基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，包括以下步驟：1）將熱加工食品利用甲酸溶液進行提取丙烯酰胺的前處理，得待測樣品；2）功能化量子點的制備，得NAS-QDs復合物溶液；3）標準加入法檢測薯片中丙烯酰胺含量：向待測樣品中添加不同濃度的丙烯酰胺標準品溶液，從而分別獲得不同的待檢測溶液；取450μL的NAS-QDs復合物溶液，加入5μL100mmol?L-1光引發(fā)劑TPO，加入待檢測溶液50μL，紫外光照射后，在365nm激發(fā)光下檢測600nm處熒光強度；繪制熒光強度與所添加丙烯酰胺標準品濃度的響應曲線，最終得熱加工食品丙烯酰胺的含量。
【專利說明】基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品快速檢測領(lǐng)域，涉及對熱加工食品中丙烯酰胺的檢測，尤其涉及一種基于納米材料的熒光定量檢測食品中的丙烯酰胺的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]丙烯酰胺(Acrylamide，AM)是一種白色無味的晶狀固體，分子量71.09，分子式為CH2CHCOnH2，沸點125 °C，熔點84.8 °C，易溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、二甲醚和三氯甲烷等極性溶劑，在酸中穩(wěn)定，而在堿中易分解，對光線敏感，暴露于紫外線時較易發(fā)生聚合。丙烯酰胺是中等毒性物質(zhì)，動物實驗表明，小鼠、兔、大鼠等的丙烯酰胺經(jīng)口半數(shù)致死量LD5tl為100-150mg/kg。丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，與DNA結(jié)合導致染色體異常，同時還具有潛在的致癌性。1994年，國際癌癥機構(gòu)(IARC)將丙烯酰胺列為“人類可能致癌物”，即2A類物質(zhì)。
[0003]2002年4月，瑞典國家食品管理局(NFA)和斯德哥爾摩大學的科學家經(jīng)研究首次發(fā)現(xiàn)富含淀粉的食物在經(jīng)高溫油炸或燒烤時能生成具有神經(jīng)毒性作用的潛在致癌物——丙烯酰胺，且含量遠遠大于飲水中規(guī)定限量IOy g/kg (美國環(huán)保局，EPA)。2005年2月，食品添加劑聯(lián)合委員會(JECAFA)第64次會議對食品中的丙烯酰胺進行了第一次評估。通過對24個國家提供的食品中丙烯酰胺污染數(shù)據(jù)分析，人的平均每天攝入量為l.0yg/kg bw,最高攝入量為4.0 μ g/kg bw ;兒童攝入量是成人的2-3倍。在所調(diào)查的食品中，丙烯酰胺含量較高的三類食品是土豆制品、咖啡及其類似制品和早餐谷物類食品。根據(jù)丙烯酰胺平均攝入暴露邊界(margin of exposure, M0E)和高攝入的暴露邊界，JECFA發(fā)出其可能造成人類健康損害的警告，并提出應盡快采取適當措施以降低食品中丙烯酰胺的含量。
[0004]研究表明，由天冬酰胺和還原糖在高溫加熱過程中經(jīng)美拉德(MaiIIardreaction)反應是丙烯酰胺的主要形成途徑。目前，研究人員主要通過以下幾個方面控制食品中丙烯酰胺:第一，改變反應條件抑制一些關(guān)鍵中間產(chǎn)物的形成或轉(zhuǎn)化；第二，在反應的最后階段控制條件，使其向有利于其它小分子物質(zhì)形成的方向轉(zhuǎn)化；第三，控制美拉德反應中的關(guān)鍵步驟。丙烯酰胺檢測的金標方法包括氣相色譜、高效液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用。這些傳統(tǒng)的檢測方法靈敏度高、特異性好，但同時檢測成本高、需要昂貴的精密儀器和專業(yè)的操作，從而限制了這些方法的應用范圍。
[0005]隨著技術(shù)的發(fā)展，一些快速檢測方法被陸續(xù)提出用于熱加工食品中丙烯酰胺的快速檢測，具體如下:
[0006](I)酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)
[0007]依靠抗原抗體特異性反應以及高效的酶催化反應，特異性好、靈敏度高。但是由于丙烯酰胺是小分子物質(zhì)，缺少強的抗原決定簇及免疫原性，需要與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備成完全抗原后，才能進行免疫反應，增加了抗體篩選的成本及周期。
[0008](2)電化學生物傳感器(electrochemical biosensers)
[0009]丙烯酰胺可以和血紅蛋白(Hb) N-末端纈氨酸的a -NH2反應生成加成物，改變Hb構(gòu)型，增加了氧化還原中心到電極表面的空間位阻，從而改變固定在電極表面上Hb的電化學特性。加入納米材料增敏后，根據(jù)電流變化，檢測丙烯酰胺含量。此方法檢測線性范圍廣，檢測限低；但是該方法的缺點是所用工作電極不可重復利用。
[0010](3)機器視覺法(computer vision)
[0011]依據(jù)食品樣品(如薯片)表面顏色與丙烯酰胺含量之間的關(guān)系，預測食品中丙烯酰胺的含量。此方法簡單易行，可實現(xiàn)在線檢測，但是準確性較差。
[0012]量子點:英文名為quantum dots (QDs),亦稱半導體納米晶(semiconductornanocrystals),是一種零維納米材料,尺寸在l_10nm,主要由I1-VI族元素(如CdSe, CdTe,ZnSe等)或II1- V族元素(如InP，InAs等)組成。
[0013]量子點具有量子尺寸效應，不同大小或不同材料的量子點可以產(chǎn)生不同顏色的熒光，多種顏色不同的量子點可以被單一波長的光激發(fā)。與傳統(tǒng)的有機熒光染料相比，量子點熒光產(chǎn)率高，熒光壽命長，具有較強的抗光漂白的性能，吸收光譜范圍寬，發(fā)射光譜窄而對稱，斯托克斯位移大，能夠有效避免由于光譜重疊而產(chǎn)生的信號干擾。將量子點表面進行功能化修飾后，可用于無機離子、小分子，生物大分子檢測以及活體細胞成像中。研究發(fā)現(xiàn)，當量子點之間的距離拉近時，其會發(fā)生自淬滅而導致熒光強度下降；而將量子點之間的距離拉遠后，起熒光強度恢復。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，該方法操作簡單、成本低、靈敏度高，檢測限可達到μ g/kg級。
[0015]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，包括以下步驟:
[0016]I)、熱加工食品前處理:
[0017]將熱加工食品利用甲酸溶液進行提取丙烯酰胺的前處理，得待測樣品；
[0018]2)、功能化量子點的制備，包括以下步驟:
[0019]①、將N-羥基琥珀酰亞胺丙烯酸酯(NAS)溶于二甲基亞砜(DMSO)中，渦旋混勻至呈澄清溶液，得NAS/DMS0溶液；所述NAS在NAS/DMS0溶液中的濃度為90?IlOmmol L—1(較佳為 IOOmmol L—1)；
[0020]②、在避光條件下，將水溶性氨基CdSe/ZnS量子點用PBS緩沖液(pH=8.0)進行稀釋，得量子點(即水溶性氨基CdSe/ZnS量子點)終濃度為38?42nmol L—1 (較佳為40nmolL—1)的量子點稀釋液；
[0021]備注說明:一般而言，市購的水溶性氨基CdSe/ZnS量子點產(chǎn)品中量子點濃度為8 u mo I L 1左右；上述稀釋制備時注意避光。
[0022]③、按照步驟①中的NAS:步驟②的水溶性氨基CdSe/ZnS量子點為1:9的體積比，向量子點稀釋液(即稀釋后的量子點溶液)中滴加NAS/DMS0溶液；暗處反應1.8?2.2h(較佳為2h)；
[0023]備注說明:整個暗反應過程中伴有緩慢的混勻，即水平混勻，目的是使液體運動起來，更易發(fā)生反應；
[0024]④、將步驟③反應后所得物離心，以去除多余的未反應的NAS ;將離心后的沉淀物復溶于DMS0:PBS (pH=8.0, v/v=l:l)混合液中，得NAS-QDs復合物溶液；用于檢測體系；[0025]所述DMS0:PBS (pH=8.0, v/v=l:1)混合液的體積用量=步驟③反應后所得物的體積(即，離心前的步驟③反應后所得物的體積);
[0026]備注說明:離心后，量子點位于離心管底部，呈現(xiàn)橙紅色的小塊，上清液則是多余的未反應的NAS ；
[0027]DMSO:PBS (pH=8.0, v/v=l:1)混合液簡稱為 DMS0/PBS 混合液，DMS0/PBS 混合液由DMSO =PBS=1:1的體積比(v/v)混合而得，PBS為pH=8.0的PBS緩沖液；
[0028]3 )、標準加入法檢測薯片中丙烯酰胺含量
[0029]向待測樣品中按照1% (v/v)的用量比添加不同濃度的丙烯酰胺標準品溶液，從而分別獲得不同的待檢測溶液，
[0030]對每種待檢測溶液分別進行如下操作:
[0031]取450μ L的NAS-QDs復合物溶液，加入5μ LlOOmmol 1光引發(fā)劑ΤΡ0，混合均勻后，加入待檢測溶液50 μ L，紫外光(激發(fā)波長為365nm，光強為lOOOuw/cm2)條件下照射20min后,在365nm激發(fā)光下檢測600nm處突光強度；
[0032]繪制熒光強度與所添加丙烯酰胺標準品濃度的響應曲線，經(jīng)線性回歸，得到關(guān)于熒光強度I與所添加丙烯酰胺標準品濃度X的線性方程；
[0033]令y=0，X的絕對值即為待測樣品中丙烯酰胺的含量，最終得熱加工食品丙烯酰胺的含量。
[0034]作為本發(fā)明的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法的改進:
[0035]步驟3)中不同濃度的丙烯酰胺標準品溶液分別為以下5種濃度的丙烯酰胺標準品溶液:
[0036]0、355、710、1066、1422μ g L'
[0037]作為本發(fā)明的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法的進一步改進:
[0038]步驟I)具體為:
[0039]將熱加工食品粉碎后加入體積濃度為0.25-0.35%的甲酸溶液，渦旋混勻后，離心，所得的上清液為樣品提取溶液；
[0040]采用固相萃·取小柱將樣品提取溶液進行純化，再經(jīng)濃縮處理，得待測樣品。
[0041 ] 作為本發(fā)明的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法的進一步改進:
[0042]步驟2)的④中的離心為:在100000rpm、4°C下離心2h，并重復三次。
[0043]熱加工食品前處理具體可按照如下內(nèi)容進行:
[0044]熱加工食品經(jīng)粉碎機充分粉碎成粉末狀，稱取1±0.1g熱加工食品粉末，加入IOmL0.3% (體積％)甲酸溶液，潤旋混勻Imin后，在10000rpm、4°C條件下離心IOmin,離心后分成3層:位于最上層的白色油脂層，位于中間層的上清液，以及位于底層的沉淀。
[0045]棄去白色油脂層，取上清液。重復一次上述提取步驟(即，以沉淀代替熱加工食品粉末重復上述處理過程)，合并兩次所得的上清液(共計約20ml )，作為樣品提取溶液。
[0046]采用固相萃取小柱將樣品進行純化。Oasis HLB固相萃取小柱先分別用3mL甲醇和3mL超純水活化、平衡后，加入3mL的樣品提取溶液，再用6mL超純水洗脫(流速約為2-3s/滴)，棄去前8滴洗脫液，收集后面全部的洗脫液。將洗脫液用氮吹儀(約40°C )濃縮至0.5mL作為待測樣品，以備檢測。
[0047]備注說明:0asis HLB固相萃取小柱即Waters Oasis HLB固相萃取小柱,例如可購自北京金歐亞科技發(fā)展有限公司。
[0048]為了確認本發(fā)明所設(shè)定的檢測體系的正確性，發(fā)明人進行了如下的實驗:
[0049]①、取450 μ L的NAS-QDs復合物溶液中加入5 μ L光引發(fā)劑TPO并混合均勻；
[0050]②、分別加入以下濃度的丙烯酰胺標準溶液50 μ L(與上面NAS_QDs450 μ L合起來共 500 μ L):
[0051]3.5Χ10'7.1Χ10'3.5Χ10-4、7.1Χ10-4、1.7Χ10'7.1Χ10'3.5X10'
7.1Χ10_2、7.1 X 10'3.5g -1 ;紫外光條件下照射20min后，加入96孔板進行熒光檢測，激發(fā)光為365nm，發(fā)射光譜范圍為500_700nm ；
[0052]③、通過比較有無丙烯酰胺體系的熒光強度，建立線性范圍，確定檢測限。如圖3所示。
[0053]通過圖3，我們可以得知:線性范圍在3.5X10_5至3.5g Λ檢測限為3.5 X 10_5gL'
[0054]發(fā)明人根據(jù)量子點特性及丙烯酰胺在紫外條件下易發(fā)生聚合反應的原理，設(shè)計本發(fā)明的檢測方法。本·發(fā)明利用N-羥基琥珀酰亞胺丙烯酸酯(NAS)含有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)基團，可活化水溶性氨基量子點上的氨基，從而使量子點表面修飾上丙烯酰胺的乙烯鍵和酰胺鍵。用經(jīng)修飾后的功能化量子點檢測丙烯酰胺含量。反應體系為在光引發(fā)劑TPO存在下，紫外照射20min后檢測熒光變化。當反應體系中含有丙烯酰胺時，丙烯酰胺與量子點上的乙烯鍵共同參與聚合反應，從而擴大量子點之間的距離，宏觀上表現(xiàn)為熒光強度增強；而當反應體系中不存在丙烯酰胺時，只有量子點表面上的乙烯鍵發(fā)生聚合反應，使得量子點本身之間的距離縮短，宏觀上表現(xiàn)為熒光強度的減弱。通過比較紫外照射之后熒光強度的變化，就能定量檢測丙烯酰胺的含量。
[0055]備注說明:標準加入法(Standard addition method, MSA):是儀器分析中常用的一種用于檢測復雜基質(zhì)中未知樣品含量的方法，該方法可最大程度的減小檢測體系中基質(zhì)的干擾。
[0056]本發(fā)明方法的檢測對象為:本發(fā)明針對食品(特別是熱加工食品)中的致癌物丙烯酰胺進行檢測。檢測范圍:本發(fā)明主要應用于薯片、曲奇等食品。
[0057]采用本發(fā)明的方法檢測熱加工食品中的致癌物丙烯酰胺，具有如下優(yōu)點:
[0058]1、原理新穎，區(qū)別于傳統(tǒng)的檢測方法，此發(fā)明首次采用光學傳感器對丙烯酰胺進行檢測，檢測結(jié)果直觀；
[0059]2、檢測時間短，從加樣到檢測，只需不到30分鐘的時間；
[0060]3、檢測成本低，與標準的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)相比，單樣檢測成本大大降低；
[0061]4、該方法可用于現(xiàn)場快速檢測，為檢測熱加工食品中丙烯酰胺的現(xiàn)場檢測人員提供初步的測定結(jié)果。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0062]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。
[0063]圖1是基于功能化量子點的熒光法檢測丙烯酰胺原理示意圖。[0064]圖2是功能化量子點制備前后熒光光譜圖和紅外光譜圖。
[0065]圖2 (A)代表QDs與NAS-QDs復合物熒光強度對比圖，其中激發(fā)波長為365nm，最大發(fā)射波長為600nm。
[0066]圖2 (B)代表NAS、QDs與NAS-QDs復合物紅外光譜圖，a表示NAS，b表示QDs，c表示NAS-QDs復合物。
[0067]圖3是熒光法檢測丙烯酰胺的標準曲線圖，其中橫坐標表示丙烯酰胺標準品對數(shù)值，縱坐標表示紫外照射前后熒光強度差值。
[0068]a 到 k 表示檢測體系中加入 3.5X10'7.1 X 10'3.5X10'7.1 X 10'1.7X10'7.1X10_3、3.5X10_2、7.1 ΧΙΟ—2、7.1XIO'3.5g L—1不同濃度丙烯酰胺標準溶液，在紫外光
照射下量子點熒光強度的變化。
【具體實施方式】
[0069]實施例1、一種基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，以市售薯片為待測的熱加工食品，依次進行以下步驟:
[0070]I)、薯片樣品前處理:
[0071]薯片經(jīng)粉碎機充分粉碎成粉末狀，于_20°C儲存?zhèn)溆?。稱取1±0.1g薯片粉末于5OmL離心管中，加入1OmL0.3% (體積％)甲酸溶液，潤旋混勻Imin后,在10000rpm、4°C條件下離心lOmin，離心后分成3層:位于最上層的白色油脂層，位于中間層的上清液，以及位于底層的沉淀。
[0072]棄去白色油脂層，取上清液。重復一次上述提取步驟(即，以沉淀代替薯片粉末重復上述處理過程)，合并兩次所得的上清液(共計約20ml)，作為樣品提取溶液。
[0073]采用固相萃取小柱將樣品進行純化。Oasis HLB固相萃取小柱先分別用3mL甲醇和3mL超純水活化、平衡后，加入3mL的樣品提取溶液，再用6mL超純水洗脫(流速約為
2-3s/滴)，棄去前8滴洗脫液，收集后面全部的洗脫液。將洗脫液用氮吹儀(約40°C )濃縮至0.5mL作為待測樣品，以備檢測。
[0074]備注說明:0asis HLB固相萃取小柱即Waters Oasis HLB固相萃取小柱,例如可購自北京金歐亞科技發(fā)展有限公司。
[0075]2)、功能化量子點制備
[0076]①、稱取N-羥基琥珀酰亞胺丙烯酸酯(NAS)溶于DMSO (二甲基亞砜)中，渦旋混勻至澄清溶液，得NAS/DMS0溶液；NAS在NAS/DMS0溶液中的濃度為IOOmmol L—1 ;現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0077]②、在避光條件下，將水溶性氨基CdSe/ZnS量子點(量子點濃度為8 μ mo I-1)用PBS緩沖液(ρΗ=8.0)按照1:199的體積比混合(即，稀釋200倍)；得稀釋后的CdSe/ZnS量子點(即，的量子點稀釋液，量子點終濃度為40nmol L—1)。
[0078]③、按照步驟①中的NAS:步驟②的水溶性氨基CdSe/ZnS量子點=1:9的體積比，向稀釋后的CdSe/ZnS量子點中滴加NAS/DMS0溶液；滴加完畢(約I分鐘)后置于暗處反應為2h (反應過程中需緩慢混勻)；
[0079]④、將步驟③反應后所得物在100000rpm、4°C下離心2h，并重復三次，以去除多余的未反應的NAS(備注說明:該未反應的NAS位于上清液中),得離心后的沉淀物(即量子點)；將離心后的沉淀物復溶于DMS0:PBS (pH=8.0, v/v=l:1)混合液中，得NAS-QDs復合物溶液；用于檢測體系。
[0080] 所述DMS0:PBS (pH=8.0, v/v=l:1)混合液的體積用量=步驟③反應后所得物的體積(即，離心前的步驟③反應后所得物的體積)。
[0081 ] 3 )、標準加入法檢測薯片中丙烯酰胺含量
[0082]向待測樣品中按照占待測樣品1% (v/v)的用量比分別添加下述溶液中的一種:丙烯酰胺濃度為0,355,710,1066811(1142248 171的丙烯酰胺標準品溶液(以水為溶劑，配制而成)從而分別得到5種待檢測溶液，用于檢測。
[0083]對上述5種待檢測溶液分別進行如下操作:
[0084]取450μ L的NAS-QDs復合物溶液，加入5μ LlOOmmol -1光引發(fā)劑ΤΡ0，混合均勻后，加入待檢測溶液50 μ L，紫外光(激發(fā)波長為365nm，光強為lOOOuw/cm2)條件下照射20min后,在365nm激發(fā)光下檢測600nm處突光強度。
[0085]繪制熒光強度與所添加丙烯酰胺標準品濃度的響應曲線，經(jīng)線性回歸，得線性方程為y=l.8888x+717.66 (r2=0.98)，令y=0，x的絕對值即為待測樣品中丙烯酰胺的含量。計算所得，待測樣品中丙烯酰胺含量為379.96yg L_\因此，薯片中丙烯酰胺含量為1.267mgkg'
[0086]由于1±0.1g薯片粉末對應得到的是20ml的樣品提取溶液，而每3mL的樣品提取溶液對應得到的是0.5mL待測樣品；因此，379.96 μ g Ι + 6Χ 20=1.267 μ g g—1，即=1.267mg kg—1。
[0087]驗證試驗:將實施例1所述的薯片按照LC-MS/MS法進行檢測，丙烯酰胺含量為
1.356mg kg_\與實施例1所得結(jié)論基本相一致。
[0088]對比例1-1、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0089]將NAS 在 NAS/DMS0 溶液中的濃度由 IOOmmol 1 改成 60mmol L'
[0090]對比例1-2、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0091]將NAS 在 NAS/DMS0 溶液中的濃度由 IOOmmol 1 改成 140mmol L'
[0092]對比例1-3、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0093]將TPO在反應體系中的濃度由約Immol 1改成5mmol L'
[0094]對比例1-4、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0095]將TPO在反應體系中的濃度由約lmmol L4改成0.5mmol L—1。
[0096]對比例1-5、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0097]將NAS/DMS0加入到稀釋后的CdSe/ZnS量子點溶液的體積比由1:9改成2:8。
[0098]對比例1-6、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0099]將NAS/DMSO加入到稀釋后的CdSe/ZnS量子點溶液的體積比由1:9改成1:10。
[0100]對比例1-7、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0101 ] 將離心后的NAS-QDs復合物溶于PBS/DMSO混合溶液，PBS/DMSO的比例由1:1 (v/V)改成2:3。
[0102]對比例1-8、相對于實施例1而言，僅僅作如下修改，其余內(nèi)容完全同實施例1:
[0103]將離心后的NAS-QDs復合物溶于PBS/DMSO混合溶液，PBS/DMSO的比例由1:1 (v/V)改成7:3。
[0104]上述對比例I-對比例8，依據(jù)其所得到的熒光強度與所添加丙烯酰胺標準品濃度的響應曲線，得到相應的線性方程；最終所得的薯片中丙烯酰胺的含量如下:
[0105]對比例1-1:1.038mg kg-1 ；
[0106]對比例1-2:1.537mg kg-1 ；
[0107]對比例1-3:1.589mg kg-1 ；
[0108]對比例1-4:1.105mg kg-1 ；
[0109]對比例1-5:1.574mg kg-1 ；
[0110]對比例1-6:1.168mg kg-1 ；
[0111]對比例1-7:1.618mg kg-1 ；
[0112]對比例1-8:0.932mg kg-1。
[0113]實施例2、將實施例1中的薯片改成另一品牌的薯片樣品，其余等同于實施例1.[0114]得線性方程為y=l.8633x+604.95 (r2=0.96)，令y=0，x 的絕對值即為待測樣品中丙烯酰胺的含量，324.67 μ g ΙΛ因此，薯片中丙烯酰胺含量為1.082mg kg—1。
[0115]驗證試驗:將實施例2所述的薯片樣品按照LC-MS/MS法進行檢測，丙烯酰胺含量為1.143mg kg—1，與實施例2所得結(jié)果基本相一致。
[0116]最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導出或聯(lián)想到的所有變形，均應認為是本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，其特征是包括以下步驟: 1)、熱加工食品前處理: 將熱加工食品利用甲酸溶液進行提取丙烯酰胺的前處理，得待測樣品； 2)、功能化量子點的制備，包括以下步驟: ①、將NAS溶于DMSO中，渦旋混勻至呈澄清溶液，得NAS/DMS0溶液；所述NAS在NAS/DMSO溶液中的濃度為90-IlOmmol L 1 ； 所述NAS為N-羥基琥珀酰亞胺丙烯酸酯，DMSO為二甲基亞砜； ②、在避光條件下，將水溶性氨基CdSe/ZnS量子點用PBS緩沖液(pH=8.0)進行稀釋，得量子點終濃度為38-42nmol-1的量子點稀釋液； ③、按照步驟①中的NAS:步驟②的水溶性氨基CdSe/ZnS量子點為1:9的體積比，向量子點稀釋液中滴加NAS/DMS0溶液；暗處反應1.8-2.2h ; ④、將步驟③反應后所得物離心，以去除多余的未反應的NAS;將離心后的沉淀物復溶于DMS0/PBS混合液中，得NAS-QDs復合物溶液； 所述DMS0/PBS混合液的體積用量=步驟③反應后所得物的體積；DMS0/PBS混合液由DMSO =PBS=1:1的體積比混合而得，PBS為pH=8.0的PBS緩沖液； 3)、標準加入法檢測薯片中丙烯酰胺含量: 向待測樣品中按照1%的體積用量比添加不同濃度的丙烯酰胺標準品溶液，從而分別獲得不同的待檢測溶液， 對每種待檢測溶液分別進行如下操作: 取450μ L的NAS-QDs復合物溶液，加入5 μ LlOOmmol L—1光引發(fā)劑TP0，混合均勻后，加入待檢測溶液50 μ L,紫外光條件下照射20min后,在365nm激發(fā)光下檢測600nm處突光強度； 繪制熒光強度與所添加丙烯酰胺標準品濃度的響應曲線，經(jīng)線性回歸，得到關(guān)于熒光強度I與所添加丙烯酰胺標準品濃度X的線性方程； 令y=0，X的絕對值即為待測樣品中丙烯酰胺的含量，最終得熱加工食品丙烯酰胺的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，其特征是: 所述步驟3)中不同濃度的丙烯酰胺標準品溶液分別為以下5種濃度的丙烯酰胺標準品溶液:0、355、710、1066、1422μ gL'
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，其特征是: 所述步驟I)具體為: 將熱加工食·品粉碎后加入體積濃度為0.25-0.35%的甲酸溶液，渦旋混勻后，離心，所得的上清液為樣品提取溶液； 采用固相萃取小柱將樣品提取溶液進行純化，再經(jīng)濃縮處理，得待測樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于量子點的熒光法檢測熱加工食品中丙烯酰胺的方法，其特征是: 所述步驟2)的④中的離心為:在100000rpm、4°C下離心2h，并重復三次。
【文檔編號】G01N21/64GK103439306SQ201310383303
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月29日
【發(fā)明者】徐霞紅, 胡沁沁, 張英, 李延斌 申請人:浙江大學