨脂加水煎煮二次，每次I小時，合并煎液而濾過，將濾液濃縮至80°C下相對密度為1.05-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)60% (體積比)，充分?jǐn)嚢瑁o置24小時，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，繼續(xù)濃縮至80°C下相對密度為 1.35-1.40 ；
[0014]2)加入赤芍細(xì)粉，攪拌均勻，進(jìn)行干燥與粉碎；
[0015]3 )采用90%乙醇(體積比)制粒。
[0016]其中,所述步驟I)中粉碎的赤茍的質(zhì)量優(yōu)選為赤茍總質(zhì)量的1/4 ;優(yōu)選地,所述步驟3)還包括制粒后，干燥，然后加輔料適量，混勻；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述輔料為滑石粉。
[0017]所述用于補(bǔ)肺活血的藥物可以為片劑、顆粒劑、膠囊劑或口服液，優(yōu)選為膠囊劑。更優(yōu)選地，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物為補(bǔ)肺活血膠囊。在制成膠囊的情況下，本文提供的檢測方法為檢測膠囊的內(nèi)容物。
[0018]為進(jìn)一步準(zhǔn)確、全面檢測所述藥物的活性成分含量，本發(fā)明提供的上述檢測方法還可以包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中黃芪的含量，包括以下步驟:
[0019]I)制備供試品溶液:將所述藥物研細(xì)，取lg，精密稱定，加甲醇加熱回流提取2次，每次50ml，第一次60分鐘，第二次30分鐘，濾過，濾渣用少量甲醇洗滌，合并洗液和濾液，回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解。用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，20ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，最后一次洗滌后靜置過夜，棄去氨液。正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
[0020]2)制備對照品溶液:稱取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；
[0021]3)測定:分別精密吸取對照品溶液10μ 1、20μ 1，供試品溶液10μ I?20μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算黃芪的含量；其中，所述高效液相色譜法的條件包括:
[0022]色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；
[0023]流動相:體積比為32:68的乙腈-水；
[0024]流速:lmL/min;
[0025]檢測:蒸發(fā)光散射檢測器；
[0026]理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000。
[0027]以黃芪甲苷計，所述藥物含黃芪不得少于0.60mg/0.35g藥物。
[0028]或者，本發(fā)明提供的上述檢測方法還可以包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中赤芍的含量，包括以下步驟:
[0029]I)制備對照品溶液:取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成50 μ g/ml的溶液，即得；[0030]2)制備供試品溶液:取所述藥物，研細(xì)，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理I小時，條件為功率250W，頻率40kHz，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，每分鐘3000轉(zhuǎn)離心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0031]3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，即得；其中，所述高效液相色譜法的條件包括:
[0032]色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；
[0033]流動相:體積比為60:40的0.05mol / ml磷酸二氫鉀溶液-甲醇；
[0034]流速:lmL/min;
[0035]紫外檢測器檢測波長:230nm ；
[0036]理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。
[0037]以芍藥苷計，所述藥物含赤芍不得少于4.5mg/0.35g藥物。
[0038]或者，本發(fā)明提供的檢測方法可以同時包括補(bǔ)骨脂薄層鑒定以及黃芪和赤芍的含量的檢測。具體而言，本發(fā)明的檢測方法包括以下步驟:
[0039]一、補(bǔ)骨脂薄層鑒定
[0040]I)制備對照品溶液:取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得；
[0041]2)制備供試品溶液:取所述藥物約3g，加沸點30?60°C的石油醚20ml，超聲處理15分鐘(功率250W，頻率40kHz)，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
[0042]3)測定:照中國藥典2010年版一部附錄VI B的薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液
6μ 1，對照品溶液4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8:2的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0043]二、黃芪含量檢測
[0044]I)制備供試品溶液:將所述藥物研細(xì)，取lg，精密稱定，加甲醇加熱回流提取2次，每次50ml，第一次60分鐘，第二次30分鐘，濾過，濾渣用少量甲醇洗滌,合并洗液和濾液,回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解。用水飽和的正丁醇振搖提取4次，所述正丁醇體積分別為30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，最后一次洗滌后靜置過夜，棄去氨液。正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
[0045]2)制備對照品溶液:稱取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；
[0046]3)測定:分別精密吸取對照品溶液10μ 1、20μ 1，供試品溶液10μ I?20μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算黃芪的含量；其中，所述高效液相色譜法的條件包括:
[0047]色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；
[0048]流動相:體積比為32:68的乙腈-水；
[0049]流速:lmL/min;
[0050]檢測:蒸發(fā)光散射檢測器；[0051]理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000 ；
[0052]優(yōu)選地，所述藥物含黃芪以黃芪甲苷計，不得少于0.60mg/0.35g藥物。
[0053]三、赤芍含量檢測
[0054]I)制備對照品溶液:取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成50 μ g/ml的溶液，即得；
[0055]2)制備供試品溶液:取所述藥物，研細(xì)，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理I小時，條件為功率250W，頻率40kHz，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，每分鐘3000轉(zhuǎn)離心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0056]3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，即得；其中，所述高效液相色譜法的條件包括:
[0057]色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；
[0058]流動相:體積比為60:40的0.05mol / ml磷酸二氫鉀溶液-甲醇；
[0059]流速:lmL/min;
[0060]檢測波長:230nm；
[0061]理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000 ；
[0062]優(yōu)選地,所述藥物含赤茍以茍藥苷計,不得少于4.5mg/0.35g藥物。
[0063]此外，本發(fā)明提供的上述檢測方法還包括檢測藥物性狀，本發(fā)明的藥物(制成膠囊的情況下為硬膠囊內(nèi)容物)為棕黃色至棕褐色的細(xì)顆粒和粉末；氣微香，味微酸，苦。
[0064]并且，上述檢測方法還包括赤芍顯微鑒別:取本發(fā)明的藥物，置顯微鏡下觀察，草酸鈣簇晶直徑11?35 μ m，散在或存在于薄壁細(xì)胞中，常數(shù)個至數(shù)十個排列成行。
[0065]此外，上述用于補(bǔ)肺活血的藥物如為膠囊劑，應(yīng)符合膠囊劑項下有關(guān)各項規(guī)定(中國藥典2010年版一部附錄I L)。
[0066]制得的膠囊通常每粒裝0.35g，密封貯藏。使用時為口服，一次4粒，一日3次。
[0067]綜上，本發(fā)明提供了用于補(bǔ)肺活血的藥物、特別是補(bǔ)肺活血膠囊的有效成分檢測方法。本發(fā)明的檢測方法能夠準(zhǔn)確、全面、有效檢測補(bǔ)肺活血藥物中的有效成分，對其質(zhì)量進(jìn)行全面監(jiān)測，從而更好地確保藥物的臨床療效。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0068]以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實施方案，其中:
[0069]圖1A-1C分別顯示了實施例1中采用高效液相色譜對對照品、供試品和陰性對照溶液進(jìn)行黃芪含量測定的色譜圖；
[0070]圖2顯示了實施例1中采用高效液相色譜對黃芪甲苷對照品溶液進(jìn)行測定的線性關(guān)系圖；
[0071]圖3A-3C顯示了實施例1中采用不同色譜柱對供試品溶液中黃芪含量的測定結(jié)果，其中 3A 為 Dikma Diamonsil C18，3B 為資生堂 C18ACR，3C 為 Ultimate XB-C18 ；
[0072]圖4A-4C顯示了實施例3中赤芍含量測定方法的專屬性試驗結(jié)果，其中4A為對照品，4B為供試品,4C為陰性供試品；
[0073]圖5顯示了實施例3中赤芍含量測定方法的線性關(guān)系試驗結(jié)果；[0074]圖6A-6J顯示了實施例4中制備的不同批次補(bǔ)肺活血膠囊供試品的赤芍顯微特征鑒別結(jié)果；
[0075]圖7為顯示了實施例5中采用不同提取溶劑的薄層鑒定結(jié)果，其中試樣I提取溶劑為石油醚(沸點30?60°C)，試樣2提取溶劑為氯仿，試樣3提取溶劑為乙酸乙脂，試樣4為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品。
[0076]圖8為顯示了實施例5中采用不同沸點的石油醚的薄層鑒定結(jié)果，其中試樣I為石油醚(30?60°C )，試樣2為石油醚(60?90°C )，試樣3為石油醚(90?120°C )，試樣4為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品。
[0077]圖9為顯示了實施例5中采用不同用量的溶劑的薄層鑒定結(jié)果，其中試樣I為石油醚(30?60°C) 10ml，試樣2為石油醚(30?60°C) 20ml，試樣3為石油醚(30?60°C )30ml，試樣4為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品。
[0078]圖10為顯示了實施例5中采用不同超聲時間的薄層鑒定結(jié)果，其中試樣I為超聲提取10分鐘，試樣2為超聲提取15分鐘，試樣3為超聲提取25分鐘，試樣4為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品。其中因超聲25分鐘，溶液揮干，不能繼續(xù)后面的檢測工作，因此試樣3無斑點。
[0079]圖1lA和IlB顯示了實施例5中補(bǔ)骨脂薄層鑒定結(jié)果，其中IlA為Merck板，T:21.7°C, RH:42% ；11B 為手鋪板，T:21.6°C, RH:42% ;展距 8cm ;試樣 I 為 050504 批樣品，試樣2為050505批樣品，試樣3為060301批樣品，試樣4為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品，試樣5為補(bǔ)骨脂陰性對照。
【具體實施方式】
[0080]以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0081]下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。
[0082]實施例中采用的補(bǔ)肺活血藥物為以黃芪720g、赤芍720g、補(bǔ)骨脂360g作為原料藥，根據(jù)以下方法制成膠囊劑:
[0083]I)取180g赤芍粉碎備用，將剩余赤芍和黃芪與補(bǔ)骨脂加水煎煮二次，每次I小時，合并煎液而濾過，將濾液濃縮至80°C下相對密度為1.05-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)60% (體積比)，充分?jǐn)嚢?，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，繼續(xù)濃縮至80°C下相對密度為 1.35-1.40 ；
[0084]2)加入赤芍細(xì)粉，攪拌均勻，進(jìn)行干燥與粉碎；
[0085]3)采用90%乙醇(體積比)制粒，干燥，然后加適量滑石粉，混勻后裝入膠囊。
[0086]在測定時取其內(nèi)容物。
[0087]實施例1黃芪含量測定方法的選擇
[0088]試驗材料
[0089]1.儀器 AgilentllOO 高效液相色譜儀；Alltech2000ES
[0090]蒸發(fā)光檢測器；色譜柱:UltimateXB-C18、Dikma Diamonsil C-18、資生堂C18ACR。[0091]2.試劑乙腈(色譜純)，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。
[0092]3.對照品黃芪甲苷(含量測定用，批號110781 — 200613)，購于中檢所。
[0093]4.供試品 100101、100102、100103、100104、100302、100303、100501、100502、100601、100602。
[0094]5.黃芪陰性對照品根據(jù)上述膠囊的制備方法，不加黃芪制得黃芪陰性對照。
[0095]6.色譜柱參照中國藥典2010年版一部黃芪含量測定項下的測定方法；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱。
[0096]7.檢測方式參照中國藥典2010年版一部黃芪含量測定項下的測定方法；選用蒸發(fā)光散射檢測器進(jìn)行檢測。
[0097]8.流動相采用中國藥典2010年版一部黃芪的含量測定項中所用的流動相:乙腈一水(32:68體積比)為流動相。
[0098](一)供試品溶液的制備選擇
[0099]參照補(bǔ)肺活血膠囊的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)及中國藥典2010年版一部黃芪項下，對供試品進(jìn)行“索氏一回流提取”方法(方法一)、“加熱回流法”(方法二)及“超聲法”(方法三)的提取考察。具體試驗如下:
[0100]方法一:取同一批補(bǔ)肺活血膠囊(批號100103)，研細(xì)，分別取供試品兩份，每份約3g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流提取，提取液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解。用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，20ml，20ml，20ml )，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，最后一次洗滌后靜置過夜，棄去氨液。正丁醇蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。按表I回流時間進(jìn)行了試驗并測定黃芪甲苷的含量，測定結(jié)果如表I。
[0101]表I索氏提取法選擇不同提取時間測定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種用于補(bǔ)肺活血的藥物的檢測方法，按重量份數(shù)計，所述藥物由黃芪38-42份、赤芍38-42份和補(bǔ)骨脂16-24份制成，其特征在于，所述檢測方法包括補(bǔ)骨脂薄層鑒定，包括以下步驟: 1)制備對照品溶液:取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得； 2)制備供試品溶液:取所述藥物約3g，加沸點30?60°C的石油醚20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得； 3)測定:吸取供試品溶液6μ 1，對照品溶液4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8:2的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物由黃芪40份、赤芍40份和補(bǔ)骨脂20份制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物根據(jù)以下制備方法制成: O取部分赤芍粉碎備用，將剩余赤芍和黃芪與補(bǔ)骨脂加水煎煮二次，每次I小時，合并煎液而濾過，將濾液濃縮至80°c下相對密度為1.05-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)體積比為60%，充分?jǐn)嚢?，靜置24小時，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，繼續(xù)濃縮至80°C下相對密度為 1.35-1.40 ； 2)加入赤芍細(xì)粉，攪拌均.勻，進(jìn)行干燥與粉碎； 3)采用體積比為90%的乙醇制粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟I)中粉碎的赤芍的質(zhì)量為赤茍總質(zhì)量的1/4。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟3)還包括制粒后，干燥，然后加輔料適量，混勻。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述輔料為滑石粉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物為片劑、顆粒劑、膠囊劑或口服液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物為膠囊劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述用于補(bǔ)肺活血的藥物為補(bǔ)肺活血膠囊。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中黃芪的含量，包括以下步驟: 1)制備供試品溶液:將所述藥物研細(xì)，取lg，精密稱定，加甲醇加熱回流提取2次，每次50ml，第一次60分鐘，第二次30分鐘，濾過，濾渣用少量甲醇洗滌，合并洗液和濾液，回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，所述正丁醇體積分別為30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，最后一次洗滌后靜置過夜，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 2)制備對照品溶液:稱取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得； 3)測定:分別精密吸取對照品溶液ΙΟμ 1、20μ 1，供試品溶液10μ I?20 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算黃芪的含量；其中，所述高效液相色譜法的條件包括: 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料； 流動相:體積比為32:68的乙腈-水； 流速:lmL/min ； 檢測:蒸發(fā)光散射檢測器； 理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物含黃芪以黃芪甲苷計，不得少于0.60mg/0.35g藥物?！?br> 12.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中赤芍的含量，包括以下步驟: 1)制備對照品溶液:取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得； 2)制備供試品溶液:取所述藥物，研細(xì)，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理I小時，條件為功率250W，頻率40kHz，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，每分鐘3000轉(zhuǎn)離心,精密量取上清液5ml,置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，即得；其中，所述高效液相色譜法的條件包括: 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料； 流動相:體積比為60:40的0.05mol / ml磷酸二氫鉀溶液-甲醇； 流速:lmL/min ； 檢測波長:230nm ； 理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物含赤芍以芍藥苷計，不得少于4.5mg/0.35g藥物。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括采用高效液相色譜法檢測所述藥物中黃芪和赤芍的含量，其中檢測所述藥物中黃芪的含量包括以下步驟: 1)制備供試品溶液:將所述藥物研細(xì)，取lg，精密稱定，加甲醇加熱回流提取2次，每次50ml，第一次60分鐘，第二次30分鐘，濾過，濾渣用少量甲醇洗滌，合并洗液和濾液，回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，所述正丁醇體積分別為30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40ml，最后一次洗滌后靜置過夜，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； 2)制備對照品溶液:稱取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；3)測定:分別精密吸取對照品溶液ΙΟμ 1、20μ 1，供試品溶液10μ I?20 μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算黃芪的含量；其中，所述高效液相色譜法的條件包括: 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料； 流動相:體積比為32:68的乙腈-水； 流速:lmL/min ； 檢測:蒸發(fā)光散射檢測器； 理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000 ； 并且，檢測所述藥物中赤芍的含量包括以下步驟: 1)制備對照品溶液:取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得； 2)制備供試品溶液:取所述藥物，研細(xì)，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理I小時，條件為功率250W，頻率40kHz，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失 的重量，搖勻，每分鐘3000轉(zhuǎn)離心,精密量取上清液5ml,置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定，即得；其中，所述高效液相色譜法的條件包括: 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料； 流動相:體積比為60:40的0.05mol / ml磷酸二氫鉀溶液-甲醇； 流速:lmL/min ； 檢測波長:230nm ； 理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物含黃芪以黃芪甲苷計，不得少于0.60mg/0.35g藥物；所述藥物含赤芍以芍藥苷計，不得少于4.5mg/0.35g藥物。
16.根據(jù)權(quán)利要求1、10、12或14所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括檢測藥物性狀，所述藥物為棕黃色至棕褐色的細(xì)顆粒和粉末；氣微香，味微酸，苦。
17.根據(jù)權(quán)利要求1、10、12或14所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括赤芍顯微鑒別，將所述藥物置顯微鏡下觀察，草酸鈣簇晶直徑11?35μπι，散在或存在于薄壁細(xì)胞中，數(shù)個至數(shù)十個排列成行。
【文檔編號】G01N30/02GK103439449SQ201310317350
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月25日
【發(fā)明者】關(guān)澤明, 陳繼慈 申請人:廣東遠(yuǎn)大藥業(yè)有限公司