一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法。它是按照先用乙醚溶解藥膏，再加水溶解、萃取其中的鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明，靜置，分液，水液用乙醚洗滌后，干濾紙濾過，濾液用高效液相色譜進(jìn)行測定的。該鑒別方法重現(xiàn)性好、專屬性強，陰性對照無干擾，實現(xiàn)了一次性對麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的同時定性鑒別，可用于麝香活血化瘀膏的質(zhì)量控制。
【專利說明】一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的測定，尤其涉及一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 麝香活血化瘀膏是一種中西藥結(jié)合的復(fù)方橡膠膏制劑，具有明顯的活血化瘀、消炎止痛的功能，主要用于治療關(guān)節(jié)扭傷，軟組織挫傷，急性腰扭傷，腰肌勞損，肩周炎及未潰凍瘡和結(jié)節(jié)性紅斑等疾病。該橡膠膏制劑中含有十一味藥物，除含有三七等具有止血、止痛、散瘀、消腫等功效的藥物外，還含有鹽酸苯海拉明、鹽酸普魯卡因等藥物。
[0003]鹽酸苯海拉明極易溶解于水，易溶于醇或氯仿，極微溶于乙醚，它能清除由橡膠、氧化鋅、松香、羊毛脂、凡士林、液體石蠟組成的橡膠基質(zhì)對皮膚刺激引起的過敏反應(yīng)；鹽酸普魯卡易溶于水，略溶于醇，幾乎不溶于乙醚，它具有局部麻醉作用。在現(xiàn)有技術(shù)中，僅有對其他橡膠膏劑中的鹽酸苯海拉明進(jìn)行含量測定的記載:它是先用醇回流提取其中的鹽酸苯海拉明，再用反相高效液相色譜法或用反相離子對高效液相色譜法測定。但現(xiàn)有技術(shù)中沒有針對橡膠膏劑中鹽酸普魯卡因測定的報道，又由于鹽酸普魯卡因在醇中溶解度不大，用加醇回流的方式不易從橡膠膏中將其提出，因而上述對其他橡膠膏劑中的鹽酸苯海拉明進(jìn)行含量測定的方法，并不適用于鹽酸普魯卡因。而作為橡膠膏劑的麝香活血化瘀膏，與其他制劑不同，它含有大量的橡膠基質(zhì)，該橡膠基質(zhì)由橡膠、氧化鋅、松香、羊毛脂、凡士林、液體石蠟等物質(zhì)組成，用以上方式提取困難，因此現(xiàn)有技術(shù)中沒有對麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明、鹽酸普魯卡因進(jìn)行定性或定量測定的報道，這不利于對麝香活血化瘀膏的質(zhì)量控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，該鑒別方法重現(xiàn)性好，專屬性強，能對麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因進(jìn)行定性鑒別，可用于麝香活血化瘀膏的質(zhì)量控制。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于，它是按照以下步驟進(jìn)行測定的:
(1)供試品溶液的制備
取麝香活血化瘀膏數(shù)片，除去蓋襯、剪碎、混勻，稱取其中的6~12g (相當(dāng)于3~6片的質(zhì)量)作為供試品，加入脂溶性有機溶劑浸泡，充分振搖使藥膏溶解，加入一定量水，充分振搖，靜置分液，取水液，用該脂溶性有機溶劑洗滌數(shù)次，靜置，棄去有機溶劑，水液用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
(2)對照品溶液的制備精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌贰Ⅺ}酸苯海拉明對照品適量，加水制成每Iml分別至少含鹽酸普魯卡因8.5 μ g、鹽酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得對照品溶液；
(3)采用高效液相色譜法測定
用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈與質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液的混合液為流動相進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為220nm ;分別精密吸取所述對照品溶液與所述供試品溶液后，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，最后根據(jù)所得色譜圖可定性檢測該麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因。
[0006]本方法基于供試品溶液中的鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間，應(yīng)分別與對照品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間一致，因而可準(zhǔn)確快速地對這兩種物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定。
[0007]上述以乙腈與質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液的混合液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，是以乙腈為流動相A，以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比進(jìn)行梯度洗脫:0~7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7~25分鐘，流動相A為50%，流動相B為50%。該流動相的洗脫比例能使該藥膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因與其相鄰雜質(zhì)達(dá)基線分離，進(jìn)而實現(xiàn)各組分的鑒別。
[0008]上述浸泡時間為10分鐘。根據(jù)檢測結(jié)果可知:浸泡時間低于10分鐘，提出的鹽酸普魯卡因、鹽酸苯海拉明極少。浸泡10分鐘和20分鐘提出的鹽酸普魯卡因、鹽酸苯海拉明，無顯著性差異 ，故將浸泡時間確定為10分鐘。
[0009]更為詳細(xì)地說，本發(fā)明公開的麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于，它具體是按照以下步驟進(jìn)行測定的:
(1)供試品溶液的制備
稱取麝香活血化瘀膏數(shù)片，除去蓋襯、剪碎、混勻，之后稱取其中的6~12g(相當(dāng)于3~6片的質(zhì)量)作為供試品，加入乙醚50ml,浸泡10分鐘,充分振搖使藥膏溶解,加入水15ml,充分振搖，靜置，分取水液，用乙醚洗滌2次，每次15ml，棄去乙醚，水液用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
(2)對照品溶液的制備
精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?、鹽酸苯海拉明對照品適量，加水制成每Iml分別含鹽酸普魯卡因8.5 μ g、鹽酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得對照品溶液；
(3)采用高效液相色譜法測定
采用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比進(jìn)行梯度洗脫:O~7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7~25分鐘，流動相A為50%，流動相B為50% ;其檢測波長為220nm ;柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min ;進(jìn)樣量為20 μ? ;按照設(shè)置的所述色譜檢測條件，分別精密吸取所述對照品溶液與所述供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，最后根據(jù)所得色譜圖即可對該麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因進(jìn)行定性檢測。
[0010]本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明方法重現(xiàn)性好、專屬性強，陰性對照無干擾，實現(xiàn)了一次性對麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的同時定性鑒別，可用于麝香活血化瘀膏的質(zhì)量控制?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0011]附圖1是實施例1中所得的對照品溶液的色譜圖。
[0012]附圖2是實施例1中所得的供試品溶液的色譜圖。
[0013]附圖3是實施例2中所得的供試品溶液的色譜圖。
[0014]附圖4是實施例3中所得的供試品溶液的色譜圖。
[0015]附圖5是實施例4中所得的第一份供試品溶液的色譜圖。
[0016]附圖6是實施例4中所得的第二份供試品溶液的色譜圖。
[0017]附圖7是實施例4中所得的第三份供試品溶液的色譜圖。
[0018]附圖8是所得的陰性對照溶液的色譜圖。
[0019]附圖9是所得的鹽酸普魯卡因?qū)φ掌啡芤旱淖贤馕展庾V圖。
[0020]附圖10是所得的鹽酸苯海拉明對照品溶液的紫外吸收光譜圖。
【具體實施方式】
[0021]下面通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，但以下實施例只用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明，不能理解為對其保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
[0022]實施例1
一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，它具體是按照以下步驟進(jìn)行測定的:
(1)供試品溶液的制備
取批號為20130603的麝香活血化瘀膏10片，除去蓋襯、剪碎，稱取其中的Sg(相當(dāng)于其中4片的量)，作為供試品，加入乙醚50ml，浸泡10分鐘，充分振搖使藥膏溶解，加入水15ml，充分振搖，靜置，分取水液，用乙醚洗滌2次，每次15ml，棄去乙醚，水液用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
(2)對照品溶液的制備 精密稱取由中國藥品生物制品檢定所提供的鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?、鹽酸苯海拉明對照品適量，加水制成每Iml分別含鹽酸普魯卡因8.5 μ g、鹽酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得對照品溶液；
(3)采用高效液相色譜法測定
其液相色譜條件為:島津LC-1OAvT高效液相色譜儀，IOAvP檢測器，CLASS-VP數(shù)據(jù)處理軟件；色譜柱用Diamonsil C18 (5 μ m, 250 X4.6 mm);流動相:以乙腈(色譜純)為流動相A，以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比組成流動相進(jìn)行梯度洗脫:0~7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7~25分鐘，流動相A為50%，流動相B為50% ;其檢測波長為220nm ;柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min ;進(jìn)樣量為20 μ? ;按照以上設(shè)置的色譜檢測條件，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，最后分別得到對照品溶液的色譜圖，參見說明書附圖1，和供試品溶液的色譜圖，參見說明書附圖2。根據(jù)所得的該色譜圖對比可知:供試品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間，分別與對照品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間一致，因而可知所檢測的該供試品中含有鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明。
[0023]實施例2
一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，它是取批號為20130701的麝香活血化瘀膏5片，除去蓋襯、剪碎，稱取其中的8g (相當(dāng)于其中4片的量)作為供試品，后按照實施例1中的操作步驟和方法，制備供試品溶液、對照品溶液，和采用高效液相色譜法測定，最后即得到本例中的供試品溶液的色譜圖，參見說明書附圖3。對比對照品溶液的色譜圖，即說明書附圖1可知:供試品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間，分別與對照品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間一致，因而可知所檢測的該供試品中含有鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明。
[0024]實施例3
一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，它是取批號為20130802的麝香活血化瘀膏5片，除去蓋襯、剪碎，稱取其中的6g (相當(dāng)于其中3片的量)，作為供試品，按照實施例1中的操作步驟和方法，制備供試品溶液、對照品溶液，和采用高效液相色譜法測定，最后即得到本例中的供試品溶液的色譜圖，參見說明書附圖4。對比對照品溶液的色譜圖，即說明書附圖1可知:供試品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間，分別與對照品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間一致，因而可知所檢測的該供試品中含有鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明。
[0025]實施例4 重現(xiàn)性試驗
一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，它是取批號為20130802的麝香活血化瘀膏共20片，除去蓋襯、剪碎依次分3份，分別稱取其中的8g (均相當(dāng)于其中4片的量)作為供試品，按照實施例1中的操作步驟和方法，制備供試品溶液、對照品溶液，和采用高效液相色譜法測定，最后即得到本例中的供試品溶液的色譜圖，參見說明書附圖5、6和7。對比對照品溶液的色譜圖，即說明書附圖1可知:供試品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間，分別與對照品溶液中鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的色譜峰的保留時間一致，因而可知所檢測的該供試品中含有鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明。
[0026]此外，本發(fā)明還做了以下研究實驗:
①專屬性考察實驗:
陰性對照試驗:按麝香活血化瘀膏的處方量，用除鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明以外的其他藥物，按其制備方法制備不含鹽酸普魯卡因和鹽酸苯海拉明的橡膠膏，之后按實施例I中供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，并按照實施例1所述色譜條件進(jìn)行試驗，結(jié)果陰性對照溶液無干擾，其色譜圖見說明書附圖8。
[0027]②高效液相色譜條件的選擇實驗:
檢測波長選擇
分別取一定量的鹽酸苯海拉明對照品和鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?，加水制成每Iml含鹽酸普魯卡因8.5μ g的鹽酸普魯卡因?qū)φ掌啡芤?每Iml含鹽酸苯海拉明4.5 μ g的鹽酸苯海拉明對照品溶液，分別在190?350nm波長范圍進(jìn)行光譜掃描，并以258nm、210nm和220nm為檢測波長進(jìn)行試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在220nm波長處兩種物質(zhì)都有比較強的吸收，其溶液的紫外吸收光譜圖分別見說明書附圖9和10。[0028]流動相選擇選擇
(I)以乙腈-0.5%三乙胺溶液(用醋酸調(diào)節(jié)其pH為6.5)為流動相，進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果柱效低，峰型差，保留時間較長，基線漂移嚴(yán)重，故不采用。
[0029](2)以體積比為25:75的乙腈_1%硫酸銨溶液為流動相，進(jìn)行等度洗脫，結(jié)果鹽酸普魯卡因保留時間短而鹽酸苯海拉明保留時間較長；故不采用。
[0030](3)以乙腈為流動相A、以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比組成流動相進(jìn)行梯度洗脫:0?7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7?20分鐘，流動相A為60%，流動相B為40% ;結(jié)果兩種物質(zhì)保留時間合適，峰型都很好，但不能與相鄰雜質(zhì)達(dá)到基線分離；故不采用。
【權(quán)利要求】
1.一種麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于，它是按照以下步驟進(jìn)行測定的: (1)供試品溶液的制備 取麝香活血化瘀膏數(shù)片，除去蓋襯、剪碎、混勻，稱取其中的6~12g作為供試品，加入脂溶性有機溶劑浸泡，充分振搖使藥膏溶解，加入一定量水，充分振搖，靜置分液，取水液，用該脂溶性有機溶劑洗滌數(shù)次，靜置，棄去有機溶劑，水液用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； (2)對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?、鹽酸苯海拉明對照品適量，加水制成每Iml分別至少含鹽酸普魯卡因8.5 μ g、鹽酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得對照品溶液； (3)采用高效液相色譜法測定 用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈與質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液的混合液為流動相進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為220nm ;分別精密吸取所述對照品溶液與所述供試品溶液后，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，最后根據(jù)所得色譜圖可定性檢測該麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于:所述以乙腈與質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液的混合液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，是以乙腈為流動相A，以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比進(jìn)行梯度洗脫:0~7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7~25分鐘，流動相A為50%，流動相B為50%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于:所述浸泡時間為10分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香活血化瘀膏中鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因的鑒別方法，其特征在于，它具體是按照以下步驟進(jìn)行測定的: (1)供試品溶液的制備 稱取麝香活血化瘀膏數(shù)片，除去蓋襯、剪碎、混勻，之后稱取其中的6~12g作為供試品，加入乙醚50ml,浸泡10分鐘,充分振搖使藥骨溶解,加入水15ml,充分振搖,靜置,分取水液，用乙醚洗滌2次，每次15ml，棄去乙醚，水液用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； (2)對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌贰Ⅺ}酸苯海拉明對照品適量，加水制成每Iml分別含鹽酸普魯卡因8.5 μ g、鹽酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得對照品溶液； (3)采用高效液相色譜法測定 采用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以質(zhì)量百分比為1%的硫酸銨溶液為流動相B，按下述體積比進(jìn)行梯度洗脫:O~7分鐘，流動相A為15%，流動相B為85%，7~25分鐘，流動相A為50%，流動相B為50% ;其檢測波長為220nm ;柱溫為室溫；流速為1.0 mL/min ;進(jìn)樣量為20 μ? ;按照設(shè)置的所述色譜檢測條件，分別精密吸取所述對照品溶液與所述供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，最后根據(jù)所得色譜圖即可對該麝香活血化瘀膏中的鹽酸苯海拉明和鹽酸普魯卡因進(jìn)行定性檢測 。
【文檔編號】G01N30/88GK103487544SQ201310438085
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】羅延谷, 李文艷, 羅財勇, 何詠梅, 朱麗利 申請人:重慶紫光化工股份有限公司