一種高效液相色譜法檢測多抗霉素b的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法，采用如下色譜條件：色譜柱：以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；流動相：有機相-水相；流速：0.5-1.5mL/min；檢測波長：240-290nm；柱溫：10-40℃；進樣量：5-20μL；檢測器采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器。與現(xiàn)有技術中的生測法、HPLC法相比，本發(fā)明通過所述色譜柱與所述流動相的配合使用，取得了很好的分離度良好，準確度高，通過本檢測方法使多抗霉素B與結構相似的同系物達到很好的分離，提高了多抗霉素B檢測的準確度；該檢測方法的運行時間短；多抗霉素B主峰出峰時間在8min。
【專利說明】一種高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)藥檢測分析【技術領域】，具體涉及一種多抗霉素B的高效液相色譜檢測方法。
【背景技術】
[0002]多抗霉素又叫多氧霉素，在日本是從可可鏈霉菌素阿索變種(S.cacaoi var.asoensis)中分離到一種核苷類抗生素。而在我國是金色產(chǎn)色鏈霉菌(S.aureachromogenes 4896)的代謝產(chǎn)物。
[0003]多抗霉素是由A至N共14種不同的同系物組成的混合物，主要活性成分為多抗霉素B，屬于多氧嘧啶核苷類農(nóng)用抗生素類殺菌劑，能有效地抑制真菌細胞壁骨架成分——幾丁質的合成，使菌體細胞壁不能進行生物合成導致病菌死亡。多抗霉素B是一種高效、低毒、無環(huán)境污染的安全農(nóng)藥，所以被廣泛用于蘋果斑點落葉病、煙草赤星病、三七黑斑病等病害的防治。
[0004]目前關于多抗霉素B檢測方法的報道有生測法、HPLC法。如中國專利申請200810039564.0多氧霉素B的定量分析檢測方法，報道了多氧霉素B的牛津杯生物測定法，該檢測方法缺點:可靠性差，檢測時間較長。
[0005]如《化學分析計量》1999第8卷第3期的《用液相色譜二極管陣列檢測器測定多氧霉素B》公開了一種檢測多氧霉素B的HPLC方法，色譜條件:色譜柱:YWG-CN，250mmX4.5mm,粒徑5 μ m,檢測波長:270nm,流速:0.8mL/min,流動相:pH=4乙酸銨緩沖溶液。如《農(nóng)藥》2008年第47卷第3期的《多抗霉素B的高效液相色譜分析方法》公開了一種多抗霉素B的HPLC方法，色譜條件:色譜柱:Kromasil C18不銹鋼色譜柱，250mmX4.6 mm (5 μ m),檢測波長262 nm,流速:0.6 mL/min,柱溫:30°C，進樣量5 μ L，流動相:甲醇-水(用磷酸調ρΗ=4.0)(體積比 10:90)。
[0006]多抗霉素B與多抗霉素同系物結構相似，在HPLC檢測中，容易受到某些同系物的干擾。在現(xiàn)有HPLC檢測方法中，多抗霉素B和某些同系物之間不能達到較好的分離，影響分析的準確性。因此，本領域迫切需要一種分離度良好，運行時間短的檢測多抗霉素B的方法。

【發(fā)明內容】

[0007]為了解決現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明旨在提供一種準確、快速的高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法，實現(xiàn)多抗霉素B與其他同系物的分離，從而達到產(chǎn)品質量的控制。
[0008]本發(fā)明提供的高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法，采用如下色譜條件: 色譜柱:以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；
流動相:有機 相-水相；
流速:0.5 -1.5 mL/min,優(yōu)選 1.0 mL/min ； 檢測波長:240-290nm，優(yōu)選260nm ；
柱溫:10-40°C，優(yōu)選 25°C ；
進樣量:5-20 μ L，優(yōu)選10 μ L ;
檢測器:紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
[0009]在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，上述以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，優(yōu)選以嵌入極性基團的十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱。
[0010]在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述流動相中的有機相選自甲醇、乙腈。
[0011]在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述流動相中的水相含有三氟乙酸，三氟乙酸的濃度范圍為0.05%-0.13% (以重量百分比計)，優(yōu)選0.1%。
[0012]在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述流動相中有機相-水相的體積比例為O:100-3:94，優(yōu)選 0:100。
[0013]在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，所述的色譜柱和流動相配合使用。
[0014]本發(fā)明還提供一種高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法，通過以下步驟實現(xiàn): (O稱取含適量多抗霉素B的標品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過
0.45 μ m濾膜，備供試標品溶液用。
[0015](2)稱取含適量多抗霉素B的樣品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過
0.45 μ m濾膜，備供試樣品溶液用。
[0016](3)取供試標品和樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按照上述條件進行高效液相色譜分析。
[0017]與現(xiàn)有技術中的生測法、HPLC法相比，本發(fā)明通過所述色譜柱與所述流動相的配合使用，分離度良好，準確度高，通過本檢測方法使多抗霉素B與結構相似的同系物達到很好的分離，提高了多抗霉素B檢測的準確度；該檢測方法的運行時間短；多抗霉素B主峰出峰時間在8min。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]下面結合附圖對本發(fā)明進一步說明:
圖1:按照實施例1條件分離的多抗霉素B樣品高效液相色譜圖；
圖2:按照實施例2條件分離的多抗霉素B樣品高效液相色譜圖；
圖3:按照實施例3條件分離的多抗霉素B樣品高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0019]下面結合實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施例。
[0020]實施例1
試驗儀器和條件:
Waters 1525高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器；
色譜柱:嵌入極性基團的C18 (250 X 4.6mm，5 μ m)；
流動相:0.1%三氟乙酸水溶液；
流速:1.0 mL/min ； 檢測波長:260nm ；
柱溫:25°C ；
進樣量:10 μ L。
[0021]試驗步驟:
稱取含0.02g多抗霉素B標品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過0.45 μ m濾膜，備供試標品溶液用。
[0022]稱取含0.02g多抗霉素B樣品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過
0.45 μ m濾膜，備供試樣品溶液用。
[0023]取上述供試標品和樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按照上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見圖1，多抗霉素B主峰出峰時間為8.97min。
[0024]實施例2
試驗儀器和條件:
Waters 1525高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器；
色譜柱:嵌入極性基團的C18 (250 X 4.6mm，5 μ m)；
流動相:0.05%三氟乙酸水溶液；
流速:0.8 mL/min ；
檢測波長:260nm ；
柱溫:25°C ；
進樣量:10yL ;
試驗步驟:
稱取含0.02g多抗霉素B標品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過0.45 μ m濾膜，備供試標品溶液用。
[0025]稱取含0.02g多抗霉素B樣品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過
0.45 μ m濾膜，備供試樣品溶液用。
[0026]取上述供試樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按照上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見圖2，多抗霉素B主峰出峰時間為8.92min。
[0027]實施例3
試驗儀器和條件:
Waters 1525高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器；
色譜柱:嵌入極性基團的C18 (250 X 4.6mm，5 μ m)；
流動相:甲醇:0.13%三氟乙酸水溶液=3%:97% ；
流速:0.8 mL/min ；
檢測波長:260nm ；
柱溫:25°C ；
進樣量:10yL ;
試驗步驟:
稱取含0.02g多抗霉素B標品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過0.45 μ m濾膜，備供試標品溶液用。
[0028]稱取含0.02g多抗霉素B樣品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過0.45 μ m濾膜，備供試樣品溶液用。
[0029]取上述供試標品和樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按照上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見圖3，多抗霉素B主峰出峰時間為8.68min。
[0030]分析方法的線性相關性試驗
取供試標品溶液，按照本發(fā)明檢測方法進行分析，進樣量分別為2、4、6、8、10yL，以多抗霉素B質量為橫坐標，峰面積為縱坐標制作標準曲線，得線性方程為Y=483.52Χ+15.856，相關系數(shù)為0.9989。
[0031]分析方法的準確度試驗
于已知質量分數(shù)的多抗霉素B樣品中稱取5個試樣，分別加入一定量多抗霉素B標品，按照本發(fā)明檢測方法進行分析，測得多抗霉素B平均回收率為98.98%。
【權利要求】
1.一種高效液相色譜法檢測多抗霉素B的方法，其特征在于，采用如下色譜條件: 色譜柱:以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相； 流動相:有機相-水相；
流速:0.5 -1.5 mL/min ； 檢測波長:240-290nm ； 柱溫:10-40 0C ； 進樣量:5-20yL ； 檢測器采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，流速為1.0 mL/min，檢測波長為260nm，柱溫為25°C，進樣量為10 μ L。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述以嵌入極性基團的烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱為以嵌入極性基團的十八`烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相中的有機相選自甲醇、乙腈，所述流動相中的水相含有三氟乙酸，三氟乙酸的濃度范圍為0.05%-0.13%。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述流動相中有機相-水相的體積比例為O:100-3:94。
6.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，三氟乙酸的濃度范圍為0.1%。
7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述流動相中有機相-水相的體積比例為0:100。
8.根據(jù)權利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn):(O稱取含適量多抗霉素B的標品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過`0.45 μ m濾?旲，備供試標品溶液用；(2)稱取含適量多抗霉素B的樣品，于50mL容量瓶中，用純水溶解、定容、搖勻，過`0.45 μ m濾膜，備供試樣品溶液用； (3)取供試標品和樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按照權利要求1-7中任一項所述的條件進行高效液相色譜分析。
【文檔編號】G01N30/02GK103776929SQ201410031427
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月23日 優(yōu)先權日:2014年1月23日
【發(fā)明者】顏瑞莉, 楊宏勃, 李蒲民 申請人:陜西綠盾生物制品有限責任公司