一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，包括以下步驟：（1）將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液；（2）將所述待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜；所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?；?）根據(jù)所述待測溶液的指紋圖譜、預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量。本發(fā)明采用梯度洗脫進(jìn)行液相色譜檢測，得到的指紋圖譜中各活性成分的色譜峰峰形和分離度均較好，有利于計(jì)算色譜峰的峰面積，從而得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品中各成分的含量。本發(fā)明提供的方法實(shí)現(xiàn)了對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中各活性成分的定量測定，從而能夠更真實(shí)的反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的品質(zhì)。
【專利說明】一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥分析【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的處方中含有龍血竭、三七、浙貝母和薏苡仁，其功能為軟堅(jiān)散結(jié)、化瘀定痛，主要用于治療痰瘀互結(jié)兼氣滯所致的繼發(fā)性痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、盆腔包塊、不孕以及子宮內(nèi)膜異位等疾病。散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中含有酚類化合物、皂苷類化合物、生物堿和油脂等化學(xué)成分，這些化學(xué)成分對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品發(fā)揮藥效具有重要的作用，因此檢測散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中相關(guān)成分的方法成為人們研究的焦點(diǎn)。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)公開了一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中黃酮類成分的檢測方法(顏月園，蕭偉，吳云.散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊中黃酮類成分的指紋圖譜研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18:5.)，具體過程為:采用液相色譜檢測，檢測條件為Waters SymmetryiC18色譜柱；流動相為乙腈-水；檢測波長為275nm ;流動相流速為1.0mL ^mirT1 ;色譜柱柱溫為30°C;對照品溶液的制備方法為取7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A和龍血素B適量，加適量的甲醇制成7，4’ - 二羥基黃酮質(zhì)量濃度為0.0504mg/mL、龍血素A質(zhì)量濃度為0.0522mg/mL、龍血素B質(zhì)量濃度為0.0934mg/mL的混合溶液；供試品溶液的制備方法為取散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊樣品2g，加入50mL質(zhì)量百分濃度為50% 的甲醇的水溶液，進(jìn)行超聲提取30min，將提取后的溶液濾過，取續(xù)濾液采用0.45μ m的濾膜濾過。檢測結(jié)果為散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊中的主要成分為7，4’- 二羥基黃酮、龍血素A和龍血素B。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)公開的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法只能對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中的相關(guān)成分進(jìn)行定性的檢測，沒有對其進(jìn)行定量的檢測，因此現(xiàn)有技術(shù)提供的檢測方法不能完全地反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，本發(fā)明提供的檢測方法既能對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中的相關(guān)成分進(jìn)行定性檢測又能對其進(jìn)行定量檢測，該方法能夠全面的反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的質(zhì)量。
[0006]本發(fā)明提供了一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，包括以下步驟:
[0007](I)、將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液；
[0008](2)、將所述待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為乙腈，所述流動相B為水或三氟乙酸，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100% ；
[0009]所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，所述梯度洗脫?
[0010]O~12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從12%~14%上升至17%~19%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從86%~88%下降至81%~83% ；
[0011 ] 12min~22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從17%~19%上升至27%~29%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從81%?83%下降至71%?73% ；
[0012]22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從27%?29%上升至39%?41%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從71%?73%下降至59%?61% ；
[0013]35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在39%?41%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在59%?61% ；
[0014]46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從39%?41%上升至89%?91%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從59%?61%下降至9%?11% ；
[0015](3)、根據(jù)所述待測溶液的指紋圖譜、預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品溶液的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間的線性曲線。
[0016]優(yōu)選的，所述醇類化合物為C原子數(shù)為I?5的醇類化合物。
[0017]優(yōu)選的，所述醇類化合物為乙醇或甲醇。
[0018]優(yōu)選的，所述醇類化合物為無水甲醇。
[0019]優(yōu)選的，所述梯度洗脫具體為:
[0020]O?12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從13%上升至18%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從87%下降至82% ；
[0021]12min?22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從18%上升至28%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從82%下降至72% ；
[0022]22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從28%上升至40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從72%下降至60% ；
[0023]35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在60% ；
[0024]46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從40%上升至90%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從60%下降至10%。
[0025]優(yōu)選的，所述流動相的流速為1.5mL.mirT1?2.0mL.mirT1。
[0026]優(yōu)選的，所述液相色譜檢測的檢測器為紫外檢測器；
[0027]檢測波長為260nm?300nm。
[0028]優(yōu)選的，所述液相色譜檢測中的色譜柱柱溫為30°C?45°C。
[0029]優(yōu)選的，所述步驟(I)為:
[0030]將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品溶于醇類化合物中，超聲提取，得到待測溶液。
[0031]優(yōu)選的，所述超聲提取的時(shí)間為15分鐘?60分鐘。
[0032]本發(fā)明提供了一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，包括以下步驟:(I)、將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液；(2)、將所述待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為乙腈，所述流動相B為水或三氟乙酸，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100% ;所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，所述梯度洗脫?0?12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從12%?14%上升至17%?19%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從86%?88%下降至81%?83% ；12min?22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從17%?19%上升至27%?29%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從81%?83%下降至71%?73% ；22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從27%?29%上升至39%?41%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從71%?73%下降至59%?61% ；35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在39%?41%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在59%?61% ；46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從39%?41%上升至89%?91%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從59%?61%下降至9%?11% ; (3)、根據(jù)所述待測溶液的指紋圖譜、預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品溶液的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間的線性曲線。本發(fā)明采用這種梯度洗脫進(jìn)行液相色譜檢測，分離出了散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中的活性成分，得到的指紋圖譜中各活性成分的色譜峰的峰形較好，且各色譜峰之間具有較好的分離度，有利于計(jì)算色譜峰的峰面積，從而得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中各成分的含量。本發(fā)明提供的方法實(shí)現(xiàn)了對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中各活性成分的定量測定，從而能夠更真實(shí)的反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的品質(zhì)。
[0033]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法具有良好的重復(fù)性、穩(wěn)定性以及精密度，能夠準(zhǔn)確測定散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中相關(guān)成分的含量。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0035]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0036]圖3為本發(fā)明實(shí)施例3得到的對照品溶液的指紋圖譜；
[0037]圖4為本發(fā)明實(shí)施例5得到的白藜蘆醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0038]圖5為本發(fā)明實(shí)施例5得到的7，4’ - 二羥基黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0039]圖6為本發(fā)明實(shí)施例5得到的龍血素A的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0040]圖7為本發(fā)明實(shí)施例5得到的龍血素B的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0041]圖8為本發(fā)明實(shí)施例5得到的紫檀芪的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0042]圖9為本發(fā)明實(shí)施例8得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0043]圖10為本發(fā)明實(shí)施例9得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0044]圖11為本發(fā)明實(shí)施例11得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0045]圖12為本發(fā)明實(shí)施例12得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0046]圖13為本發(fā)明實(shí)施例13得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0047]圖14為本發(fā)明實(shí)施例14得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0048]圖15為本發(fā)明實(shí)施例31得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0049]圖16為本發(fā)明實(shí)施例32得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0050]圖17為本發(fā)明實(shí)施例33得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0051]圖18為本發(fā)明實(shí)施例34得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0052]圖19為本發(fā)明實(shí)施例35得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0053]圖20為本發(fā)明實(shí)施例36得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0054]圖21為本發(fā)明實(shí)施例37得到的龍血素A的紫外吸收曲線；
[0055]圖22為本發(fā)明實(shí)施例37得到的龍血素B的紫外吸收曲線；
[0056]圖23為本發(fā)明實(shí)施例37得到的白藜蘆醇的紫外吸收曲線；[0057]圖24為本發(fā)明實(shí)施例37得到的7，4’ - 二羥基黃酮的紫外吸收曲線；
[0058]圖25為本發(fā)明實(shí)施例37得到的紫檀芪的紫外吸收曲線；
[0059]圖26為本發(fā)明實(shí)施例38得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0060]圖27為本發(fā)明實(shí)施例39得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0061]圖28為本發(fā)明實(shí)施例40得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0062]圖29為本發(fā)明實(shí)施例41得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0063]圖30為本發(fā)明實(shí)施例42得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0064]圖31為本發(fā)明實(shí)施例43得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0065]圖32為本發(fā)明實(shí)施例44得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0066]圖33為本發(fā)明實(shí)施例45得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0067]圖34為本發(fā)明實(shí)施例46得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0068]圖35為本發(fā)明實(shí)施例47得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0069]圖36為本發(fā)明實(shí)施例48得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0070]圖37為本發(fā)明實(shí)施例49得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0071]圖38為本發(fā)明實(shí)施例50得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0072]圖39為本發(fā)明實(shí)施例51得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0073]圖40為本發(fā)明實(shí)施例52得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0074]圖41為本發(fā)明實(shí)施例53得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0075]圖42為本發(fā)明實(shí)施例54得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0076]圖43為本發(fā)明實(shí)施例63得到的待測溶液的對照指紋圖譜；
[0077]圖44為本發(fā)明實(shí)施例65得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0078]圖45為本發(fā)明實(shí)施例66得到的待測溶液的指紋圖譜；
[0079]圖46為本發(fā)明實(shí)施例67得到的待測溶液的指紋圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0080]本發(fā)明提供了一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，包括以下步驟:
[0081](I)、將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液；
[0082](2)、將所述待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為乙腈，所述流動相B為水或三氟乙酸，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100% ;所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，所述梯度洗脫?
[0083]O?12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從12%?14%上升至17%?19%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從86%?88%下降至81%?83% ；
[0084]12min?22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從17%?19%上升至27%?29%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從81%?83%下降至71%?73% ；
[0085]22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從27%?29%上升至39%?41%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從71%?73%下降至59%?61% ；
[0086]35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在39%?41%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在59%?61% ；[0087]46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從39%?41%上升至89%?91%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從59%?61%下降至9%?11% ；
[0088](3)、根據(jù)所述待測溶液的指紋圖譜、預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品溶液的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間的線性曲線。
[0089]本發(fā)明提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法采用液相色譜進(jìn)行檢測，分離出了散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中的活性成分，得到的指紋圖譜中各活性成分的色譜峰的峰形較好，且各色譜峰之間具有較好的分離度，有利于計(jì)算色譜峰的峰面積，從而得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中各成分的含量。本發(fā)明提供的方法實(shí)現(xiàn)了對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中各活性成分的定量測定，從而能夠更真實(shí)的反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的品質(zhì)。
[0090]本發(fā)明將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液；優(yōu)選將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合后進(jìn)行成分提取，固液分離后得到待測溶液。本發(fā)明對所述固液分離的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的固液分離的技術(shù)方案即可，在本發(fā)明中，所述固液分離的方法優(yōu)選為過濾。本發(fā)明對所述過濾的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的過濾的技術(shù)方案即可；在本發(fā)明中，所述過濾的方法優(yōu)選為先進(jìn)行濾紙過濾，再將得到的濾液采用濾膜進(jìn)行過濾；所述濾紙優(yōu)選為定量濾紙；所述濾膜的孔徑優(yōu)選為0.20 μ m?0.24 μ m,更優(yōu)選為0.21 μ m?0.23 μ m，最優(yōu)選為0.22 μ m。
[0091]本發(fā)明對所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的形態(tài)沒有特殊的限制，可以直接將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，也可以將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品制備成粉末狀待測樣品。在本發(fā)明中，所述醇類化合物優(yōu)選為C原子數(shù)為I?5的醇類化合物，更優(yōu)選為甲醇或乙醇，最優(yōu)選為甲醇，最最優(yōu)選為無水甲醇；所述醇類化合物的純度優(yōu)選為分析純。本發(fā)明對所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品和醇類化合物的來源沒有特殊的限制，如可以由市場購買獲得，具體的，本發(fā)明可以采用江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊作為待測樣品；采用南京化學(xué)試劑公司提供的甲醇或乙醇。
[0092]在本發(fā)明中，所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物的質(zhì)量比優(yōu)選為1: (10?50)，更優(yōu)選為1: (20?45)，最優(yōu)選為1: (30?42)，最最優(yōu)選為1: (35?40)。本發(fā)明為了準(zhǔn)確得到上述質(zhì)量比例的待測溶液，優(yōu)選按照下述方法制備待測溶液:
[0093]精密稱定散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品后，向其中精密加入醇類化合物，將得到的混合溶液稱定重量后進(jìn)行成分提取，將成分提取后的溶液冷卻后再次稱定重量，用上述醇類化合物補(bǔ)足成分提取減失的重量，將補(bǔ)足重量后的溶液混合均勻后采用濾紙進(jìn)行過濾，再將得到的濾液采用濾膜再次過濾，得到待測溶液。在本發(fā)明中，所述精密稱定散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的稱量精度為0.0Olg，所述精密加入醇類化合物的精度為1% ;所述冷卻的溫度優(yōu)選為5°C?40°C，更優(yōu)選為10°C?35°C，最優(yōu)選為10°C?30°C。
[0094]本發(fā)明對所述混合、稱定重量、過濾、濾膜過濾、精密稱定、精密加入以及冷卻的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的混合、稱定重量、過濾、濾膜過濾、精密稱定、精密加入以及冷卻的技術(shù)方案即可，具體的，本發(fā)明可以采用搖勻的方法將上述溶液混合均勻；采用Mettler AE240型號的電子分析天平或BP211D型號的電子分析天平對上述混合溶液進(jìn)行稱定重量以及精密稱定散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品；采用自然冷卻的方法將上述成分提取后的溶液冷卻。[0095]在本發(fā)明中，所述成分提取的方法優(yōu)選為超聲波提取或回流提?。凰龀暡ㄌ崛〉某暪β蕛?yōu)選為240W?260W，更優(yōu)選為245W?255W，最優(yōu)選為250W ;所述超聲波提取的超聲頻率優(yōu)選為30KHz?50KHz，更優(yōu)選為35KHz?45KHz，最優(yōu)選為40KHz。所述回流提取的溫度優(yōu)選為80°C?98°C，更優(yōu)選為85°C?95°C，最優(yōu)選為90°C ;所述回流提取的時(shí)間優(yōu)選為40min?80min,更優(yōu)選為50min?70min,最優(yōu)選為60min。的時(shí)間優(yōu)選為；本發(fā)明更優(yōu)選采用超聲波進(jìn)行成分提取；本發(fā)明對所述超聲波提取采用的儀器沒有特殊的限制，如可以采用昆山市超聲儀器有限公司提供的KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器。在本發(fā)明中，所述成分提取的時(shí)間優(yōu)選為15min?60min,更優(yōu)選為20min?40min,最優(yōu)選為25min?35min。
[0096]得到待測溶液后，本發(fā)明將待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜。本發(fā)明優(yōu)選精密吸取待測溶液，將其注入液相色譜儀，進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜。在本發(fā)明中，所述精密吸取待測溶液的精度為1%;本發(fā)明對所述吸取的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的吸取的技術(shù)方案即可。在本發(fā)明中，所述待測溶液的用量優(yōu)選為3 μ L?8 μ L，更優(yōu)選為4 μ L?6 μ L，最優(yōu)選為5 μ L。在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為乙腈，所述流動相B為水或三氟乙酸，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100%。在本發(fā)明中，所述流動相B優(yōu)選為水，更優(yōu)選為超純水；所述乙腈和三氟乙酸的純度優(yōu)選為色譜純。本發(fā)明對所述乙腈、三氟乙酸和超純水的來源沒有特殊的限制，如可以由市場購買獲得，具體的，本發(fā)明可以采用美國天地公司提供的乙腈和三氟乙酸。
[0097]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，所述梯度洗脫具體為:
[0098]O?12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從12%?14%上升至17%?19%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從86%?88%下降至81%?83% ;優(yōu)選的，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從13%上升至18%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從87%下降至82% ；
[0099]12min?22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從17%?19%上升至27%?29%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從81%?83%下降至71%?73% ;優(yōu)選的，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從18%上升至28%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從82%下降至72% ；
[0100]22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從27%?29%上升至39%?41%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從71%?73%下降至59%?61% ;優(yōu)選的，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從28%上升至40%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從72%下降至60% ；
[0101]35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在39%?41%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在59%?61% ;優(yōu)選的，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在40%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在60% ；
[0102]46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從39%?41%上升至89%?91%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從59%?61%下降至9%?11% ;優(yōu)選的，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從40%上升至90%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從60%下降至10% ；
[0103]本發(fā)明對所述流動相的體積百分?jǐn)?shù)變化的方式?jīng)]有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的梯度洗脫中流動相的體積百分?jǐn)?shù)變化方式即可，如可以采用線性變化的方式，具體的，在本發(fā)明中，所述梯度洗脫中流動相A的體積百分?jǐn)?shù)優(yōu)選線性上升，流動相B的體積百分?jǐn)?shù)優(yōu)選線性下降。在本發(fā)明中，所述流動相的流速優(yōu)選為1.5mL.min-1?2.0mT,.min \ 更優(yōu)選為 1.6mL.min 1 ~1.8mL.min \ 最優(yōu)選為 1.7mL.min、
[0104]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測中的色譜柱優(yōu)選為Waters Symmetry@C18型號的色譜柱、Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 型號的色譜柱或 Phenomenex Kinetex2.6uC18100A型號的色譜柱，更優(yōu)選為Phenomenex Kinetex2.6u C18100A型號的色譜柱；在本發(fā)明中，所述色譜柱填充劑優(yōu)選為十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0105]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測的色譜柱柱溫優(yōu)選為30°C~45°C，更優(yōu)選為35°〇~421:，最優(yōu)選為40°C;所述液相色譜檢測的檢測器優(yōu)選為紫外檢測器，所述檢測的波長優(yōu)選為260nm~300nm,更優(yōu)選為270nm~290nm,最優(yōu)選為280nm。
[0106]本發(fā)明對所述液相色譜檢測使用的儀器沒有特殊的限制，可以采用Agilentl290型號的超高壓液相色譜儀或Agilentl200SL型號的液相色譜儀，采用DAD紫外檢測器。
[0107]得到所述待測溶液的指紋圖譜，本發(fā)明優(yōu)選根據(jù)所述待測溶液的指紋圖譜與預(yù)定的對照品溶液的指紋圖譜，對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品進(jìn)行定性檢測。在本發(fā)明中，所述預(yù)定的對照品溶液的指紋圖譜優(yōu)選按照以下步驟獲得:
[0108]制備對照品溶液；
[0109]將對照品溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到對照品溶液的指紋圖譜。
[0110]在本發(fā)明中，所述對照品優(yōu)選包括白藜蘆醇、7，4 ’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪。本發(fā)明優(yōu)選將白藜蘆醇、7，4’- 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪與醇類化合物混合，得到對照品溶液；更優(yōu)選精密稱定白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪后將其混合，再加入醇類化合物，得到對照品溶液。在本發(fā)明中，所述對照品溶液中白藜蘆醇的質(zhì)量濃度優(yōu)選為20 μ g/mL~40 μ g/mL,更優(yōu)選為25 μ g/mL~35 μ g/mL,最優(yōu)選為30 μ g/mL ;所述對照品溶液中7，4’ - 二羥基黃酮的質(zhì)量濃度優(yōu)選為20 μ g/mL~40y g/mL,更優(yōu)選為25 μ g/mL~35 μ g/mL,最優(yōu)選為30 μ g/mL ;所述對照品溶液中龍血素A的質(zhì)量濃度優(yōu)選為20 μ g/mL~40 μ g/mL,更優(yōu)選為25 μ g/mL~35 μ g/mL,最優(yōu)選為30 μ g/mL ;所述對照品溶液中龍血素B的質(zhì)量濃度優(yōu)選為30 μ g/mL~50 μ g/mL,更優(yōu)選為35 μ g/mL~45 μ g/mL,最優(yōu)選為40 μ g/mL ;所述對照品溶液中紫檀苗的質(zhì)量濃度優(yōu)選為90 μ g/mL~110 μ g/mL,更優(yōu)選為95 μ g/mL~105 μ g/mL,最優(yōu)選為100 μ g/mL。本發(fā)明對所述精密稱定和混合的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的精密稱定和混合的技術(shù)方案，將白藜蘆醇、7，4’- 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪與醇類化合物稱量準(zhǔn)確、混合均勻即可。
[0111]在本發(fā)明中，所述白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮和紫檀芪的純度優(yōu)選大于99wt%;所述醇類化合物與上述技術(shù)方案所述醇類化合物一致，在此不再贅述。本發(fā)明對所述白藜蘆醇、7，4’- 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪和醇類化合物的來源沒有特殊的限制，可以由市場購買獲得，具體的，本發(fā)明可以采用陜西永健制藥有限公司提供的白藜蘆醇、杭州廣林生物醫(yī)藥科技有限公司提供的紫檀芪、中國藥品`生物制品檢定所提供的用于含量測定的龍血素A和龍血素B ；中國食品藥品檢定研究院提供的7，4’- 二羥基黃酮；南京化學(xué)試劑公司提供的甲醇或乙醇。
[0112]得到對照品溶液后，本發(fā)明將得到的對照品溶液優(yōu)選按照上述技術(shù)方案所述的對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測的方法進(jìn)行液相色譜檢測，得到對照品溶液的指紋圖譜，在此不再贅述；[0113]得到對照品溶液的指紋圖譜后，本發(fā)明將對照品溶液的指紋圖譜與上述技術(shù)方案所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品待測溶液的指紋圖譜進(jìn)行比對，對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品進(jìn)行定性測定，指認(rèn)出散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品待測溶液的指紋圖譜中的色譜峰。本發(fā)明提供的方法能夠?qū)ι⒔Y(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品中的相關(guān)成分進(jìn)行定量的檢測，所述定量檢測的方法具體為:
[0114]根據(jù)預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線、上述技術(shù)方案得到的待測溶液的指紋圖譜與所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中成分的含量；在本發(fā)明中，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品溶液的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間的線性曲線，優(yōu)選按照以下方法獲得:
[0115]將所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品制備成系列濃度的對照品溶液；
[0116]將所述系列濃度的對照品溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到指紋圖譜；
[0117]根據(jù)所述指紋圖譜中各色譜峰的峰面積及對應(yīng)的對照品溶液中對照品的質(zhì)量濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0118]在本發(fā)明中，所述對照品優(yōu)選包括白藜蘆醇、7，4 ’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪；本發(fā)明優(yōu)選將白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪與醇類化合物混合，得到對照品溶液的母液，將所述母液用上述醇類化合物逐倍稀釋，得到系列濃度的對照品溶液；
[0119]本發(fā)明對所述混合和稀釋的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的制備對照品溶液的技術(shù)方案即可；本發(fā)明對所述母液中白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪的濃度以及所述母液稀釋的倍數(shù)沒有特殊的限制，能夠確定母液及其稀釋后的溶液中白藜蘆醇、7，4’-二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪的質(zhì)量濃度值即可；在本發(fā)明中，所述白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪與醇類化合物和上述技術(shù)方案所述白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B、紫檀芪與醇類化合物一致，在此不再贅述。
[0120]制備得到系列濃度的對照品溶液后，本發(fā)明分別對各濃度的對照品溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到指紋圖譜；在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測的方法與上述技術(shù)方案所述對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品樣品待測溶液的液相色譜檢測方法一致，在此不再贅述；
[0121]得到系列濃度對照品溶液的指紋圖譜后，本發(fā)明計(jì)算得到所述指紋圖譜中各色譜峰的峰面積。本發(fā)明在計(jì)算色譜峰面積的過程中優(yōu)選以龍血素B為參照物，本發(fā)明的檢測方法建立的指紋圖譜是主要針對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中龍血竭酚類化合物建立的指紋圖譜，發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，龍血素B在指紋圖譜中的保留時(shí)間適中，分離較好，對照品易得，因此選擇龍血素B作為參照物。本發(fā)明對所述計(jì)算色譜峰面積的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的計(jì)算色譜峰面積的技術(shù)方案即可，如本發(fā)明可以采用Agilent ChemStation軟件計(jì)算上述對照品溶液指紋圖譜中各色譜峰的峰面積。
[0122]得到所述對照品溶液指紋圖譜中各色譜峰的峰面積后，本發(fā)明根據(jù)所述色譜峰的峰面積及其對應(yīng)的對照品在對照品溶液中的質(zhì)量濃度，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明優(yōu)選將色譜峰的峰面積值作為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的對照品在對照品溶液中的質(zhì)量濃度值作為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0123]本發(fā)明優(yōu)選以白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪為對照品，分別得到白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在本發(fā)明中，所述白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y1=Ie.906\-51.701，其中Y1為指紋圖譜中白藜蘆醇的色譜峰面積，X1為待測溶液中白藜蘆醇的質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)R1為0.9999 ;所述7，4’ - 二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y2=15.722X2+0.4522，其中Y2為指紋圖譜中
7,4’ - 二羥基黃酮的色譜峰面積，X2為待測溶液中7，4’ - 二羥基黃酮的質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)民為I ;所述龍血素A標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y3=I0.217X3-1.162，其中Y3為指紋圖譜中龍血素A的色譜峰面積，X3為待測溶液中龍血素A的質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)R3為I ;所述龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y4=8.1063X4-2.4522，其中Y4為指紋圖譜中龍血素B的色譜峰面積，X4為待測溶液中龍血素B的質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)R4為I ;所述紫檀芪標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y5=14.5754XS-153.6806，其中Y5為指紋圖譜中紫檀芪的色譜峰面積，X5為待測溶液中紫檀芪的質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)R5為0.9998。
[0124]得到標(biāo)準(zhǔn)曲線后，本發(fā)明根據(jù)上述技術(shù)方案得到的待測溶液的指紋圖譜、所述標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到所述散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量。本發(fā)明優(yōu)選按照上述技術(shù)方案所述計(jì)算色譜峰面積的方法，計(jì)算得到待測溶液指紋圖譜中各色譜峰的峰面積，根據(jù)得到的各色譜峰的峰面積及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到待測溶液中各組分的質(zhì)量濃度；根據(jù)所述待測溶液的體積和待測溶液中各組分的質(zhì)量濃度，得到所述待測溶液中各組分的質(zhì)量；根據(jù)所述待測溶液中各組分的質(zhì)量和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含組分的含量。本發(fā)明優(yōu)選測定得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中白藜蘆醇、7，4’ - 二羥基黃酮、龍血素A、龍血素B和紫檀芪的含量。
[0125]本發(fā)明提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，采用液相色譜進(jìn)行檢測，分離出了散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中的活性成分，得到的指紋圖譜中各活性成分的色譜峰的峰形較好，且各色譜峰之間具有較好的分離度，有利于計(jì)算色譜峰的峰面積，從而得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中各成分的含量。本發(fā)明提供的方法實(shí)現(xiàn)了對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中各活性成分的定量測定，從而能夠更真實(shí)的反映散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的品質(zhì)。
[0126]本發(fā)明對提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法進(jìn)行了方法學(xué)的考察，主要包括:待測溶液和對照品溶液的穩(wěn)定性考察、精密度考察以及檢測方法的重復(fù)性考察；在進(jìn)行考察過程中測試了對照品的加樣回收率以及定量限與檢測限。本發(fā)明對所述穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性的考察方法以及加樣回收率和定量限與檢測限的檢測方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的考察穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性的技術(shù)方案以及檢測加樣回收率和定量限與檢測限的方法即可。
[0127]本發(fā)明待測溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果說明，本發(fā)明提供的方法制備的待測溶液在24小時(shí)內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；本發(fā)明對照品溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果說明，本發(fā)明提供的方法制備的對照品溶液在24小時(shí)內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；本發(fā)明待測溶液的精密度考察結(jié)果說明，本發(fā)明提供的方法制備的待測溶液具有良好的精密度；本發(fā)明對照品溶液的精密度考察結(jié)果說明，本發(fā)明提供的方法制備的對照品溶液具有良好的精密度；本發(fā)明檢測方法的重復(fù)性考察結(jié)果說明，本發(fā)明提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法具有良好的重復(fù)性；本發(fā)明對照品的加樣回收率檢測結(jié)果說明，本發(fā)明提供的檢測方法能準(zhǔn)確測定散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品中相關(guān)成分的含量；本發(fā)明對照品的定量限與檢測限的檢測結(jié)果為，白藜蘆醇的定量限為4.85ng、檢測限為1.21ng ；7, 4，- 二輕基黃酮的定量限為2.14ng、檢測限為1.07ng ;龍血素A的定量限為7.19ng、檢測限為0.90ng ;龍血素B的定量限為6.30ng、檢測限為1.58ng ;紫檀芪的定量限為7.41ng、檢測限為1.80ng，這說明，本發(fā)明提供的方法對散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含組分的測定具有較高的靈敏度。
[0128]為了進(jìn)一步了解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法進(jìn)行詳細(xì)描述，但不能將它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0129]以下各實(shí)施例中，液相色譜檢測采用的儀器為:Agilentl290超高壓液相色譜儀、DAD紫外檢測器；
[0130]超聲波提取采用的儀器為:KQ_250DB型數(shù)控超聲波清洗器；
[0131]稱定重量采用的儀器為:Mettler AE240電子分析天平和BP211D電子分析天平；
[0132]所用的散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供的散結(jié)鎮(zhèn)痛膠囊；所用的龍血素A的產(chǎn)品批號為111660-200402、龍血素B的產(chǎn)品批號為111558-200303，龍血素A和龍血素B均為中國藥品生物制品檢定所提供的用于含量測定的龍血素A和龍血素B ;所用的紫檀芪的產(chǎn)品批號為20110723，購買于杭州廣林生物醫(yī)藥科技有限公司；所用的白藜蘆醇購買于陜西永健制藥有限公司；所用的乙腈和三氟乙酸均為色譜純，購買于美國天地公司；所用的甲醇和乙醇均為分析純，購買于南京化學(xué)試劑公司；7，4’ - 二羥基黃酮購買于中國食品藥品檢定研究院。
[0133]實(shí)施例1
[0134]精確稱量散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品粉末樣品lg，將其置于具塞錐形瓶中，向具塞錐形瓶中精密加入無水乙醇25mL，將得到的混合溶液采用250W、40KHz的超聲波進(jìn)行成分提取30分鐘，將成分提取后的溶液冷卻到10°C，將冷卻后的溶液過濾，取續(xù)濾液過0.22 μ m的濾膜，得到待測溶液；
[0135]將上述制備得到的待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，檢測的條件具體為:
[0136]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填充劑；
[0137]色譜柱型號為Phenomenex Kinetex2.6u C18100A,色譜柱柱長為100mm,內(nèi)徑為
4.6mm，粒徑為 2.6 μ m ;
[0138]色譜柱柱溫為40°C;
[0139]以乙腈為流動相A，以超純水為流動相B，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100%，進(jìn)行梯度洗脫:
[0140]O?12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從13%線性上升至18%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從87%線性下降至82% ；
[0141]12min?22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從18%線性上升至28%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從82%線性下降至72% ；
[0142]22min?35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從28%線性上升至40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從72%線性下降至60% ；
[0143]35min?45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在60% ；
[0144]46min?55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從40%線性上升至90%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從60%線性下降至10% ；
[0145]所述流動相A和流動相B的流速為1.7mL.mirT1 ；[0146]檢測波長為280nm。
[0147]將本發(fā)明實(shí)施例1制備的待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測得到的指紋圖譜如圖1所示，圖1為本發(fā)明實(shí)施例1得到的待測溶液的指紋圖譜，根據(jù)得到的指紋圖譜計(jì)算實(shí)施例1得到的待測溶液中主要成分的含量，所述待測溶液中主要成分的含量以單位質(zhì)量的主要成分的峰面積表示，計(jì)算方法為將指紋圖譜中主要成分的峰面積乘以待測溶液的稀釋倍數(shù)除以待測溶液的取樣量，計(jì)算結(jié)果如表1所示，表1為本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2得到的待測溶液中主要成分的含量。
[0148]實(shí)施例2
[0149]采用實(shí)施例1的技術(shù)方案檢測得到待測溶液的指紋圖譜，并根據(jù)得到的指紋圖譜計(jì)算指紋圖譜中色譜峰的；不同的是，本實(shí)施例采用回流提取的方法替換實(shí)施例1中的超聲提取，回流提取的時(shí)間為60分鐘；檢測結(jié)果如圖2和表1所示，圖2為本發(fā)明實(shí)施例2得到的待測溶液的指紋圖譜。
[0150]表1本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2得到的待測溶液中主要成分的含量
【權(quán)利要求】
1.一種散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品的檢測方法，包括以下步驟: (1)、將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品與醇類化合物混合，得到待測溶液； (2)、將所述待測溶液進(jìn)行液相色譜檢測，得到所述待測溶液的指紋圖譜，所述液相色譜檢測中的流動相包括流動相A和流動相B,所述流動相A為乙腈,所述流動相B為水或三氟乙酸，所述流動相A和流動相B的體積百分?jǐn)?shù)之和為100% ； 所述液相色譜檢測的洗脫程序?yàn)樘荻认疵?，所述梯度洗脫? O~12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從12%~14%上升至17%~19%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從86%~88%下降至81%~83% ； 12min~22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從17%~19%上升至27%~29%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從81%~83%下降至71%~73% ； 22min~35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從27%~29%上升至39%~41%，所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從71%~73%下降至59%~61% ； 35min~45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在39%~41%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在59%~61% ； 46min~55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從39%~41%上升至89%~91%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從59%~61%下降至9%~11% ； (3)、根據(jù)所述待測 溶液的指紋圖譜、預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)曲線和散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品的質(zhì)量，得到散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品中所含成分的含量，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品所含成分的對照品溶液的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間的線性曲線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇類化合物為C原子數(shù)為I~5的醇類化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述醇類化合物為乙醇或甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述醇類化合物為無水甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫具體為: O~12min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從13%上升至18%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從87%下降至82% ； 12min~22min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從18%上升至28%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從82%下降至72% ； 22min~35min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從28%上升至40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從72%下降至60% ； 35min~45min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)保持在40%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)保持在60% ； 46min~55min內(nèi)，所述流動相A的體積百分?jǐn)?shù)從40%上升至90%,所述流動相B的體積百分?jǐn)?shù)從60%下降至10%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相的流速為1.5mL.min-1~2.0mT,.mirf1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色譜檢測的檢測器為紫外檢測器； 檢測波長為260nm~300nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色譜檢測中的色譜柱柱溫為30°C~45°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)為: 將散結(jié)鎮(zhèn)痛藥品待測樣品溶于醇類化合物中，超聲提取，得到待測溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述超聲提取的時(shí)間為15分鐘~60分 鐘。
【文檔編號】G01N30/06GK103760276SQ201310648506
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月4日
【發(fā)明者】蕭偉, 王振中, 秦建平, 李家春, 陳寶來, 文紅梅, 吳建雄 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司