一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，該方法包括以下步驟：（1）將抗體修飾的納米金和抗原進(jìn)行完全的免疫反應(yīng)；（2）而后將化學(xué)發(fā)光試劑注入免疫反應(yīng)后的納米金溶液中；（3）檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。該發(fā)明建立了一種全新的一步快速非溶出化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人IgG快速靈敏且環(huán)境友好的檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及化學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]免疫分析作為一種分析技術(shù)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥學(xué)分析、環(huán)境毒理學(xué)分析、分子生物學(xué)、生物技術(shù)、生物化學(xué)、和臨床診斷等各領(lǐng)域中，一直以來(lái)成為研究的熱點(diǎn)。自從1959年引入放射性免疫分析后，放射性免疫分析法廣泛應(yīng)用于免疫分析中。但是，放射性同位素作為標(biāo)記具有一些不可避免的缺點(diǎn)如健康危害、廢物處理問(wèn)題和短的半衰期等。隨著免疫分析技術(shù)的發(fā)展，將酶、金屬離子的螯合物以及熒光染料作為標(biāo)記物引入免疫分析中。這些免疫分析方法克服了上述放射性免疫分析所帶來(lái)的缺陷，因而具有很好的發(fā)展前景，但仍存在一些如靈敏度低、穩(wěn)定性不好及線性范圍窄的弊端，需要尋求一種操作簡(jiǎn)單，靈敏度高而且價(jià)格便宜，適用性強(qiáng)的分析方法。
[0003]化學(xué)發(fā)光分析因具有靈敏度高、線性范圍寬、試劑便宜及儀器操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于免疫分析中。近年來(lái)，化學(xué)發(fā)光免疫分析具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，備受人們的青睞。納米粒子尤其金屬納米粒子具有許多優(yōu)點(diǎn)，首先，在納米尺寸范圍內(nèi)，各種各樣具有獨(dú)特性能的納米粒子很容易合成；其次，納米粒子具有較好的生物相容性，不會(huì)影響生物活性。因此，金屬納米粒子尤其貴金屬納米粒子作為生物標(biāo)記引起了研究者很大的關(guān)注。近幾年來(lái)，已有很多文獻(xiàn)報(bào)道將貴金屬納米粒子作為標(biāo)記物用于化學(xué)發(fā)光免疫分析中。Han研究組報(bào)道了基于納米金溶解并結(jié)合AuCl4_-HCl-NaCl-Br2-luminol體系的化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析法，用于抗壞血酸過(guò)氧化物酶抗體(ApxIV Ab)的測(cè)定。Li研究組和Lu研究組相繼報(bào)道了基于納米金標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法用于羊抗人IgG的測(cè)定，該方法是利用將標(biāo)記在抗體上的納米金溶解得到AuC14_,結(jié)合AuCl4_-luminol_H202化學(xué)發(fā)光體系測(cè)定化學(xué)發(fā)光信號(hào)。作為一種新的測(cè)定方法，開創(chuàng)了納米粒子標(biāo)記化學(xué)發(fā)光分析的新途徑。但是在此方法中，納米金的溶解需要在高濃度的HNO3-HCl或HBr-Br2中溶解12小時(shí)以上，才能保證其溶解完全。在此基礎(chǔ)上，Li研究組又發(fā)展了一種新的化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法測(cè)定人IgG，該方法將標(biāo)記的納米金用Ag+還原溶液處理后，Ag+沉淀在納米金表面，經(jīng)硝酸溶出后，結(jié)合Ag+-Mn2+-K2S2O8-H3PO4-1uminol化學(xué)發(fā)光體系測(cè)定化學(xué)發(fā)光信號(hào)。該方法相比于利用納米金溶解的化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法，大大提高了靈敏度，而且銀的溶解剝離要比金的溶解相對(duì)要容易些，只需要在稀硝酸中可以達(dá)到完全溶解，但是仍需要繁瑣的貴金屬粒子的溶解過(guò)程。上述這些傳統(tǒng)的基于納米金或納米銀的化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法存在一定缺陷:一、需要納米金(銀)的溶解剝離，而且能夠使金、銀粒子的完全溶解的條件一般都比較苛刻，使用的溶劑大多有毒且具有強(qiáng)腐蝕性。納米金(銀)的溶解不僅繁瑣耗時(shí)，而且會(huì)增加背景信號(hào)，從而降低方法的靈敏度；二、這些分析方法大多是異相的，需要多步的標(biāo)記和洗脫，從而難以克服重現(xiàn)性和精密度的問(wèn)題。Li等人提出采用不規(guī)則納米金的增強(qiáng)催化作用，第一次發(fā)展了“非溶出”的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，然而該方法中不規(guī)則納米金的合成條件難以控制，從而限制了它的實(shí)際應(yīng)用。Cui等人通過(guò)標(biāo)記的納米金對(duì)Iuminol-AgNO3體系的催化作用，建立了一個(gè)“非溶出”的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。然而，該方法需要特殊的微孔發(fā)光儀和多步的標(biāo)記和洗脫過(guò)程，因而使得方法繁雜，耗時(shí)很長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何通過(guò)一步標(biāo)記，采用實(shí)用、簡(jiǎn)單、靈敏的非溶出方法實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析。
[0005]為了解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開了一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，包括以下步驟: [0006]( I)納米金的制備和表征；
[0007](2)羊抗人IgG標(biāo)記的納米金的制備；
[0008](3)免疫反應(yīng)；
[0009](4)將化學(xué)發(fā)光試劑注入免疫反應(yīng)后的納米金溶液中，檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。
[0010]本發(fā)明利用抗體修飾的納米金和抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后，引起納米金的團(tuán)聚從而導(dǎo)致其對(duì)魯米諾化學(xué)發(fā)光催化活性增強(qiáng)，建立了一種全新的一步快速非溶出化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人IgG快速靈敏且環(huán)境友好的檢測(cè)。具有以下優(yōu)點(diǎn):(I)它是非溶出的，避免繁瑣和艱難的納米金(或銀)的溶解剝離，具有高的靈敏度和好的重現(xiàn)性；(2)相比于別的非溶出方法所用的不規(guī)則納米金的合成，該方法中所用的13nm納米金的合成簡(jiǎn)單容易的多；(3)該方法只需要非競(jìng)爭(zhēng)的一步操作，避免了多步免疫反應(yīng)及洗脫步驟，大大節(jié)省了分析時(shí)間，將測(cè)試時(shí)間縮短為40分鐘以內(nèi)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011]當(dāng)結(jié)合附圖考慮時(shí)，通過(guò)參照下面的詳細(xì)描述，能夠更完整更好地理解本發(fā)明以及容易得知其中許多伴隨的優(yōu)點(diǎn)，但此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本發(fā)明的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定，其中:
[0012]圖1 一步非溶出的化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定的原理圖。
[0013]圖2抗體用量的優(yōu)化(納米金濃度固定為1.7nM ;所測(cè)吸光度為波長(zhǎng)520nm處)。
[0014]圖3免疫反應(yīng)時(shí)間的影響(條件:魯米諾,5X 10^4M;H202, 5.0X 10_2M)。
[0015]圖4鹽濃度的影響(條件:魯米諾,5X 10^4M;H202, 5.0X 10_2M)。
[0016]圖5不同濃度人IgG對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的響應(yīng)。注人IgG的濃度:(a)0gmL 1J (b) 2.6X10 10g mL (c) 1.3X10 9g mL (d) 2.6X10 9g mL (e) 3.9 X 10 9gmL (f) 5.3 X 10 9g mL (g) 2.6X10 8g mL (h) 1.3X10 7g mL (i) 2.6 X 10 7gmL' (j) 3.9 X 10_7g mL' (k) 5.3X l(T7g mL' 條件:魯米諾，5 X KT4M; H2O2, 5.0XlO-2Mo
[0017]圖6 (a)測(cè)定人IgG的靈敏度分析。
[0018]圖6 (b)測(cè)定人IgG的靈敏度分析。
[0019]圖7測(cè)定人IgG的特異性評(píng)價(jià)。注(a)人IgG, (b)牛血清白蛋白，(C)羊IgG, (d)兔 IgG。
[0020]圖8方法可靠性的評(píng)價(jià)。[0021]圖9納米金及羊抗人IgG修飾的納米金免疫反應(yīng)前后的紫外可見光譜。
[0022]圖10羊抗人IgG修飾的納米金免疫反應(yīng)前后的透射電鏡圖片。注a為免疫反應(yīng)前的；b為免疫反應(yīng)后的。
【具體實(shí)施方式】
[0023]參照?qǐng)D1-10對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明。
[0024]為使上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0025]本發(fā)明利用抗體修飾的納米金和抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后，引起納米金的團(tuán)聚從而導(dǎo)致其對(duì)魯米諾化學(xué)發(fā)光催化活性增強(qiáng)，建立了一種非溶出均相化學(xué)發(fā)光金屬免疫分析方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人IgG快速靈敏且環(huán)境友好的檢測(cè)。測(cè)定原理如圖1所示，當(dāng)分析物人IgG不存在時(shí)，抗體修飾的納米金催化魯米諾-過(guò)氧化氫體系，產(chǎn)生一個(gè)較弱的化學(xué)發(fā)光信號(hào)；而當(dāng)分析物人IgG存在時(shí)，羊抗人IgG標(biāo)記的納米金和抗原發(fā)生免疫反應(yīng)從而導(dǎo)致納米金的團(tuán)聚，抗體修飾納米金的團(tuán)聚大大地增強(qiáng)魯米諾-過(guò)氧化氫體系的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)人IgG的測(cè)定。
[0026]所用到的主要儀器設(shè)備和試劑:
[0027]IFFL-D流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套設(shè)備(西安瑞邁分析儀器有限公司)，TU-1901型紫外-可見分 光光度儀(北京普析通用儀器有限公司)，透射電子顯微鏡(日立公司，規(guī)格型號(hào):H_600)，恒溫磁力攪拌器(85-2型，上海司樂(lè)儀器有限公司)，恒溫水浴鍋(HH-1型，北京科偉永興儀器有限公司)，KYC100C生化培養(yǎng)箱(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，可調(diào)微量加液器(上海求精玻璃儀器廠)，聚苯乙烯96微孔板(FOLCON)。
[0028]氯金酸(HAuCl4 ? 4H20, AR，Au含量>47.8%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；將氯金酸固體溶于二次去離子水中制備氯金酸儲(chǔ)備溶液，放于4°C冰箱中保存。將4.43g魯米諾固體粉末溶解在20mL0.1OM NaOH溶液中并稀釋至1L，制備得到2.5 X 10 —2M魯米諾儲(chǔ)備溶液。使用之前避光保存一星期以確保試劑性質(zhì)的穩(wěn)定。魯米諾的工作溶液通過(guò)儲(chǔ)備溶液的稀釋而得到。H2O2的工作溶液在每次使用時(shí)從30% (WZV)H2O2 (上海化學(xué)試劑公司)稀釋得到。將 13.8g Na2HPO4 ? 12H20、1.6g NaH2PO4 ? H2O 和 9.0g NaCl 溶解在 IL 的二次去離子超純水中，配制得到磷酸緩沖溶液(PH7.4)。鄰苯二胺(OPD)底物溶液臨用前配制。將IOmg鄰苯二胺溶解于 6.1mL0.lmol/L 檸檬酸(2.1g/1OOmL)、6.4mL0.2mol/L Na2HPO4 (7.163g/100mL)和12.5mL 二次去離子水的混合液中，臨用前加40 u L30%(w/w)H202。羊抗人IgG、人IgG、兔IgG、羊IgG、牛血清白蛋白和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗人IgG均購(gòu)自于北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。
[0029]實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化:
[0030]固定金納米粒子的濃度為1.7nM，對(duì)標(biāo)記所用抗體的用量進(jìn)行優(yōu)化，如圖2所示，選擇羊抗人IgG的濃度為0.5mg/mL。
[0031]考察了免疫反應(yīng)的時(shí)間及鹽濃度的影響。結(jié)果如圖3和圖4所示，由圖3可以看出，免疫反應(yīng)一開始化學(xué)發(fā)光信號(hào)較弱，隨著時(shí)間增加，化學(xué)發(fā)光信號(hào)逐漸增強(qiáng)，反應(yīng)時(shí)間到達(dá)20分鐘時(shí)，發(fā)光信號(hào)迅速增強(qiáng)，30分鐘以后達(dá)到穩(wěn)定。所以，選擇免疫反應(yīng)的時(shí)間為30分鐘。另外，高濃度的鹽能夠引起納米金的團(tuán)聚，而鹽濃度太低將會(huì)影響免疫反應(yīng)的有效進(jìn)行。本發(fā)明考察了鹽濃度的影響，從圖4可以看出，隨著鹽濃度的增加，化學(xué)發(fā)光信號(hào)增強(qiáng)，而當(dāng)鹽濃度大于1.0X 10_3mol/L時(shí)，隨著鹽濃度的增加，化學(xué)發(fā)光信號(hào)開始降低，可能是由于過(guò)高的離子強(qiáng)度使蛋白質(zhì)(抗原或抗體)變質(zhì)，不利于免疫反應(yīng)的進(jìn)行，從而影響免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的納米金的團(tuán)聚。所以，選擇NaCl濃度為1.0X10_3mol/L。
[0032]另外，考慮到化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度和試劑的消耗，選擇魯米諾的濃度為5X10_4mol/L，過(guò)氧化氫濃度為5X 10_2mOl/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該體系的pH值優(yōu)化為12.0。
[0033]13nm納米金的制備:
[0034]采用檸檬酸鹽還原法制備。50mL的HAuCl4 (0.01%w/w)溶液加熱至沸，然后在強(qiáng)力攪拌下，迅速向漩渦中加入2.8mLl%的檸檬酸鈉溶液。此混合溶液保持沸騰10分鐘后關(guān)掉加熱電源，然后在不斷的攪拌下冷卻至室溫。得到的溶液在4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br> [0035]羊抗人IgG修飾金納米顆粒的制備:
[0036]制備羊抗人IgG修飾的金納米微粒。取5mL納米金溶液用0.lmol/L K2CO3溶液調(diào)節(jié)pH為9,加入ImL —定濃度的羊抗人IgG,室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)使抗體和金納米粒子充分結(jié)合，于4°C離心30分鐘(12000轉(zhuǎn)/分)以除去未標(biāo)記的抗體，吸出上清液，沉淀用
0.0lmol/L含有1%BSA的磷酸緩沖溶液(pH7.4)懸浮至原體積，于冰箱中(4°C )保存待用。
[0037]化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定:
[0038]移取免疫反應(yīng)后羊抗人IgG修飾的納米金/抗原混合液100 u L于化學(xué)發(fā)光池中，并注入200 u L魯米諾-過(guò)氧化氫化學(xué)發(fā)光試劑(5 X 10_4M魯米諾和5.0 X 10_2M過(guò)氧化氫的體積比為2:1)，通過(guò)IFFL-D流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)定并記錄其化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。通過(guò)測(cè)定化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)抗原人IgG的含量，由此可以得出化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度和待測(cè)人IgG之間的相關(guān)關(guān)系。
[0039]人IgG化學(xué)發(fā)光的分析性能:
[0040]在上述優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人IgG化學(xué)發(fā)光免疫分析的測(cè)定。圖5為免疫反應(yīng)后不同濃度人IgG響應(yīng)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，可以明顯看出，隨著人IgG濃度的增加，化學(xué)發(fā)光信號(hào)逐漸增強(qiáng)。且在2.6X 10,?5.3X IOVmL的濃度范圍內(nèi)，人IgG的濃度與化學(xué)發(fā)光信號(hào)的強(qiáng)度成良好的線性關(guān)系，線性曲線如圖6 (a)和圖6 (b)所示，其檢出限為3.2X 10_ng/mL(S/N=3)。并對(duì)6.2X 10_9g/mL的人IgG進(jìn)行五次重復(fù)測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(R.S.D.)為4.6%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法檢出限低，精密度好。和已有的基于納米金的“非溶出”化學(xué)發(fā)光免疫分析相比較，我們建立的方法檢出限要低兩個(gè)數(shù)量級(jí)。
[0041]該化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的特異性評(píng)價(jià)結(jié)果如圖7所示，所用待測(cè)物的濃度均為L(zhǎng)OXlOVmL時(shí)，只有當(dāng)待測(cè)物為人IgG時(shí)才有明顯的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，而其它抗原所誘導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)相對(duì)來(lái)說(shuō)都非常弱，表明該化學(xué)發(fā)光免疫分析方法對(duì)于人IgG的測(cè)定具有良好的特異性。
[0042]酶聯(lián)免疫吸附分析:
[0043]酶聯(lián)免疫吸附分析被認(rèn)為是免疫分析的經(jīng)典方法。實(shí)驗(yàn)中在測(cè)定血清樣品中人IgG含量時(shí)，通過(guò)與酶聯(lián)免疫吸附分析標(biāo)準(zhǔn)方法相比較，來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明所提出的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的可靠性。酶聯(lián)免疫吸附分析的測(cè)定過(guò)程如下:(1)于聚苯乙烯96孔板中加入100 u LLOXlOVmL羊抗人IgG，4°C放置過(guò)夜以完成羊抗人IgG在聚苯乙烯96孔板上的包被。未標(biāo)記的羊抗人IgG用0.01mol/L含0.05%tween20的磷酸緩沖溶液(PBS_T，pH=7.4)洗三次洗掉。(2)于上述微孔內(nèi)加入100 u L0.01mol/L含1%BSA的磷酸緩沖溶液(PBS-BSApH=7.4)，在37°C下保溫一小時(shí)之后，用PBS-T洗三次。該過(guò)程用于填補(bǔ)微孔內(nèi)未被羊抗人IgG包被的空缺，避免后面過(guò)程所造成的非特異性的吸附。(3)于上述微孔中加入100 UL不同濃度的人IgG (或血清樣品)，在37°C下保溫兩小時(shí)之后，倒出，每個(gè)微孔分別用PBS-T洗六次。(4)于上述微孔中加入100 u L1.0X IOVmL HRP標(biāo)記的羊抗人IgG，在37°C下保溫兩小時(shí)之后用PBS-T洗滌。(5)加入鄰苯二胺OPD底物溶液200 u L，室溫下暗處反應(yīng)15分鐘后，加入100 u L2mol/L硫酸終止液。在波長(zhǎng)為492nm處，測(cè)定有色溶液的吸光度值。用同樣的步驟得出人IgG的酶聯(lián)免疫吸附標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清樣品中人IgG濃度。
[0044]血樣的測(cè)定:
[0045]人血清樣品經(jīng)稀釋后同時(shí)用本發(fā)明所提出的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法及酶聯(lián)免疫吸附分析方法進(jìn)行測(cè)定，來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的可靠性。
[0046]將一系列稀釋的人血清樣品作為待測(cè)樣品，用化學(xué)發(fā)光免疫分析方法進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)測(cè)定并繪制人IgG的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)人IgG的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出血清樣品中IgG的濃度，與用酶聯(lián)免疫吸附方法得出的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果如圖8所示，兩種分析方法測(cè)定的結(jié)果基本相同，說(shuō)明本發(fā)明所建立的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法比較可靠，可以用于實(shí)際血清樣品的測(cè)定。
[0047]利用紫外-可見吸收光譜和透射電鏡兩種手段對(duì)羊抗人IgG修飾的納米金在與人IgG發(fā)生免疫反應(yīng)前后的變化進(jìn)行了研究，結(jié)果如圖9和圖10。如圖9所示，紫外可見吸收光譜發(fā)生了明顯的改變。另外，從透射電鏡的結(jié)果(圖10)可以看出，免疫反應(yīng)之前納米金是單分散的(圖10中的a)，免疫反應(yīng)完之后納米金發(fā)生了明顯的團(tuán)聚(圖10中的b)。
[0048]雖然以上描述了本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這些【具體實(shí)施方式】?jī)H是舉例說(shuō)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和實(shí)質(zhì)的情況下，可以對(duì)上述方法和系統(tǒng)的細(xì)節(jié)進(jìn)行各種省略、替換和改變。例如，合并上述方法步驟，從而按照實(shí)質(zhì)相同的方法執(zhí)行實(shí)質(zhì)相同的功能以實(shí)現(xiàn)實(shí)質(zhì)相同的結(jié)果則屬于本發(fā)明的范圍。因此，本發(fā)明的范圍僅由所附權(quán)利要求書限定。
【權(quán)利要求】
1.一種快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于該方法包括以下步驟: (1)將抗體修飾的納米金和抗原進(jìn)行完全的免疫反應(yīng)； (2)而后將化學(xué)發(fā)光試劑注入免疫反應(yīng)后的納米金溶液中； (3)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。
2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于:所述免疫反應(yīng)的時(shí)間為30分鐘，免疫反應(yīng)NaCl濃度為1.0X 10_3mOl/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于:所用納米金的粒徑為13nm，且濃度為1.7nM。
4.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于:標(biāo)記抗體所用濃度為0.5mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于:化學(xué)發(fā)光試劑中魯米諾的濃度為5X 10_4mol/L，過(guò)氧化氫濃度為5X 10_2mol/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的快速化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)人IgG的方法，其特征在于:化學(xué)發(fā)光體系的PH值優(yōu)化為12.0。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK103604802SQ201310547157
【公開日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】齊瑩瑩, 修福榮 申請(qǐng)人:福建工程學(xué)院