純天然生物制片透明劑及用該透明劑石蠟制片的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種純天然生物制片透明劑，該透明劑以植物油為原料，所述植物油選自菜籽油、大豆油、花生油、橄欖油、茶樹油、瓜子油、芝麻油中的至少一種，該透明劑未添加任何化學(xué)試劑，純天然、安全、無毒；本發(fā)明還提供一種利用所述透明劑石蠟制片的方法，包括以下程序：梯度乙醇脫水→丙酮→植物油透明→浸蠟→石蠟包埋→切片，在制片過程中，植物油的組織穿透速度稍慢，透明時(shí)間更易把握，組織變脆、硬的幾率更小，更易制作好的切片，且解決了二甲苯揮發(fā)性氣體對工作環(huán)境的污染，解決了組織包埋及切片過程中大量殘留二甲苯對工作人員的身體傷害。
【專利說明】純天然生物制片透明劑及用該透明劑石蠟制片的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種試劑，用于病理學(xué)界，具體涉及一種用于組織石蠟切片的純天然生物制片透明劑以及利用所述透明劑石蠟制片的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生物制片，是指人體、動(dòng)物或植物組織通過一系列的特殊處理切成薄片以利于顯微鏡下觀察組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的一種方法。切片的方法有冰凍切片、石蠟切片、火棉膠切片等，石蠟切片以其更容易切出薄片而得到最廣泛的應(yīng)用。其主要的方法是將石蠟滲入到組織，對組織起到充分的支持作用，并使其硬度均勻，以及與包埋石蠟更好的密切結(jié)合，以保證完整的切片。
[0003]新鮮的生物組織內(nèi)含大量的水分，石蠟不溶于水，無法滲入到組織內(nèi)部；為達(dá)到浸入的目的，則需通過一系列媒介試劑的處理，其處理的基本步驟是:脫水一透明一浸蠟。脫水主要用不同濃度的乙醇對組織進(jìn)行浸泡處理；透明則是用透明劑置換出組織內(nèi)的乙醇；浸蠟則是用石蠟置換出組織內(nèi)的透明劑。
[0004]透明劑在乙醇與石蠟之間起到了很好的橋梁作用，可見其需具備與乙醇和石蠟互溶的物理特性，通過其浸透的組織通透透明，故稱為透明劑。二甲苯是被廣泛運(yùn)用的透明齊U，它以價(jià)格相對低廉、穿透力強(qiáng)、透明迅速而長期在病理制片中得到運(yùn)用。但經(jīng)二甲苯處理的組織收縮厲害，在一定程度上破壞了組織原有的結(jié)構(gòu)；且其透明迅速而造成不易把握最佳透明時(shí)間，透明時(shí)間稍微過長，組織則變硬變碎而致不易完整切片；此外，二甲苯是有毒溶劑，揮發(fā)性強(qiáng)，極易被制片人員通過呼吸道吸入體內(nèi)，對人的造血系統(tǒng)，神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)具有強(qiáng)烈的毒害作用，是致癌物質(zhì)之一。使用二甲苯作為透明劑需要通過投入大量的勞動(dòng)保護(hù)裝置來避免二甲苯對勞動(dòng)者的傷害，即使這樣，也難以避免在組織包埋及切片過程中含二甲苯組織及石蠟對工作人員造成的傷害。
[0005]為解決二甲苯的污染問題，相關(guān)的人員做了大量的工作。根據(jù)文獻(xiàn)及專業(yè)書籍的記載，氯仿、苯胺、香柏油、松節(jié)油等可作為透明劑使用，但這些透明劑一部分自身具有毒性(如松節(jié)油的神經(jīng)系統(tǒng)及腎毒性、氯仿與日光、空氣接觸分解為劇毒光氣)，一部分仍然需要配合二甲苯才能使用(如香柏油、苯胺)。此外，雖然香柏油和松節(jié)油為植物油，但其不能單獨(dú)使用，需要添加其它化學(xué)試劑，如表面活性劑、吸水劑、抗氧化劑等，所以沒有從根本上解決透明劑的環(huán)保問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種生物制片透明劑，該生物制片透明劑以植物油為原料，所述植物油選自菜籽油、大豆油、花生油、橄欖油、茶樹油、瓜子油、芝麻油中的至少一種。
[0007]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的生物制片透明劑為純天然植物油透明劑，所述植物油來源于可食用的菜籽、大豆、花生、橄欖、茶樹子、瓜子、芝麻等純天然植物，可為一種單獨(dú)使用，也可兩種或兩種以上復(fù)配使用，所述透明劑中未添加任何化學(xué)試劑，環(huán)保、安全，且用本發(fā)明的透明劑處理的組織收縮程度較小，在一定程度上保護(hù)了組織原有的結(jié)構(gòu)，透明時(shí)間易控制，組織不易變硬變碎，更易實(shí)現(xiàn)完整切片。
[0008]
優(yōu)選地，所述植物油的含水量不超過0.05%。
[0009]優(yōu)選地，所述植物油通過浸出方式獲取。
[0010]植物油種類繁多，用作透明劑的植物油應(yīng)具備清澈透明、無異味、經(jīng)0°C冷藏仍清澈透明，能被丙酮、石油醚溶解，溶解后雜質(zhì)極少，含水量不超過0.05%的基本條件。植物油根據(jù)獲取的方式有壓榨及浸出兩種，壓榨方式獲取的植物油色澤偏深、雜質(zhì)相對較多；浸出方式獲取的植物油色澤淺淡，雜質(zhì)偏少，更加通透透明，為透明劑優(yōu)選。
[0011]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供利用所述透明劑石蠟制片的方法，包括將組織浸入梯度乙醇中脫水，然后將浸滿乙醇的組織浸入到丙酮中置換出乙醇，將浸滿丙酮的組織侵入到透明劑中透明，將浸滿透明劑的組織浸入到液體石蠟中浸蠟，然后將浸滿蠟的組織包埋在石蠟內(nèi)，切片。
[0012]優(yōu)選地，使用透明劑進(jìn)行透明的時(shí)間為2.5-4小時(shí)。
[0013]生物石蠟切片的基本過程為:將組織浸入梯度乙醇中脫掉組織內(nèi)水分，然后將浸滿乙醇的組織浸入到透明劑中透明，將浸滿透明劑的組織浸入到液體石蠟中浸蠟，將浸滿蠟的組織包埋在石蠟內(nèi)，切片。在脫水、透明、浸蠟的過程中，各個(gè)試劑間的置換都需要有互溶的物理特性才能達(dá)到互相滲透的目的。溶解的一般規(guī)律為相似者相溶，植物油與液態(tài)石蠟均為非極性溶劑，在范德華力的作用下兩者能很好的互溶；乙醇為半極性溶劑，未能與植物油混溶，但半極性的丙酮卻能很好的與植物油混溶；丙酮在乙醇與植物油之間起到了很好的橋梁作用，讓植物油順利的浸入組織成為了可能。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有如下顯著優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明的透明劑為純天然植物油，未添加任何化學(xué)試劑，安全無毒。
[0015]2、二甲苯作為透明劑用于切片，其組織穿透能力強(qiáng)，透明時(shí)間不好把握，極易致組織脆、硬，制做好的切片技術(shù)難度大；植物油的組織穿透速度稍慢，透明時(shí)間更易把握，組織變脆、硬的幾率更小，更易制作好的切片。
[0016]3、從整個(gè)生物制片過程來看，植物油用于制作切片透明時(shí)間比二甲苯稍長，但目前全自動(dòng)脫水機(jī)的廣泛使用使脫水透明浸蠟工作基本都在夜間自動(dòng)完成，稍長的透明時(shí)間并不會(huì)給工作效率帶來影響；植物油與二甲苯一樣均能制作出優(yōu)良的生物切片，植物油安全無毒的優(yōu)勢得到了最明顯的體現(xiàn)，用其制作切片，解決了二甲苯揮發(fā)性氣體對工作環(huán)境的污染，解決了組織包埋及切片過程中大量殘留二甲苯對工作人員的身體傷害。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為實(shí)施例1所制作的大鼠食道組織切片的顯微鏡照片；
圖2為對比實(shí)施例1所制作的大鼠食道組織切片的顯微鏡照片；
圖3為實(shí)施例2所制作的大鼠結(jié)腸組織切片的顯微鏡照片；
圖4為對比實(shí)施例2所制作的大鼠結(jié)腸組織切片的顯微鏡照片；
圖5為實(shí)施例3所制作的大鼠腎臟織切片的顯微鏡照片； 圖6為對比實(shí)施例3所制作的大鼠腎臟織切片的顯微鏡照片；
圖7為實(shí)施例4所制作的大鼠膀胱組織切片的顯微鏡照片；
圖8為對比實(shí)施例4所制作的大鼠膀胱組織切片的顯微鏡照片。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，有必要在此指出的是以下實(shí)施例只是用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述
【發(fā)明內(nèi)容】
所做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0019]實(shí)施例1
將大鼠食道組織分別用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和95%乙醇脫水I小時(shí)，然后用無水乙醇脫水3.5小時(shí)，將浸滿無水乙醇的組織浸入到丙酮中0.5小時(shí)，將浸滿丙酮的組織侵入到菜籽油中透明2.5小時(shí)，將浸滿菜籽油的組織浸入到液體石蠟中浸蠟1.5小時(shí)，然后將浸滿蠟的組織包埋在石蠟內(nèi)，切片。
[0020]實(shí)施例2
操作與實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠結(jié)腸組織，透明劑為瓜子油，透明時(shí)間為3小時(shí)。
[0021]實(shí)施例3
操作與實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠腎臟組織，透明劑為大豆油，透明時(shí)間為3.5小時(shí)。
[0022]實(shí)施例4
操作與實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠膀胱組織，透明劑為大豆油與菜籽油按質(zhì)量比為1:1的比例復(fù)配而成，透明時(shí)間為4小時(shí)。
[0023]對比實(shí)施例1
將大鼠食道組織分別用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和95%乙醇脫水I小時(shí)，然后用無水乙醇脫水4小時(shí)，將浸滿無水乙醇的組織浸入到二甲苯中透明40分鐘，將浸滿二甲苯的組織浸入到液體石蠟中浸蠟1.5小時(shí)，然后將浸滿蠟的組織包埋在石蠟內(nèi)，切片。
[0024]對比實(shí)施例2
操作與對比實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠結(jié)腸組織。
[0025]對比實(shí)施例3
操作與對比實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠腎臟組織。
[0026]對比實(shí)施例4
操作與對比實(shí)施例1相同，區(qū)別僅在于使用的是大鼠膀胱組織。
[0027]從實(shí)施例和對比實(shí)施例的制片結(jié)果(見附圖1-8)可以看出，使用本發(fā)明植物油作為石蠟制片透明劑與目前廣泛使用的二甲苯透明劑同樣能制作出優(yōu)良切片；但本發(fā)明的植物油較二甲苯透明速度更慢，透明時(shí)間更易控制，對生物組織造成的脆、硬、收縮等幾率更小，較二甲苯更易制作出優(yōu)良的切片。
【權(quán)利要求】
1.一種純天然生物制片透明劑，其特征在于它是以植物油為原料，所述植物油選自菜籽油、大豆油、花生油、橄欖油、茶樹油、瓜子油、芝麻油中的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的透明劑，其特征在于，所述植物油的含水量不超過0.05%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的透明劑，其特征在于，所述植物油通過浸出方式獲取。
4.利用根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的透明劑石蠟制片的方法，包括將組織浸入梯度乙醇中脫水，然后將浸滿乙醇的組織浸入到丙酮中置換出乙醇，將浸滿丙酮的組織侵入到透明劑中透明，將浸滿透明劑的組織浸入到液體石蠟中浸蠟，然后將浸滿蠟的組織包埋在石臘內(nèi)，切片。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制片方法，其特征在于，所述透明的時(shí)間為2.5-4小時(shí)。
【文檔編號】G01N1/28GK103471888SQ201310405759
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】黃利, 李利民 申請人:四川省中醫(yī)藥科學(xué)院