酸性橙Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法
【專利摘要】酸性橙Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，涉及一種標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，所述方法包括酸性橙Ⅱ的合成與純化：在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水鹽酸，均勻加入對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液和亞硝酸鈉溶液混合物，保持酸過量，得到懸浮體的重氮液；在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水、2-萘酚，攪拌下加入液堿，升溫使之溶解后加冰冷卻，加鹽，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽，然后將另一半重氮鹽均勻加完，并調(diào)整pH值再加鹽，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終點(diǎn)，壓濾，濾餅烘干得產(chǎn)品；該方法制得純度高、含量準(zhǔn)確、均勻性和穩(wěn)定性均符合要求的標(biāo)準(zhǔn)樣品，解決我國(guó)檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)品依賴進(jìn)口，為我國(guó)食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)提供全面實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)保障，為我國(guó)各級(jí)政府食品安全監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。
【專利說明】酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)樣品的制備方法，特別是涉及一種酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]標(biāo)準(zhǔn)樣品是具足夠均勻的一種或多種化學(xué)的、物理的、生物學(xué)的、工程技術(shù)的或感官的等性能特征，經(jīng)技術(shù)鑒定，并附有說明有關(guān)性能數(shù)據(jù)證書的一批樣品。是以其性質(zhì)與供試樣品進(jìn)行比較的質(zhì)量均一的實(shí)物樣品，并且有適合使用目的的純度。
[0003]酸性橙II又名金橙I1、二號(hào)橙、桔黃橙或酸性金黃II，俗名金黃粉，化學(xué)名為2-萘酚偶氮對(duì)苯磺酸鈉，是一種酸堿指示劑。醫(yī)學(xué)上用于組織切片染色，在紡織上用作著色劑。酸性橙II屬非食用色素，食品中不允許加入。但是由于酸性橙II色澤鮮艷、著色穩(wěn)定、價(jià)廉等特點(diǎn)，一些不法商販為了牟取暴利將其用于食品生產(chǎn)與加工，嚴(yán)重危害了消費(fèi)者身體健康。
[0004]因此，及時(shí)準(zhǔn)確判斷食品中是否存在這三種非食用色素，建立快速、準(zhǔn)確的食品中非食用色素酸性橙II的測(cè)定方法是非常必要的。而進(jìn)行定量方法的開發(fā)就需要高純度的標(biāo)準(zhǔn)品，采用標(biāo)準(zhǔn)樣品，才能保證檢測(cè)結(jié)果在國(guó)際交往中的準(zhǔn)確性、可比性、可溯源性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，該方法制得純度高、含量準(zhǔn)確、均勻性和穩(wěn)定性均符合要求的標(biāo)準(zhǔn)樣品，解決我國(guó)檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)品依賴進(jìn)口，為我國(guó)食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)提供全面實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)保障，為我國(guó)各級(jí)政府食品安全監(jiān)控提供了技術(shù)支撐。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，所述方法包括酸性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水鹽酸，均勻加入對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液和亞硝酸鈉溶液混合物，保持酸過量，得到懸浮體的重氮液；在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水、2-萘酚，攪拌下加入液堿，升溫使之溶解后加冰冷卻，加鹽，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽，然后將另一半重氮鹽均勻加完，并調(diào)整PH值再加鹽，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終點(diǎn)，壓濾，濾餅烘干得產(chǎn)品；粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進(jìn)行分離，甲醇與三氯甲烷比列為1:16時(shí)；樣品進(jìn)行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品取粗品與硅膠攪拌均勻后，裝柱后依次用石油醚潤(rùn)洗、二氯甲烷洗滌后，用二氯甲烷/甲醇洗脫目的物，洗脫液在避光條件下?lián)]干待測(cè)；在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水10 mL和36%的鹽酸2.50 g，控制反應(yīng)溫度為10_15°C，于10 min左右均勻加入 15%的對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液2.0 g和30%的亞硝酸鈉溶液10 mL的混合物，于10-15°C，保持酸過量，亞硝酸微過量的條件下攪拌0.5 h，得到懸浮體的重氮液；在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水5 11^，2-萘酚1.62 g，攪拌下加入30%的液堿1.63 g，升溫到45-500C，使之溶解后加冰冷卻到8°C，加鹽0.5 g，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽1.0g，然后將另一半重氮鹽在I h內(nèi)均勻加完，并調(diào)整pH值為I左右攪拌I h，再加鹽2 g，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終，I h，壓濾，濾餅于100-105°C烘干，得產(chǎn)品10 g。
[0007]所述的酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，所述酸性橙II的合成與純化:粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進(jìn)行分離，甲醇與三氯甲烷比列為1:16時(shí)，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到很好的分離；樣品進(jìn)行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品。取1.2 g粗品與25 g硅膠100-140目攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤(rùn)洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇16:1洗脫目的物，洗脫液在避光條件下?lián)]干待測(cè)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1為本發(fā)明酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)樣品的液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合附圖所示實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述。
[0010]實(shí)施例1:
酸性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水10 mL和36%的鹽酸2.50 g，控制反應(yīng)溫度為10-15°C，于10 min左右均勻加入15%的對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液2.0 g和30%的亞硝酸鈉溶液10 mL的混合物，于10-15°C，保持酸過量，亞硝酸微過量的條件下攪拌0.5 h，得到懸浮體的重氮液。
[0011]在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水5 11^，2-萘酚1.62 g，攪拌下加入30%的液堿1.63 g，升溫到45-50°C，使之溶解后加冰冷卻到8°C，加鹽0.5 g，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽1.0 g，然后將另一半重氮鹽在I h內(nèi)均勻加完，并調(diào)整pH值為I左右攪拌I h，再加鹽2 g，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終點(diǎn)(約I h)。壓濾，濾餅于100-105°C烘干，得產(chǎn)品
約 10 go
[0012]粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進(jìn)行分離，甲醇與三氯甲烷比列為1:16時(shí)，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到很好的分離；樣品進(jìn)行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品。取1.2 g粗品與25 g硅膠(100-140目)攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤(rùn)洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇(16:1)洗脫目的物，洗脫液在避光條件下?lián)]干待測(cè)。
[0013]將上述制得酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)品，用棕色瓶進(jìn)行分裝，編號(hào)后置于室溫、通風(fēng)密封保存即可。
[0014]進(jìn)行純度檢查及含量測(cè)定:
薄層色譜純查，HPLC純度檢查:在酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備中，選擇HPLC峰面積歸一法進(jìn)行含量測(cè)定。
[0015]所用儀器及條件:高效液相色譜儀(島津LC-20A)，配二極管陣列檢測(cè)器或可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；色譜柱:C18 (250 mmX4.6mm, 5 μπι)或相當(dāng)者。
[0016]操作條件:酸性橙I1:流動(dòng)相:甲醇/ (20 mM)醋酸銨=60/40 ;流速:1.0 mL/min ；柱溫:25 V ;檢測(cè)波長(zhǎng):480 nm ;進(jìn)樣量:10 μ L。定量測(cè)定:測(cè)試液配置:準(zhǔn)確稱取1.0 g的樣品，經(jīng)50 mL乙醇溶解，水稀釋定容后，配制成10 mg/L的樣液，在上述液相色譜法條件下進(jìn)行面積歸一法定量。色譜條件應(yīng)保證試樣中所有雜質(zhì)能夠與待測(cè)物分離，并且酸性橙II的保留時(shí)間合適。進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算試樣中酸性橙II的純度。在所選擇的色譜條件下，酸性橙II的保留時(shí)間為6.41 min。
[0017]儀器與設(shè)備:高效液相色譜儀(日本島津公司LC-20A)，紫外-可見分光光度儀(日本島津公司)，液質(zhì)質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)AB公司)，IN0VA-600核磁共振儀(Varian公司)。
[0018]材料與試劑:濃鹽酸、苯胺、亞硝酸鈉、尿素、間苯二胺、對(duì)氨基苯磺酸鈉、2-萘酚、氯化鈉、乙二醇、4，4 一二甲氨基二苯甲烷、硫磺、氯化氨、分析純95%乙醇、分析純甲醇(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)。液相用甲醇(色譜純，TEDIA COMPANY );水為去離子水。
【權(quán)利要求】
1.酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，其特征在于，所述方法包括酸性橙II的合成與純化:在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水鹽酸，均勻加入對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液和亞硝酸鈉溶液混合物，保持酸過量，得到懸浮體的重氮液；在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水、2-萘酚，攪拌下加入液堿，升溫使之溶解后加冰冷卻，加鹽，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽，然后將另一半重氮鹽均勻加完，并調(diào)整PH值再加鹽，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終點(diǎn)，壓濾，濾餅烘干得產(chǎn)品；粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進(jìn)行分離，甲醇與三氯甲烷比列為1:16時(shí)；樣品進(jìn)行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品取粗品與硅膠攪拌均勻后，裝柱后依次用石油醚潤(rùn)洗、二氯甲烷洗滌后，用二氯甲烷/甲醇洗脫目的物，洗脫液在避光條件下?lián)]干待測(cè)；在三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水10 mL和36%的鹽酸2.50 g，控制反應(yīng)溫度為10-15°C，于10 min左右均勻加入15%的對(duì)氨基苯磺酸鈉溶液2.0 g和30%的亞硝酸鈉溶液10 mL的混合物，于10-15°C，保持酸過量，亞硝酸微過量的條件下攪拌0.5h，得到懸浮體的重氮液；在另一三口反應(yīng)瓶?jī)?nèi)加水5 11^，2-萘酚1.62 g，攪拌下加入30%的液堿1.63 g，升溫到45-50°C，使之溶解后加冰冷卻到8°C，加鹽0.5 g，快速加入重氮鹽全量的一半，再加鹽1.0 g，然后將另一半重氮鹽在I h內(nèi)均勻加完，并調(diào)整pH值為I左右攪拌I h，再加鹽2 g，繼續(xù)攪拌至重氮鹽消失為偶合終，I h，壓濾，濾餅于100-105°C烘干，得產(chǎn)品10 go
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酸性橙II標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)樣品的制備方法，其特征在于，所述酸性橙II的合成與純化:粗品經(jīng)過重結(jié)晶分離后，采用薄層色譜進(jìn)行分離，甲醇與三氯甲烷比列為1:16時(shí)，在薄層上主產(chǎn)物與其他雜質(zhì)得到很好的分離；樣品進(jìn)行硅膠柱凈化，甲醇與三氯甲烷混合液梯度洗脫，洗脫液氮吹后干燥的純品；取1.2 g粗品與25 g硅膠100-140目攪拌均勻后，裝柱后依次用100 mL石油醚潤(rùn)洗、200 mL 二氯甲烷洗滌后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇16:1洗脫目的 物，洗脫液在避光條件下?lián)]干待測(cè)。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK103792309SQ201410029777
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月22日
【發(fā)明者】李乃潔, 蘇錫輝, 張凱, 周長(zhǎng)民, 劉然, 楊春暉 申請(qǐng)人:沈陽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院