一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，包括分別將待鑒別的復方穿心蓮片樣品進行前處理得到供試品溶液的步驟、將陰性對照品進行前處理得到陰性供試品溶液的步驟、將對照品進行前處理得到對照品溶液的步驟，還包括對供試品溶液進行薄層色譜鑒別分析的步驟；其中，薄層色譜鑒別分析的步驟中展開時采用體積比為9:1～99:1的乙酸乙酯和甲醇作為展開劑，檢視時將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液進行顯色，其中，所述香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%～70%的硫酸制成，所述香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為1%～2.5%。本發(fā)明的鑒別方法鑒別效率高、鑒別精度高、操作方便。
【專利說明】一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及復方穿心蓮片的鑒別方法，尤其涉及一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]復方穿心蓮片由穿心蓮和路邊青兩種原料組成，目前執(zhí)行的標準為《衛(wèi)生部藥品標準》(衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準.中藥成方制劑(十九冊).1998.116)，標準編號為WS3 - B - 3624 — 98。復方穿心蓮片制法是:取穿心蓮60g，粉碎成細粉，剩余的穿心蓮540g與路邊青1400g加水煎煮二次，第一次2小時，第二次I小時，合并煎液，靜置，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.26?1.32 (700C )的清膏，加入穿心蓮細粉，混勻，加適量輔料，制成顆粒，壓制成1000片，包糖衣，即得。
[0003]復方穿心蓮片的原標準分別通過兩個薄層鑒別體現(xiàn)出對兩種藥材的鑒別，分別是利用脫水穿心蓮內(nèi)酯標準品對穿心蓮藥材進行鑒別(1)，用路邊青藥材標準品對路邊青藥材進行鑒別(2)，詳述如下:
[0004]1、取本品20片，除去糖衣，研細，加石油醚(60?90°C) 30ml，置水浴中加熱回流30分鐘，棄去石油醚液，殘渣加氯仿30ml，置水浴中加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液用活性炭2g脫色，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加氯仿0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加氯仿制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10?15 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿一醋酸乙酯一無水乙醇(9:6:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2% 3，5 一二硝基苯甲酸乙醇溶液與5%氫氧化鉀乙醇溶液的等量混合液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0005]2、取本品10片，除去糖衣，研細，加石油醚(60?90°C) 20ml，置水浴中加熱回流30分鐘，棄去石油醚液，殘渣加氯仿20ml，置水浴回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加氯仿0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取路邊青對照藥材14g，加適量水，煎煮30分鐘，濾過，濾液濃縮至干，殘渣加乙醇IOml使溶解，濾過，濾液蒸干，殘渣加氯仿0.5ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10?15 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿一醋酸乙酯一無水乙醇(9:6:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%香草醛的70%硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同顏色。
[0006]也有研究者對上述兩種方法進行了改進，但同樣使用了毒性較大的有機試劑“氯仿”，這在新版藥典上是旨在盡量避免的；另外，黃色斑點在有水的展開劑中難以得到，易受潮濕環(huán)境影響。此外，針對藥材路邊青的鑒別，同樣使用了毒性較大的有機試劑“氯仿”，這在新版藥典上是旨在盡量避免的。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)的復方穿心蓮片的鑒別方法具有如下缺點:
[0008]1、現(xiàn)有的技術(shù)方法對供試樣品前處理方法較為繁瑣，本方法直接用石油醚、乙酸乙酯等安全的有機試劑對藥材進行超聲萃取，相對于水浴操作方便、安全。
[0009]2、現(xiàn)有技術(shù)的薄層展開條件都使用了“氯仿”，此試劑易揮發(fā)，易造成機體肝損傷，毒性較大，為中國藥典委員會建議不使用的試劑。本方法采用乙酸乙酯-甲醇作為展開劑，安全性高。
[0010]3、現(xiàn)有技術(shù)所用方法，針對路邊青的顯色斑點為黃色，此點常常為黃色條帶，較模糊，顯色不明顯，容易造成誤差。
[0011]4、現(xiàn)有技術(shù)中的一些方法要求展開劑無水存在，在濕度較高的季節(jié)和地區(qū)，操作較難達到要求。因此其操作容易受限制。
[0012]由此可見，如何提供一種操作簡便、減小毒性、鑒定準確的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，這是本領(lǐng)域目前需要解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，簡化操作過程，提高操作的安全性及鑒別的準確性。
[0014]為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0015]一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，包括分別將待鑒別的復方穿心蓮片樣品進行前處理得到供試品溶液的步驟、將對照品進行前處理得到對照品溶液的步驟，還包括對供試品溶液進行薄層色譜鑒別分析的步驟；其中，薄層色譜鑒別分析的步驟中展開時采用體積比為9:1?99:1的乙酸乙酯和甲醇作為展開劑，檢視時將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液進行顯色，其中，所述香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%?70%的硫酸制成，所述香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為1%?2.5%。
[0016]優(yōu)選地，將待鑒別的復方穿心蓮片樣品進行前處理得到供試品溶液的步驟具體為:取待鑒別樣品粉末加第一有機溶劑處理，濾過，得到第一濾液和第一殘渣；將第一濾液棄去，將第一殘渣再加第二有機溶劑處理，濾過，得到第二濾液和第二殘渣；將第二殘渣棄去，將第二濾液蒸干，得到第三殘渣，將第三殘渣加有機溶劑溶解，作為供試品溶液。
[0017]優(yōu)選地，所述第一有機溶劑為石油醚或與石油醚極性相近的化合物，所述第二有機溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任意一種或兩種以上的混合物。
[0018]優(yōu)選地，處理時間為10?45分鐘。
[0019]優(yōu)選地，處理時間為20?30分鐘。
[0020]優(yōu)選地，處理的方法為超聲、回流、煎煮、浸潰中的任意一種或兩種以上。
[0021]優(yōu)選地，所述對照品溶液包括:分別由路邊青藥材、脫水穿心蓮內(nèi)酯各自經(jīng)前處理制成的路邊青對照品溶液以及脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液。
[0022]優(yōu)選地，所述薄層色譜鑒別分析的步驟中，檢視具體為:先將噴完顯色劑的薄層板在常溫下顯色，直到表征穿心蓮特征的斑點出現(xiàn)，然后再加熱薄層板至路邊青特征點出現(xiàn)，進行路邊青特征顯色。
[0023]優(yōu)選地，薄層色譜鑒別分析的步驟中展開時采用體積比為18:1?80:1的乙酸乙酯和甲醇作為展開劑。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，采用薄層色譜法進行鑒別，由于薄層色譜法的展開劑選用乙酸乙酯與甲醇，乙酸乙酯與現(xiàn)有技術(shù)中使用的氯仿比較，具有低毒性，大大提高了操作的安全性；展開劑中，乙酸乙酯與甲醇的體積比設(shè)置為9:1~99:1這樣一個恰當?shù)姆秶?，能使斑點清晰可辨，使得操作簡便，提高鑒別效率。由于檢視時采用香草醛的硫酸溶液作為顯色劑，其中香草醛的濃度控制在1%~2.5%這樣一個范圍，能有效地對路邊青的特征性的藍青色的點進行顯色，使得鑒別更加快捷、方便。
【具體實施方式】
[0025]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0026]本發(fā)明的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法包括如下步驟: [0027]將待鑒別的樣品和對照品分別進行前處理，然后采用薄層色譜法進行鑒別。其中，前處理的步驟可選用現(xiàn)有技術(shù)中的前處理手段。
[0028]具體來說，本發(fā)明的鑒別方法具體包括如下步驟:
[0029]1、供試品溶液的制備:
[0030]取供試品(即待鑒別的樣品)的粉末加有機溶劑，超聲5~60分鐘，濾過，濾液棄用，殘渣加有機溶劑超聲5~60分鐘，濾液濃縮后作為供試品溶液；
[0031]2、對照品及對照藥材溶液的制備:取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加有機溶劑制成對照品溶液；取路邊青對照藥材，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。
3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
薄層條件如下:
薄層板:普通硅膠G預制板；
點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣10μ I~15μ I ;
展開劑:體積比為9:1~99:1的乙酸乙酯:甲醇；
展開方式:上行展開；
檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以1%~2.5%香草醒的60%~70%硫酸
[0032]
[0033]
[0034]
[0035]
[0036]
[0037]
[0038]溶液。
[0039]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，則說明供試品為合格品O
[0040]其中，本發(fā)明所用試驗材料可選擇如下材料，但實際實施時并不限于如下材料:
[0041]試劑:硅膠G (批號051007)青島海洋化工廠生產(chǎn)，自制板規(guī)格10X20mm，厚度0.5mm ;預制板為青島海洋化工廠生產(chǎn)，規(guī)格為10 X 20mm，厚度0.2~0.25mm。其它所用試劑為分析純。
[0042]對照藥材:脫水穿心蓮內(nèi)酯(批號:110854-201007 ),路邊青對照藥材(批號:121227-200804)，穿心蓮對照藥材(批號:121082-201004)購于中國藥品生物制品檢定所。
[0043]供試品:復方穿心蓮片三批(01、02、03)，為廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)。
[0044]實施例一
[0045]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:[0046]1、供試品溶液的制備:
[0047]取供試品一復方穿心蓮片20片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲30分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲30分鐘，將濾液濃縮至2ml左右，作為供試品溶液。在其他實施例中，也可將濾液濃縮至I?2ml中的任意一值。在其他實施例中，作為供試品的復方穿心蓮片可以為10?20片中的任意一值。
[0048]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材10g，加200ml水，超聲30分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0049]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0050]薄層條件如下:
[0051 ] 薄層板:普通硅膠G預制板；
[0052]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣15 μ I ;
[0053]展開劑:體積比為95:5的乙酸乙酯-甲醇；
[0054]展開方式:上行展開；
[0055]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為70%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為
2.5%。
[0056]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0057]實施例二
[0058]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:
[0059]1、供試品溶液的制備:
[0060]取供試品一復方穿心蓮片15片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲40分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲40分鐘，將濾液濃縮至1.4ml左右，作為供試品溶液。
[0061]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgjP 200ml水，超聲40分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0062]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0063]薄層條件如下:
[0064]薄層板:娃膠G自制板；
[0065]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣12 μ I ;
[0066]展開劑:體積比為9:1的乙酸乙酯-甲醇；
[0067]展開方式:上行展開；
[0068]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為2%。[0069]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0070]實施例三
[0071]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:
[0072]1、供試品溶液的制備:
[0073]取供試品一復方穿心蓮片10片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲50分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲50分鐘，將濾液濃縮至1.0ml左右，作為供試品溶液。
[0074]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgjP 200ml /K，超聲50分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0075]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0076]薄層條件如下:
[0077]薄層板:普通硅膠G預制板；
[0078]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣13 μ I ;
[0079]展開劑:體積比為20:1的乙酸乙酯-甲醇；
[0080]展開方式:上行展開；
[0081]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為1%。
[0082]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0083]實施例四
[0084]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:
[0085]1、供試品溶液的制備:
[0086]取供試品一復方穿心蓮片12片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲40分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲38分鐘，將濾液濃縮至1.2ml左右，作為供試品溶液。
[0087]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgjP 200ml /K，超聲38分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0088]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0089]薄層條件如下:
[0090]薄層板:娃膠G自制板；
[0091]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣10 μ I ;[0092]展開劑:體積比為35:1的乙酸乙酯-甲醇；
[0093]展開方式:上行展開；
[0094]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為70%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為1%。
[0095]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0096]實施例五
[0097]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:
[0098]1、供試品溶液的制備:
[0099]取供試品一復方穿心蓮片16片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲40分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲45分鐘，將濾液濃縮至2ml左右，作為供試品溶液。
[0100]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgJp 200ml /K，超聲45分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0101]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0102]薄層條件如下:
[0103]薄層板:普通硅膠G預制板；
[0104]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣12 μ I ;
[0105]展開劑:體積比為55:1的乙酸乙酯-甲醇；
[0106]展開方式:上行展開；
[0107]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為70%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為
1.5%。
[0108]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0109]實施例六
[0110]本實施例的鑒別方法包括如下步驟:
[0111]1、供試品溶液的制備:
[0112]取供試品一復方穿心蓮片18片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲60分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲42分鐘，將濾液濃縮至2ml左右，作為供試品溶液。
[0113]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgjP 200ml /K，超聲45分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0114]3、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0115]薄層條件如下:
[0116]薄層板:普通娃膠G預制板；
[0117]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣15 μ I ;
[0118]展開劑:體積比為99:1的乙酸乙酯-甲醇；
[0119]展開方式:上行展開；
[0120]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為
2.3%。
[0121]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點，這說明供試品為合格品O
[0122]本發(fā)明的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法具有如下優(yōu)點:
[0123]由于展開條件所用展開劑為乙酸乙酯-甲醇以(9:1)?(99:1)中的任何一個比例混合，該試劑相比于現(xiàn)有技術(shù)的氯仿更為安全環(huán)保，操作簡便。
[0124]樣品前處理過程中，選擇乙酸乙酯這樣較安全的溶劑進行樣品處理、且樣品的處理方法更簡單方便，試劑較為安全環(huán)保，操作簡便。
[0125]顯色方式中，選用濃度為1%?2.5%香草醛的60%?70%硫酸溶液作為顯色劑，顯色情況良好。而濃度不當?shù)脑挘邕x用0.2%香草醛的70%硫酸溶液，則不能有效地對路邊青的特征性的藍青色的點進行顯色。
[0126]顯色方式中，與現(xiàn)有技術(shù)相比，雖然都可以利用一塊板同時鑒別穿心蓮和路邊青兩種藥材，但本發(fā)明改變了顯色步驟，即噴了顯色劑1%?2.5%香草醛的60%?70%硫酸溶液之后，針對穿心蓮使用了不加熱的顯色方法，即在常溫下顯色，這樣使得穿心蓮顯色的斑點雜質(zhì)較少，更能凸顯出主斑點的特征性。而針對路邊青使用了加熱方法，即在穿心蓮顯色后，加熱薄層板，進行路邊青顯色，使得路邊青的鑒別更加有特征性，即在加熱的情況下，出現(xiàn)特征性的藍青色的點，這樣使得鑒別結(jié)果更為準確。
[0127]專屬性驗證:
[0128]本發(fā)明的鑒別方法的專屬性:
[0129]1、供試品溶液的制備:
[0130]取供試品一復方穿心蓮片15片，除去糖衣，研細，加有機溶劑一石油醚30ml，超聲40分鐘，棄去石油醚液，殘渣加入乙酸乙酯30ml，超聲30分鐘，將濾液濃縮至Iml左右，作為供試品溶液。
[0131]2、對照品溶液的制備:取路邊青藥材IOgjP 200ml /K，超聲30分鐘，濾過，用等體積乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分濃縮至2ml，作為路邊青對照品溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0132]3、陰性對照藥材溶液的制備:穿心蓮600g，照復方穿心蓮片的制法，制成不含路邊青藥材的陰性對照品；路邊青1400g，照復方穿心蓮片的制法，制成不含穿心蓮藥材的陰性對照品；再照供試品溶液的制備方法，分別制備成不含穿心蓮的陰性供試品溶液和不含路邊青的陰性供試品溶液。
[0133]4、采用薄層色譜鑒別法對供試品進行鑒別:
[0134]薄層條件如下:
[0135]薄層板:普通硅膠G預制板；
[0136]點樣:供試品溶液與對照藥材溶液分別點樣4 μ I ;
[0137]展開劑:體積比為95:5的乙酸乙酯-甲醇；
[0138]展開方式:上行展開；
[0139]檢視:將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液，該香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%的硫酸制成，該香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為2%。
[0140]色譜識別:供試品色譜中，在與穿心蓮對照藥材和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，顯相同的斑點，在不含穿心蓮的陰性供試品色譜相應的位置上，不顯相同的斑點；再用電熱吹風機或電熱板加熱至斑點顯色清晰，自然光下觀察，在與路邊青對照藥材色譜相應的位置上，顯一個相同的藍青斑點；在不含路邊青藥材的陰性對照品色譜相應的位置上，沒有藍青色斑點。這說明供試品為合格品。
[0141]效果驗證:
[0142]以下通過實驗來驗證本發(fā)明的鑒別方法耐用性好:
[0143]不同薄層板的比較:選取手鋪G-CMC.Na與預制硅膠G板，分別按擬定的試驗方法試驗。結(jié)果表明，自制板和預制板均能達到鑒別要求。
[0144]不同相對濕度的比較:取點樣后的薄層板，分別用硫酸調(diào)節(jié)濕度為32%和72%的層析缸中展開，顯色，檢視。結(jié)果表明在相對濕度32%和72%，對色譜無明顯影響。
[0145]不同溫度的比較:將已有展開劑的層析缸置于冰箱中(5°C)，放置一段時間后，將點樣后的薄層板放入層析缸中，展開，顯色，檢視。結(jié)果表明，低溫條件
[0146]下的薄層斑點清晰，分離度較好，與常溫條件下的薄層情況相似，表明低溫對該薄層鑒別方法無明顯影響。
[0147]經(jīng)上述試驗，表明本發(fā)明的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法在薄層板方面，手鋪板和預制板均能達到分離效果，溫度、濕度變化對展開效果影響不大，因此該方法耐用性良好。
[0148]以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出的是，上述優(yōu)選實施方式不應視為對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護范圍應當以權(quán)利要求所限定的范圍為準。對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，包括分別將待鑒別的復方穿心蓮片樣品進行前處理得到供試品溶液的步驟、將對照品進行前處理得到對照品溶液的步驟，還包括對供試品溶液進行薄層色譜鑒別分析的步驟；其中，薄層色譜鑒別分析的步驟中展開時采用體積比為9:1~99:1的乙酸乙酯和甲醇作為展開劑，檢視時將展開完畢的薄層板取出，晾干，噴以香草醛的硫酸溶液進行顯色，其中，所述香草醛的硫酸溶液由香草醛和濃度為60%~70%的硫酸制成，所述香草醛的硫酸溶液中香草醛的質(zhì)量百分比為1%~2.5%。
2.如權(quán)利要求1所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，將待鑒別的復方穿心蓮片樣品進行前處理得到供試品溶液的步驟具體為:取待鑒別樣品粉末加第一有機溶劑處理，濾過，得到第一濾液和第一殘渣；將第一濾液棄去，將第一殘渣再加第二有機溶劑處理，濾過，得到第二濾液和第二殘渣；將第二殘渣棄去，將第二濾液蒸干，得到第三殘渣，將第三殘渣加有機溶劑溶解，作為供試品溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，所述第一有機溶劑為石油醚或與石油醚極性相近的化合物，所述第二有機溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任意一種或兩種以上的混合物。
4.如權(quán)利要求2所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，處理時間為10~45分鐘。
5.如權(quán)利要求4所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，處理時間為20~30分鐘。
6.如權(quán)利要求2~5任一項所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，處理的方法為超聲、回流、煎煮、浸潰中的任意一種或兩種以上。
7.如權(quán)利要求1所述的`復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，所述對照品溶液包括:分別由路邊青藥材、脫水穿心蓮內(nèi)酯各自經(jīng)前處理制成的路邊青對照品溶液以及脫水芽心連內(nèi)酷對照品溶液。
8.如權(quán)利要求1所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，所述薄層色譜鑒別分析的步驟中，檢視具體為:先將噴完顯色劑的薄層板在常溫下顯色，直到表征穿心蓮特征的斑點出現(xiàn)，然后再加熱薄層板至路邊青特征點出現(xiàn)，進行路邊青特征顯色。
9.如權(quán)利要求1所述的復方穿心蓮片的薄層鑒別方法，其特征在于，薄層色譜鑒別分析的步驟中展開時采用體積比為18:1~80:1的乙酸乙酯和甲醇作為展開劑。
【文檔編號】G01N30/94GK103604901SQ201310578033
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月18日
【發(fā)明者】張慧曄, 徐小飛, 王德勤, 李楚源 申請人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司