用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條和方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條和方法，具體地，公開了一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條，包括：含光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體的標(biāo)記物墊、含蛋白捕獲抗體的捕獲膜。本發(fā)明還公開了一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的方法，包括：將含待測(cè)蛋白的溶液滴加到前述試紙條的樣品墊上，反應(yīng)一段時(shí)間后用檢測(cè)儀檢測(cè)信號(hào)。
【專利說(shuō)明】用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條和方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及納米材料技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、側(cè)流層析技術(shù)等領(lǐng)域。更具體的，本發(fā)明涉及一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條；此外，本發(fā)明還涉及一種用免疫層析技術(shù)來(lái)檢測(cè)蛋白的方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]研究發(fā)現(xiàn)很多疾病都有其蛋白標(biāo)志物，疾病的有無(wú)、疾病的發(fā)展階段或者疾病的療效都可以通過(guò)監(jiān)測(cè)其對(duì)應(yīng)的蛋白標(biāo)志物來(lái)了解，例如:心肌梗塞相關(guān)的蛋白標(biāo)志物心肌脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)、心肌肌I丐蛋白(cTnl)等，腎臟損傷相關(guān)的蛋白標(biāo)志物尿白蛋白，糖尿病相關(guān)的蛋白糖化血紅蛋白。另外，引起食物中毒的金黃色葡萄球菌也可以通過(guò)其腸毒素蛋白檢測(cè)。不少對(duì)人類身體很重要的激素也是蛋白，如生長(zhǎng)激素、絨毛膜促性腺激素(HCG)等。食物如肉類或奶中的生長(zhǎng)激素過(guò)高被人體攝入后會(huì)導(dǎo)致青少年發(fā)育不正常，也需要加以檢測(cè)，而尿液或血液中的絨毛膜促性腺激素監(jiān)測(cè)是檢測(cè)生育期婦女是否懷孕的常用簡(jiǎn)單方法。
[0005]目前檢測(cè)這些蛋白標(biāo)志物的的方法主要有酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析、時(shí)間分辨熒光免疫分析以及膠體金免疫層析法。其中ELISA、化學(xué)發(fā)光免疫分析、時(shí)間分辨熒光免疫分析都要用到昂貴的設(shè)備，需要專業(yè)技術(shù)人員在實(shí)驗(yàn)室中操作，而且操作步驟多，耗時(shí)長(zhǎng)。膠體金免疫層析法則操作簡(jiǎn)單、方便、快速且便宜，但是其靈敏度較低，而且不能定量檢測(cè)。因此有必要提供一種快速、方便、簡(jiǎn)單且高靈敏度的目標(biāo)蛋白定量檢測(cè)方法。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明旨在解決本領(lǐng)域中的上述各種問(wèn)題和實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)。具體地，本發(fā)明的目的就是要提供一種方便、快速而且高靈敏度的地檢測(cè)樣品中的目標(biāo)蛋白的試紙條和方法。
[0008]具體的，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)樣品中的蛋白的試紙條。
[0009]在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條，包括標(biāo)記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述標(biāo)記物墊含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體，所述捕獲膜含有蛋白捕獲抗體。
[0010]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是絨毛膜促性腺激素。
[0011 ] 在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是尿白蛋白。
[0012]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是糖化血紅蛋白。
[0013]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是生長(zhǎng)激素。
[0014]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述蛋白是金黃色葡萄球菌腸毒素。
[0015]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是突光微球。
[0016]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中,其特征在于，所述突光微球是時(shí)間分辨突光微球。
[0017]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述時(shí)間分辨熒光微球是含銪復(fù)合物的熒光微球。
[0018]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是磷光微球。
[0019]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述磷光微球是含鉬復(fù)合物的磷光微球。
[0020]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是二氧化娃微球。
[0021]在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是聚苯乙烯微球。
[0022]在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的方法，其特征在于，在權(quán)利要求1所述的試紙條樣品墊上滴加含待測(cè)蛋白的樣品，反應(yīng)后檢測(cè)光信號(hào)。
[0023]詳細(xì)說(shuō)明
用免疫層析技術(shù)檢測(cè)樣品中目標(biāo)蛋白的試紙條如圖1示，包括樣品墊1，標(biāo)記物墊2，NC膜3，吸水紙4，塑料底板5。NC膜3上含有C線6和T線7。
[0024]其中樣品墊一般為玻璃纖維、濾紙或?yàn)V血膜。標(biāo)記物墊可為玻璃纖維、濾紙或聚酯膜。當(dāng)樣品墊和標(biāo)記物墊材質(zhì)相同時(shí)可整合在一起，用一條玻璃纖維、濾紙或聚酯膜來(lái)完成樣品墊和標(biāo)記物墊的功能。
[0025]所述標(biāo)記物墊上或者含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體，或者同時(shí)含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體和生物素標(biāo)記的目標(biāo)蛋白捕獲抗體，還可以含有其他用作陽(yáng)性對(duì)照的光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白或抗體，如鏈親和素或兔抗體。
[0026]捕獲膜可以是硝酸纖維素膜(NC膜)、尼龍膜等，所述捕獲膜的T線或者含有蛋白捕獲抗體(雙抗體夾心法)，或者含鏈親和素(標(biāo)記物墊同時(shí)含光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體和生物素標(biāo)記的目標(biāo)蛋白捕獲抗體)，或者含有目標(biāo)蛋白(雙抗原競(jìng)爭(zhēng)法)，C線或者含有能識(shí)別蛋白檢測(cè)抗體的二抗，或者含生物素標(biāo)記的牛血清白蛋白或卵清蛋白(標(biāo)記物墊含鏈親和素)，或者含羊抗兔抗體(標(biāo)記物墊含兔抗體)。
[0027]用免疫層析技術(shù)檢測(cè)樣品中蛋白的方法，如圖1示，當(dāng)樣品溶液滴加到試紙條的樣品墊I上后，液體將沿水平箭頭方向移動(dòng)，先到達(dá)標(biāo)記物墊2，樣品中的目標(biāo)蛋白與標(biāo)記物墊2中光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體結(jié)合形成‘蛋白-蛋白檢測(cè)抗體-光致發(fā)光微球’復(fù)合物，當(dāng)溶液繼續(xù)移動(dòng)到達(dá)捕獲膜的T線時(shí)，溶液中的‘蛋白-蛋白檢測(cè)抗體?光致發(fā)光微球’將與此處的蛋白捕獲抗體形成‘蛋白捕獲抗體-蛋白-蛋白檢測(cè)抗體?光致發(fā)光微球’復(fù)合物并被固定在T線上，隨后用檢測(cè)儀來(lái)檢測(cè)T線上的熒光/磷光信號(hào)，并與信號(hào)強(qiáng)度-蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出待測(cè)樣品中蛋白的濃度。
[0028]由于T線處蛋白捕獲抗體捕獲的光致發(fā)光微球包含有很多光致發(fā)光分子(熒光分子或磷光分子)，所以T線處可以檢測(cè)到很強(qiáng)的光信號(hào)，從而使這種免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的方法有很高的靈敏度。當(dāng)光致發(fā)光分子是時(shí)間分辨熒光復(fù)合物或磷光復(fù)合物時(shí)，由于發(fā)射光有數(shù)百微秒到數(shù)毫秒的熒光壽命，可以在激發(fā)光撤掉后數(shù)十微秒到數(shù)百微秒檢測(cè)發(fā)射光信號(hào)，此時(shí)激發(fā)光和背景熒光都已經(jīng)消失，只有光致發(fā)光分子特異的熒光或磷光信號(hào)，所以檢測(cè)的特異性和靈敏度都大大提高。
[0029]本發(fā)明中的‘蛋白’指蛋白標(biāo)志物，包括但不限于:心肌脂肪酸結(jié)合蛋白、心肌肌鈣蛋白、絨毛膜促性腺激素、尿白蛋白、糖化血紅蛋白、生長(zhǎng)激素、金黃色葡萄球菌腸毒素蛋白、流感病毒蛋白、艾滋病毒蛋白、乙肝病毒蛋白、丙肝病毒蛋白、以及梅毒螺旋體蛋白等。
[0030]本發(fā)明中的‘微球’可以是二氧化硅微球、聚苯乙烯微球或其他高分子微球，微球直徑在1nm到10 μ m之間,其表面可帶有羧基、氨基或酮基等官能團(tuán)。
[0031]本發(fā)明中的‘光致發(fā)光微球’指球體中包埋了光致發(fā)光分子的微球。所述‘光致發(fā)光分子’包括熒光素、羅丹明等熒光分子或其衍生物、銪復(fù)合物、釤復(fù)合物、鋱復(fù)合物等鑭系元素復(fù)合物熒光分子以及鉬復(fù)合物、鈀復(fù)合物等磷光分子，其中銪復(fù)合物為銪與配體螯合后再與其他有機(jī)分子形成的復(fù)合物，鉬復(fù)合物為鉬與配體(包括卟啉、葉吩、吡啶及其衍生物)螯合形成的復(fù)合物，其中銪復(fù)合物又為時(shí)間分辨熒光復(fù)合物，鉬復(fù)合物又為磷光復(fù)合物。
[0032]本發(fā)明中的‘光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體’指跟光致發(fā)光微球耦聯(lián)的蛋白檢測(cè)抗體。更具體的，蛋白檢測(cè)抗體為用目標(biāo)蛋白免疫動(dòng)物后動(dòng)物血液中出現(xiàn)的能跟目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的抗體。
[0033]本發(fā)明中的‘捕獲探針’指結(jié)合在試紙條捕獲膜上的蛋白捕獲抗體(雙抗體夾心法)、鏈親和素(標(biāo)記物墊同時(shí)含光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體和生物素標(biāo)記的蛋白捕獲抗體)或目標(biāo)蛋白(雙抗原競(jìng)爭(zhēng)法)。更具體的，蛋白捕獲抗體為用目標(biāo)蛋白免疫動(dòng)物后動(dòng)物血液中出現(xiàn)的能跟目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的抗體，但是蛋白捕獲抗體與蛋白檢測(cè)抗體識(shí)別目標(biāo)蛋白的不同部位，兩個(gè)抗體分別識(shí)別并結(jié)合抗原后靠雙抗體夾心法識(shí)別目標(biāo)蛋白。
[0034]本發(fā)明中試紙條捕獲膜上的‘T線’指捕獲探針?biāo)诘膮^(qū)域，也就是光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后再被固定的蛋白捕獲抗體捕獲(雙抗體夾心法)的區(qū)域，或者是鏈親和素與生物素標(biāo)記的蛋白捕獲抗體結(jié)合的區(qū)域(光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體和生物素標(biāo)記的蛋白捕獲抗體夾心識(shí)別目標(biāo)蛋白)，或者是未結(jié)合目標(biāo)蛋白的自由的光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體與固定的目標(biāo)蛋白結(jié)合的區(qū)域(雙抗原競(jìng)爭(zhēng)法)。
[0035]本發(fā)明中試紙條捕獲膜上的‘C線’指光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體與其二抗結(jié)合的區(qū)域，或者是指含有其他抗原或抗體(羊抗兔抗體)與光致發(fā)光微球標(biāo)記的陽(yáng)性對(duì)照結(jié)合的區(qū)域。
[0036]因?yàn)檫@些蛋白標(biāo)志物至關(guān)重要，所以需要在其濃度很低時(shí)盡早快速的檢測(cè)，早作診斷，早知結(jié)果，以便及時(shí)采取補(bǔ)救措施或治療手段。而本發(fā)明可以通過(guò)免疫層析法方便、簡(jiǎn)單、快速并且高靈敏度地檢測(cè)樣品中的蛋白，避免疾病進(jìn)一步發(fā)展或食物中毒對(duì)身體產(chǎn)生嚴(yán)重傷害。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0037]根據(jù)一個(gè)或多個(gè)不同的實(shí)施方式，參考下列附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)描述。附圖僅為示例目的而提供，并且僅描述本發(fā)明典型或示例性的實(shí)施方式。這些附圖被提供以促進(jìn)讀者對(duì)本發(fā)明的理解，將不被認(rèn)為限制本發(fā)明的寬度、范圍或應(yīng)用性。
[0038]圖1是本發(fā)明中用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條示意圖。圖1中，附圖標(biāo)記1-7說(shuō)明:1_樣品墊；2_標(biāo)記物墊；3_捕獲膜；4_吸水墊；5_支撐底板；6-C線；7-T線。
[0039]圖2是實(shí)施例中用免疫層析法所得熒光強(qiáng)度與絨毛膜促性腺激素濃度的關(guān)系曲線。
[0040]
【具體實(shí)施方式】
[0041]實(shí)施例1，用免疫層析技術(shù)檢測(cè)樣品中絨毛膜促性腺激素的試紙條的制備
圖1所示的用免疫層析技術(shù)檢測(cè)絨毛膜促性腺激素(HCG)的試紙條準(zhǔn)備方法如下:
I，羧基修飾的含銪復(fù)合物的S12微球由長(zhǎng)春志昂生物科技有限公司提供，HCG抗體以及HCG抗原由芬蘭Hytest公司提供。
[0042]2，熒光微球與HCG抗體的耦聯(lián)
將200 μ I 20mM PBS, pH7.4，固含量1%的熒光微球與6毫克碳化二亞胺混合，室溫振蕩30分鐘，12，OOOrpm離心10分鐘，用硼酸鹽緩沖液清洗2次，將活化的熒光微球重懸于300 μ I硼酸鹽緩沖液中。在微球懸液中加入200 μ I lmg/ml的HCG抗體，在室溫下振蕩反應(yīng)2.5小時(shí)。將反應(yīng)后的溶液于12，OOOrpm離心10分鐘，加入400 μ I 0.25Μ乙醇胺在室溫再振蕩30分鐘。將反應(yīng)后的溶液離心后再用PBS緩沖液洗2次。離心沉淀后加入300 μ I2mg/ml的BSA重懸，常溫振蕩30分鐘后用PBS洗3次，再用200 μ I 50mM PBS, pH7.4, 0.1%Tween 20, 5%蔗糖重懸熒光微球標(biāo)記的HCG激素抗體。
[0043]3，熒光微球標(biāo)記的HCG檢測(cè)抗體處理標(biāo)記物墊，HCG捕獲抗體以及羊抗鼠抗體(美國(guó)Sigma公司)處理捕獲膜(此處為NC膜)
將熒光微球標(biāo)記的HCG檢測(cè)抗體溶液用B1Dot噴膜儀噴到標(biāo)記物墊(Millipore公司)上，噴速為10 μ Ι/cm。將lmg/ml HCG捕獲抗體以及l(fā)mg/ml羊抗鼠抗體用B1Dot公司噴膜儀劃線NC膜(Millipore公司)，劃線速度為3 μ Ι/cm。然后將噴好的標(biāo)記物墊和NC膜置于37°C恒溫箱中干燥I小時(shí)，再將標(biāo)記物墊上含有熒光微球標(biāo)記的HCG抗體的部分切割下來(lái)，得到5mm寬，30cm長(zhǎng)的條帶。
[0044]4，試紙條大卡的組裝與切割
按照?qǐng)D1中試紙條的結(jié)構(gòu)所示，將NC膜首先粘貼在支撐底板(Millipore公司)上，在靠T線一側(cè)先后粘貼標(biāo)記物墊以及樣品墊(Millipore公司)，在靠C線一側(cè)粘貼吸水墊(Millipore公司),然后用B1Dot公司切割機(jī)切割成5mm寬的試紙條,于招箔袋中封閉保存?zhèn)溆谩?br>
[0045]實(shí)施例2，用免疫層析法檢測(cè)樣品中的HCG
將 100 μ I 含 OmIU/ml，lmIU/ml, 2mIU/ml, 5mIU/ml, lOmlU/ml, 20mIU/ml,lOOmlU/ml, 200mIU/ml, lOOOmlU/ml的HCG溶液分別滴加到熒光免疫層析試紙條上，反應(yīng)15分鐘后用熒光檢測(cè)儀(上海海躍塑模有限公司)檢測(cè)熒光信號(hào)，然后用熒光強(qiáng)度相對(duì)HCG濃度做圖得熒光強(qiáng)度對(duì)HCG濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。
[0046]將100 μ I含HCG的人尿液滴加到熒光免疫層析試紙條的樣品墊上，反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)熒光信號(hào)，將熒光強(qiáng)度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得HCG濃度為35mIU/ml，與用ELISA法檢測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明熒光免疫層析定量檢測(cè)HCG的方法是可靠的。
[0047]實(shí)施例3，用免疫層析法檢測(cè)樣品中的尿白蛋白
檢測(cè)尿白蛋白的試紙條制備方法同實(shí)施例1，其中的HCG檢測(cè)抗體更換為白蛋白檢測(cè)抗體，HCG捕獲抗體更換為白蛋白捕獲抗體，HCG抗原更換為白蛋白抗原，白蛋白的抗原和抗體同樣由芬蘭Hytest公司提供。
[0048]將100 μ I 含 Omg/L, lmg/L, 2mg/L, 10mg/L, 20mg/L, lOOmg/L, 200mg/L,lOOOmg/L的白蛋白溶液分別滴加到熒光免疫層析試紙條上，反應(yīng)15分鐘后用熒光檢測(cè)儀(上海海躍塑模有限公司)檢測(cè)熒光信號(hào)，然后用熒光強(qiáng)度相對(duì)白蛋白濃度做圖得熒光強(qiáng)度對(duì)白蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0049]取100 μ I含白蛋白的人尿液滴加到熒光免疫層析試紙條的樣品墊上，反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)熒光信號(hào)，將熒光強(qiáng)度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得尿白蛋白濃度為2.5mg/L，與用ELISA法檢測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明熒光免疫層析定量檢測(cè)尿白蛋白的方法是可靠的。
[0050]實(shí)施例4，用免疫層析法檢測(cè)樣品中的糖化血紅蛋白
檢測(cè)糖化血紅蛋白的試紙條制備方法同實(shí)施例1，其中的HCG檢測(cè)抗體更換為血紅蛋白檢測(cè)抗體，HCG捕獲抗體更換為糖化血紅蛋白捕獲抗體，HCG抗原更換為糖化血紅蛋白抗原，糖化血紅蛋白的抗原和抗體也由芬蘭Hytest公司提供。
[0051]將10yl 含 Og/L，0.lg/L, 0.2g/L, lg/L, 2g/L, 5g/L, lOg/L, 20g/L 的糖化血紅蛋白溶液分別滴加到熒光免疫層析試紙條上，反應(yīng)15分鐘后用熒光檢測(cè)儀(上海海躍塑模有限公司)檢測(cè)熒光信號(hào)，然后用熒光強(qiáng)度相對(duì)糖化血紅蛋白濃度做圖得熒光強(qiáng)度對(duì)糖化血紅蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0052]取100 μ I含糖化血紅蛋白的人血液滴加到熒光免疫層析試紙條的樣品墊上，反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)熒光信號(hào)，將熒光強(qiáng)度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得糖化血紅蛋白濃度為4.8g/L，經(jīng)轉(zhuǎn)換為40mmOl/mOl，與用ELISA法檢測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明熒光免疫層析定量檢測(cè)糖化血紅蛋白的方法是可靠的。
[0053]實(shí)施例5，用免疫層析檢測(cè)樣品中生長(zhǎng)激素的試紙條的制備用免疫層析檢測(cè)生長(zhǎng)激素的試紙條準(zhǔn)備方法如下:
羧基修飾的含鉬復(fù)合物的聚苯乙烯微球由長(zhǎng)春志昂生物科技有限公司提供，生長(zhǎng)激素抗體以及生長(zhǎng)激素抗原由英國(guó)Abcam公司提供。
[0054]生長(zhǎng)激素抗體與磷光微球的耦聯(lián)、標(biāo)記物墊及捕獲膜的處理、試紙條的組裝同實(shí)施例I。
[0055]實(shí)施例6，用免疫層析法檢測(cè)樣品中的生長(zhǎng)激素
將 100 μ I 含 O μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L, 10 μ g/L, 50 μ g/L, 100 μ g/L, 500 μ g/L的生長(zhǎng)激素溶液分別滴加到磷光免疫層析試紙條上，反應(yīng)15分鐘后用檢測(cè)儀(上海海躍塑模有限公司)檢測(cè)磷光信號(hào)，然后用磷光強(qiáng)度相對(duì)生長(zhǎng)激素濃度做圖得磷光強(qiáng)度對(duì)生長(zhǎng)激素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0056]取100 μ I含重組牛生長(zhǎng)激素的牛奶滴加到磷光免疫層析試紙條的樣品墊上，反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)磷光信號(hào)，將磷光強(qiáng)度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得生長(zhǎng)激素濃度為15μ g/L，與用ELISA法檢測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明磷光免疫層析定量檢測(cè)生長(zhǎng)激素的方法是可靠的。
[0057]實(shí)施例7，用免疫層析法檢測(cè)樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素
檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素(A型)的試紙條制備方法同實(shí)施例5，其中的生長(zhǎng)激素檢測(cè)抗體更換為金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)抗體，生長(zhǎng)激素捕獲抗體更換為金黃色葡萄球菌腸毒素捕獲抗體，生長(zhǎng)激素抗原更換為金黃色葡萄球菌腸毒素抗原，金黃色葡萄球菌腸毒素的抗原和抗體由上海研謹(jǐn)生物科技有限公司提供。
[0058]將100 μ I 含 O μ g/L, I μ g/L, 2 μ g/L, 10 μ g/L, 20 μ g/L, 100 μ g/L,200 μ g/L, 1000 μ g/L的金黃色葡萄球菌腸毒素溶液分別滴加到熒光免疫層析試紙條上，反應(yīng)15分鐘后用檢測(cè)儀(上海海躍塑模有限公司)檢測(cè)磷光信號(hào)，然后用磷光強(qiáng)度相對(duì)金黃色葡萄球菌腸毒素濃度做圖得磷光強(qiáng)度對(duì)金黃色葡萄球菌腸毒素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0059]取100 μ I含金黃色葡萄球菌腸毒素的牛奶滴加到熒光免疫層析試紙條的樣品墊上，反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)磷光信號(hào)，將磷光強(qiáng)度結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得金黃色葡萄球菌腸毒素濃度為15 μ g/L,與用ELISA法檢測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明磷光免疫層析定量檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素的方法是可靠的。
[0060]雖然本申請(qǐng)?jiān)敿?xì)描述了具體的實(shí)施例，但本申請(qǐng)不限于這些實(shí)施例，相反，其意圖涵蓋包括在實(shí)施例的精神和范圍內(nèi)的各種修改和等同方案，在一些具體情況下，可以缺少和增加某個(gè)或某些技術(shù)特征而不脫離本發(fā)明的精神和范圍，本申請(qǐng)的范圍僅由權(quán)利要求書限定。
【權(quán)利要求】
1.一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的試紙條，包括標(biāo)記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述標(biāo)記物墊含有光致發(fā)光微球標(biāo)記的蛋白檢測(cè)抗體，所述捕獲膜含有捕獲探針。
2.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述蛋白是絨毛膜促性腺激素。
3.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述蛋白是尿白蛋白。
4.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述蛋白是糖化血紅蛋白。
5.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述蛋白是生長(zhǎng)激素。
6.如權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述蛋白是金黃色葡萄球菌腸毒素。
7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的試紙條,其特征在于,所述光致發(fā)光微球是突光微球。
8.如權(quán)利要求7所述的試紙條,其特征在于,所述突光微球是時(shí)間分辨突光微球。
9.如權(quán)利要求8所述的試紙條，其特征在于，所述時(shí)間分辨熒光微球是含銪復(fù)合物的突光微球。
10.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的試紙條,其特征在于,所述光致發(fā)光微球是磷光微球。
11.如權(quán)利要求10所述的試紙條，其特征在于，所述磷光微球是含鉬復(fù)合物的磷光微球。
12.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是二氧化硅微球。
13.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于，所述光致發(fā)光微球是聚苯乙烯微球。
14.一種用免疫層析技術(shù)檢測(cè)蛋白的方法，其特征在于，在權(quán)利要求1所述的試紙條樣品墊上滴加含待測(cè)蛋白的樣品，反應(yīng)后檢測(cè)光信號(hào)。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104345148SQ201310319220
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月28日
【發(fā)明者】楊揮 申請(qǐng)人:嘉興朝云帆生物科技有限公司