一種快速全血血小板聚集功能檢測裝置及方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速血小板聚集功能檢測裝置及方法。所述裝置包括檢測艙及檢測艙內(nèi)載樣盤、檢測單元、驅(qū)動裝置和加熱裝置等。本方法利用低速離心使紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板聚集復(fù)合體沉降到檢測管底部，未發(fā)生聚集的血小板單體不沉降保留在上清液（血漿）中，而后直接利用可見光照射上清，由于血小板對可見光產(chǎn)生吸收及散射，相同體積血小板在特定波長照射時，血小板對光吸收及散射與血小板濃度相關(guān)。通過檢測上清液在特定波長照射時透射光信號或檢測散射光的強度，并分別與相應(yīng)對照管的透射光或散射光信號比較就可以檢測出上清中血小板的含量，并依據(jù)此計算出血小板的聚集率，從而反映樣品血小板的聚集功能水平。
【專利說明】一種快速全血血小板聚集功能檢測裝置及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及檢驗醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種采用全血為樣本的快速全血血小板聚集 功能檢測裝置及方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血栓性疾病是指由于血液形成栓塞而引起的心梗、腦梗等多種疾病的總稱。根據(jù) 國際及我國衛(wèi)生組織機構(gòu)發(fā)布的資料，由血栓病導(dǎo)致的死亡率長期占據(jù)各病因死亡的首 位，血栓病具有致死率高、發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高等特點，已成為目前對人類健康和 生命危害最為嚴(yán)重的疾病。
[0003]血小板是血液中凝血與止血功能的重要成份，長期實驗室研究和臨床實踐均證 實:血小板是血栓形成中第一和關(guān)鍵的因素；抗血小板藥物是血栓病預(yù)防和治療的關(guān)鍵措 施。然而近年來的研究發(fā)現(xiàn)，抗血小板藥物對于大多數(shù)血栓病患者的治療或預(yù)防是有益的， 但是，不同個體、甚至相同個體的不同時期服用抗血小板藥物的反應(yīng)是不同的:部分個體有 效，部分無效，同時還有部分個體發(fā)生出血(過敏)。因此，有效的血小板功能檢測技術(shù)手段 在血栓性疾病診斷、預(yù)防以及治療中具有十分重要的價值。
[0004]自上世紀(jì)Born氏發(fā)明光學(xué)比濁法血小板聚集功能檢測方法以來，雖然已有多種 不同原理、不同模式的血小板檢測技術(shù)方法推出。但目前在醫(yī)學(xué)實際工作中，血小板功能檢 測還主要采用光學(xué)比濁法。光學(xué)比濁法檢測血小板聚集功能的原理是:抗凝血漿中的血小 板對光的透射可以發(fā)生吸收或阻礙，因此，對血小板含量較高的樣品光照檢測時光透過率 較低，而當(dāng)血漿中血小板由于聚集等原因減少后，血漿的光通過率可以提高，因此該方法通 過檢測透射光信號強度(I)及透射光的變化對血漿中的血小板含量及聚集功能進行檢測。 具體檢測操作流程為:1)首先將枸櫞酸抗凝血樣進行低速離心制備富含血小板血漿(RPP): 將抗凝血標(biāo)本離心500?800轉(zhuǎn)/分，離心5-10分鐘，將紅細(xì)胞離心沉降到樣品管底部，上 層分離出透明富含血小板血漿；2)制備貧血小板血漿(PPP):將上述已制備好的部分富血 小板血漿再次高速離心(3000轉(zhuǎn)/分以上，離心10分鐘)，使得血漿中原來含有的血小板由 于強力的離心而沉降到管底，上清血漿中已無血小板成為貧血小板血漿；3).對富血小板 血漿(RPP)中血小板數(shù)量調(diào)整，即對RPP中血小板數(shù)量進行檢測，而后將富血小板血漿中的 血小板數(shù)量調(diào)整到規(guī)定范圍；4)正式檢測:分別將富血小板血漿和貧血小板血漿(一般各 300ul)，分別加入二個相同的檢測杯中恒溫預(yù)熱5min，而后將裝貧血小板血漿檢測杯放在 專用光學(xué)檢測儀器用透射光檢測，所測值作為本底值(或稱調(diào)零)，而后將裝有調(diào)整數(shù)量后 的富血小板血漿檢測杯也放到儀器上檢測獲得原始光信號值，隨后加入誘聚劑，儀器檢測 記錄加入誘聚劑后隨著血小板聚集沉降光信號逐步增強的過程。該方法將檢測貧血小板血 漿獲得的光強度信號值作為100%聚集值，而將富血小板血漿檢測的起始光信號強度值作 為0%聚集的光信號值。將富血小板血漿加入誘聚劑后的光信號強度變化記錄比較，獲得富 血小板血漿在加入誘聚劑后血小板聚集導(dǎo)致光信號強度增加的幅度從而實現(xiàn)對樣品血小 板功能的檢測。該方法操作環(huán)節(jié)多、耗時長，操作標(biāo)準(zhǔn)化難度大，用血量大，而由于血小板功能穩(wěn)定性較差，在檢測中常由于溫度、震蕩、時間過長等因素使血小板功能發(fā)生改變。因此該方法檢測結(jié)果穩(wěn)定性較差，難以在臨床實踐中推廣普及。
[0005]除此方法外，目前還有一些其它的血小板功能檢測儀器和檢測方法。如:1)PFA-100及PFA-200儀，其原理是通過檢測血樣在誘導(dǎo)劑的刺激下聚集堵塞檢測微孔的時間長短判斷血小板的功能；2)血栓彈力圖分析法(Thrombelastography),是通過監(jiān)測血樣凝固的速度、強度(彈性)等指標(biāo)判斷血小板的功能水平；3)VerifyN0W儀(全血光學(xué)檢測法)是通過檢測全血中血小板在誘聚劑刺激下發(fā)生聚集后，引起標(biāo)本透光率的提高來獲得對血小板聚集功能水平的判斷；4) Plateletworks法,是采用同一患者采集二份血樣,其中一份血樣為EDTA抗凝血樣(血小板已不具有聚集功能)、另一管采血管中加有枸櫞酸鹽抗凝劑和血小板聚集誘聚劑，將二份血樣分別檢測其中血小板數(shù)量，通過比較來自同一個體的二份不同處理血樣中血小板數(shù)量的差異來獲得對血小板的聚集功能判斷。此外還有:流式細(xì)胞儀檢測法、全血阻抗檢測法等等。這些方法都普遍存在檢測結(jié)果穩(wěn)定性較差，用血量較大，或是操作繁瑣、耗時長、工作強度大；或檢測費用昂貴等原因難以在臨床普及。此外這些方法的共同不足就是無法適應(yīng)大批量樣本檢測。由于現(xiàn)有檢測技術(shù)的缺陷和不足正是導(dǎo)致目前血小板功能檢測不能在醫(yī)學(xué)臨床普及應(yīng)用，或許也是目前血栓性疾病危害嚴(yán)重的重要原因。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是要解決目前現(xiàn)有血小板功能檢測方法結(jié)果不佳、過程繁瑣，效率低下的狀況，為醫(yī)學(xué)及相關(guān)科研提供一種簡捷、方便、結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定，并能執(zhí)行大批量樣本檢測的一種快速全血血小板聚集功能檢測裝置及方法。
[0007]實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)解決方案為:
一種快速全血血小板聚集功能檢測裝置，所述裝置包括檢測艙以及檢測艙內(nèi)的載樣盤、檢測單元、驅(qū)動裝置和加熱裝置；所述檢測艙頂部設(shè)置檢測艙蓋，所述載樣盤上可裝載檢測管架，檢測管設(shè)置在檢測管架內(nèi)，載樣盤與驅(qū)動裝置相連，檢測單元由光電檢測器和光源組成，檢測管可由載樣盤的轉(zhuǎn)動到達(dá)與檢測單元相對應(yīng)位置，實現(xiàn)對各檢測管內(nèi)上清層的檢測，檢測艙底部設(shè)置加熱裝置，保持檢測艙內(nèi)恒溫。
[0008]實施方式一:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接n個檢測管架，n > 1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的結(jié)構(gòu)，接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿，掛桿通過載樣盤的掛鉤連接載樣盤，檢測管放置在檢測管架內(nèi)，檢測管架及檢測管可在離心時隨沿掛桿的中心軸轉(zhuǎn)動。
[0009]所述檢測單元為一體式裝置，由I個光電檢測器和I個光源組成，檢測單元設(shè)置在可移動的檢測臂的前端，其中檢測臂的前端為凹陷結(jié)構(gòu)，凹陷的形狀與檢測管相配合，凹陷結(jié)構(gòu)兩邊內(nèi)部分別設(shè)置光電檢測器和光源，光源與檢測管中心連線，光電檢測器與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
[0010]實施方式二:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接n個檢測管架，n > 1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的結(jié)構(gòu)，接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿，掛桿通過掛鉤連接載樣盤，檢測管放置在檢測管架內(nèi)，檢測管架及檢測管可在離心時隨沿掛桿的中心軸轉(zhuǎn)動。[0011]所述檢測單元由I個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)， 光電檢測器與光源分別安裝在檢測管兩側(cè)相對位置，其中光源安裝在載樣盤(2 )外側(cè)，光電檢測器安裝在載樣盤(2)內(nèi)側(cè)。
[0012]實施方式三:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接n個檢測管架，n > 1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的結(jié)構(gòu)，接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿， 掛桿通過掛鉤連接載樣盤，檢測管放置在檢測管架內(nèi)，檢測管可隨掛桿為軸心轉(zhuǎn)動。
[0013]所述檢測單元由I個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)， 光源和光電檢測器分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，光源與檢測管中心連線，光電檢測器與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
[0014]實施方式四:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接n個檢測管架，n > 1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的結(jié)構(gòu)，接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿， 掛桿通過掛鉤連接載樣盤，檢測管放置在檢測管架內(nèi)，檢測管可隨掛桿為軸心轉(zhuǎn)動。
[0015]所述檢測單元由2個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)， 光電檢測器與光源分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，其中光源安裝在載樣盤(2)內(nèi)側(cè)，其中一個光電檢測器安裝在載樣盤(2)外側(cè)，光源、檢測管、光電檢測器連線呈一條直線，另一個光電檢測器與檢測管中心連線，光源與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
[0016]實施方式五:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接N個多檢測位檢測管架，N > I，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的長方形結(jié)構(gòu)，內(nèi)部設(shè)置n個檢測管位，n ^ 1，檢測管架接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿，掛桿通過掛鉤與載樣盤連接，檢測管放置在檢測管位內(nèi)；檢測管架可隨掛桿為軸心轉(zhuǎn)動；所述檢測單元由光電檢測器和光源組成，檢測單元個數(shù)與一個檢測管架上的檢測管位個數(shù)一致，且每個檢測單元的安裝位置與檢測管架上的一個檢測管位置相對應(yīng)。
[0017]所述檢測單元由n個光電檢測器和n個光源組成，n≥1，光電檢測器與光源分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，其中光源安裝在載樣盤內(nèi)側(cè)，光電檢測器安裝載樣盤外側(cè)，各光源和相對應(yīng)的檢測管及相應(yīng)光電檢測器連成一條直線。
[0018]實施方式六:其中，所述載樣盤為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤連接N個檢測管架，NS 1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的長方形結(jié)構(gòu)，內(nèi)部設(shè)置n個檢測管位，n ^ 1，檢測管架接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿，掛桿通過掛鉤與載樣盤連接，檢測管放置在檢測管位內(nèi)；檢測管架可隨掛桿為軸心轉(zhuǎn)動；所述檢測單元由I個光電檢測器和一個光源組成，檢測單元個數(shù)與檢測管架上的檢測管位個數(shù)一致，且每個檢測單元的安裝位置與每一檢測管架上的一個檢測管位置相對應(yīng)。
[0019]所述檢測單元由光電檢測器和光源組成，光源和光電檢測器分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，其中每一光源和相應(yīng)檢測管的中心連線，每一光電檢測器和相應(yīng)檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
[0020]實施方式7，所述載樣盤由上下兩個圓盤組成，上圓盤上沿圓盤外圍設(shè)置n，n≥1， 個檢測位，檢測位均勻分布在載樣盤上，檢測管設(shè)置在檢測位內(nèi)，下圓盤上設(shè)置卡槽，卡槽固定檢測管底部，所述檢測管上部向內(nèi)傾斜與載樣盤中心軸之間呈20飛0°角。
[0021]所述檢測單元為一體式裝置，由檢測臂及位于檢測臂前端的I個光電檢測器和I 個光源組成，其中檢測臂的前端為凹陷結(jié)構(gòu)，凹陷的形狀與檢測管相配合，凹陷結(jié)構(gòu)兩邊內(nèi)部分別設(shè)置光電檢測器和光源，光源與檢測管中心連線，光電檢測器與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。檢測臂具有伸縮移動功能，在檢測時向前伸出與檢測管吻合檢測，檢測后縮回，載樣盤轉(zhuǎn)動將下一個需檢測的檢測管轉(zhuǎn)到檢測單元位置，檢測臂再次伸出進行檢測，直至完成檢測所有檢測管及對照管。
[0022]實施方式8，所述載樣盤為圓形由上下兩個圓盤組成，上圓盤上沿圓盤外圍設(shè)置n，n > 1，個檢測位，檢測位均勻分布在載樣盤上，檢測管設(shè)置在檢測位內(nèi)，下圓盤上設(shè)置卡槽，卡槽固定檢測管底部，所述檢測管上部向內(nèi)傾斜與載樣盤中心軸之間呈20飛0°角。
[0023]所述檢測單元由I個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)，光電檢測器與光源分別安裝在檢測管兩側(cè)相對位置，其中光源安裝在載樣盤外側(cè)，光電檢測器安裝在載樣盤內(nèi)側(cè)。
[0024]一種快速全血血小板聚集功能檢測方法，該方法是將被檢測血樣放入上述的裝置中進行檢測，其操作步驟如下:
1)將被檢測抗凝血樣分別加入檢測管和對照管中，預(yù)先在檢測管中加入誘聚劑，在對照管中加入等量生理鹽水；
2)開啟加熱裝置，設(shè)置檢測艙內(nèi)溫度在相對恒定的范圍，將裝有血樣的檢測管及對照管都充分顛倒混勻后放入儀器載樣盤上檢測管位并記錄各檢測管、對照管的裝載位置，蓋上檢測艙蓋，靜置。
[0025]3)啟動儀器載樣盤驅(qū)動裝置，載樣盤開始轉(zhuǎn)動離心，使血樣中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞及聚集后的血小板復(fù)合體沉降到檢測管的下部，而保留未聚集或低聚集的單體血小板在上清液中；
4)停止離心，驅(qū)動裝置控制載樣盤間歇轉(zhuǎn)動，使得各檢測管逐一轉(zhuǎn)到檢測單元所在位置，由檢測單元對各檢測管及對照管中的上清液進行檢測；` 5)根據(jù)檢測管及相應(yīng)對照管中上清`液檢測獲得的光信號值進行比較計算，得出各樣本血小板聚集率結(jié)果。
[0026]其中，步驟I)中抗凝血樣為枸櫞酸抗凝血樣；誘聚劑為二磷酸腺苷誘聚劑；步驟
2)中溫度控制在22~38°C，靜置時間小于30min。
[0027]所述檢測裝置采用散射光檢測時計算聚集率的計算式為:
【權(quán)利要求】
1.一種快速全血血小板聚集功能檢測裝置，其特征在于:所述裝置包括檢測艙(I)以及檢測艙(I)內(nèi)具有離心和定位轉(zhuǎn)動功能的載樣盤(2)、檢測單元(3)、驅(qū)動裝置(4)和加熱裝置(5 );所述檢測艙頂部設(shè)置檢測艙蓋，所述載樣盤(2 )上設(shè)置檢測管架，檢測管設(shè)置在檢測管架內(nèi)，載樣盤(2)與驅(qū)動裝置(4)相連，檢測單元(3)由光電檢測器和光源組成，檢測單元(3 )與檢測管架位置相對應(yīng)，檢測艙(I)底部設(shè)置加熱裝置(5 )。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測裝置，其特征在于:所述載樣盤(2)為圓形，載樣盤(2)圓周外圍通過載樣盤(2)上的掛鉤(9)連接n個檢測管架，1，檢測管架為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的結(jié)構(gòu)，接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿(8 )，掛桿通過掛鉤連接載樣盤(2)，檢測管放置在檢測管架內(nèi)，檢測管架可沿掛桿中心軸轉(zhuǎn)動。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測裝置，其特征在于:所述檢測單元(3)為一體式裝置，由檢測臂及檢測臂前端的I個光電檢測器(3a)和I個光源(3b)組成，其中檢測臂前端為凹陷結(jié)構(gòu)，凹陷的形狀與檢測管相配合，凹陷結(jié)構(gòu)兩邊內(nèi)部分別設(shè)置光電檢測器和光源，檢測時光源與檢測管中心連線、光電檢測器與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉，所述檢測單元(3)可以移動，檢測時根據(jù)需要將檢測單元(3)移動到合適的檢測位進行檢測。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測裝置，其特征在于:所述檢測單元(3)由I個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)，光電檢測器與光源分別安裝在檢測管兩側(cè)相對位置，其中光源安裝在載樣盤(2 )外側(cè)，光電檢測器安裝在載樣盤(2 )內(nèi)側(cè)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測裝置，其特征在于:所述檢測單元(3)由I個光電檢測器和I個光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)，光源和光電檢測器分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，光源與檢測管中心連線，光電檢測器與檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測裝置，其特征在于:所述載樣盤(2)為圓形，載樣盤圓周外圍通過掛鉤(9)連接N個檢測管架(7)，N > I，檢測管架(7)為底部密封、頂部開口、側(cè)壁鏤空的長方形結(jié)構(gòu)，內(nèi)部設(shè)置n個檢測管位，n ^ 1，檢測管架(7)接近頂部位置兩端設(shè)置掛桿(8 )，掛桿(8 )通過載樣盤上的掛鉤(9 )與載樣盤(2 )連接，檢測管放置在檢測管架上的檢測管位內(nèi)；檢測管架(7)可沿掛桿`中心軸轉(zhuǎn)動；所述檢測單元(3)為多個，每個檢測單元由光電檢測器和光源組成，檢測單元個數(shù)與一個檢測管架(7)上的檢測管位個數(shù)一致，且每個檢測單元的安裝位置與一個檢測管架(7)上的各個檢測管位置相對應(yīng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述檢測裝置，其特征在于:所述檢測單元(3)由光電檢測器和光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)，各光電檢測器與相應(yīng)光源分別安裝在檢測管兩側(cè)相對位置，其中光源安裝在載樣盤(2)外側(cè),光電檢測器安裝在載樣盤(2)內(nèi)側(cè)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述檢測裝置，其特征在于:所述檢測單元(3)由光電檢測器和光源組成，光源與光電檢測器為分離狀態(tài)，光源和光電檢測器分別安裝在檢測管側(cè)壁相對位置，其中每一光源和相應(yīng)檢測管的中心連線，每一光電檢測器和相應(yīng)檢測管中心連線，兩線呈90°角交叉。
9.一種快速全血血小板聚集功能檢測方法，其特征在于:該方法是將被檢測血樣放入權(quán)利要求1所述的裝置中進行檢測，其操作步驟如下: I)將被檢測抗凝血樣分別加入檢測管和對照管中，再在檢測管中加入誘聚劑，對照管中或不加誘聚劑或加入誘聚劑等量的生理鹽水； 2)開啟加熱裝置，設(shè)置檢測艙內(nèi)溫度在恒定的溫度范圍，將裝有血樣的檢測管及對照管都充分顛倒混勻后放入儀器載樣盤上檢測管架檢測位中并記錄各檢測管、對照管的裝載位置，蓋上檢測艙蓋，靜置；3)啟動儀器載樣盤驅(qū)動裝置，載樣盤開始轉(zhuǎn)動離心，使血樣中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞及聚集后的血小板復(fù)合體沉降到檢測管的下部，而保留未聚集或低聚集的單體血小板在上清液中；4)停止離心，驅(qū)動裝置控制載樣盤間歇轉(zhuǎn)動，使得各檢測管、對照管逐一轉(zhuǎn)到檢測單元所在位置，由檢測單元對各檢測管及對照管中的上清液進行檢測；5)根據(jù)檢測管及相應(yīng)對照管中上清液檢測獲得的光信號值進行比較計算，得出各樣本血小板聚集率結(jié)果。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測裝置，其特征在于:步驟I)中抗凝血樣為枸櫞酸抗凝血樣；誘聚劑為二磷酸腺苷、花生四烯酸、膠原或腎上腺素；步驟2)中`溫度控制在22~38°C， 靜置時間小于30min。
【文檔編號】G01N21/59GK103558152SQ201310564441
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月14日
【發(fā)明者】徐新, 周強, 朱建波, 張陸軍, 宋成橋 申請人:江蘇英諾華醫(yī)療技術(shù)有限公司