一種用于tafi含量體外檢測的試劑盒及其體外檢測方法【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測凝血酶激活的纖溶抑制物（thrombin-activatable?fibrinolysis?inhibitor，簡稱TAFI）含量的新方法，特別是TAFI含量的體外檢測方法。試劑盒由TAFI快速檢測試紙、樣本稀釋液組成，其中TAFI快速檢測試紙由PVC板條、樣品墊、金墊、NC膜和吸水紙組成；樣本稀釋液為磷酸鹽緩沖液（pH7.0）。所述NC膜由T線和C線組成。酸鹽緩沖液配置方法為：取磷酸二氫鉀0.68g加0.1mol/L?NaOH溶液29.1ml，用水稀釋至100ml。所述試劑盒示蹤標志物為膠體金?！緦＠f明】一種用于TAFI含量體外檢測的試劑盒及其體外檢測方法【
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】[0001]本發(fā)明涉及一種檢測凝血酶激活的纖溶抑制物(thrombin-activatabIefibrinolysisinhibitor,簡稱TAFI)含量的新方法,特別是TAFI含量的體外檢測方法?！?br>背景技術：
】[0002]眾所周知，血栓性疾病是一類嚴重影響健康的疾病，尤其是心腦血管栓塞性疾病已成為我國人口死亡的首位原因。由于血栓性疾病的臨床表現(xiàn)千差萬別，診斷和治療往往非常復雜，因此，早期發(fā)現(xiàn)、早期治療尤為重要。目前，血栓性疾病的檢查方法主要有心電圖、超聲心動圖、胸部X射線、血壓監(jiān)測、頭顱X射線、腦CT掃描、腦MRI檢查、DSA、MRA、經顱多普勒超聲檢查等。射線類檢查會對人體產生一定程度的電離輻射，組織血流灌注的功能性成像檢查方法較多，這些檢查設備通常比較昂貴，增加了成本，有的還需特殊裝備，成像時間較長，無法短期獲得結果。在醫(yī)學檢驗中，尚缺乏一種簡單、快捷、準確的用于臨床預測心腦血管疾病等發(fā)生可能性的檢測方法，不利于對疾病的早期發(fā)現(xiàn)，早期治療。[0003]據相關文獻報導，TAFI具有被凝血酶激活后下調纖溶活性的功能，是一種存在于血漿中的含金屬Zn的羧肽酶前體，又被稱為血漿羧肽酶原B、血漿羧肽酶原U、血漿羧肽酶原R。TAFI前體由肝臟合成，是一條包含423個氨基酸的單鏈糖蛋白，在循環(huán)至血液中的過程中，切掉N端22個氨基酸的信號肽，形成401個氨基酸的56kDa的TAFI；TAFI也存在于血小板內，血小板激活時釋放至血液。凝血酶、胰蛋白酶、纖溶酶等蛋白水解酶可以作用于TAFI的Arg92，將其切割成20kDa的激活肽和具有羧肽酶活性的36kDa的TAFIa。TAFIa具有切除部分降解的纖維蛋白C端Arg或Lys的能力，使纖溶蛋白酶原不能被激活，因而具有下調纖溶系統(tǒng)的功能，但其構象具有高度不穩(wěn)定性。[0004]TAFI于1988年被首次發(fā)現(xiàn)，活化后具有內在不穩(wěn)定性，通常在37°C條件下孵育2h失去活性，并且能特異性地分解底物上精氨酸。后經多位科技工作者對其cDNA進行分離以及測定，并利用纖溶酶原-瓊脂糖柱層析的方法從血漿中分離、提純其酶原蛋白pro-pCPB，進一步分析發(fā)現(xiàn)TAFI通過凝血酶激活后具有羧肽酶活性，發(fā)揮纖溶抑制作用。[0005]TAFI與心腦血管疾病有一定關系。動脈粥樣硬化(atherosclerosis,簡稱AS)是缺血性心腦血管疾病(如心絞痛、心肌梗死、腦卒中等)共同的病理基礎,也是導致血管內血栓形成的主要原因。近幾年的研究表明，AS的發(fā)生發(fā)展與炎癥、凝血-纖溶調節(jié)系統(tǒng)密切相關。目前研究表明，TAFI通過降低纖溶活性可促進靜脈血栓的形成，血漿高TAFI水平能增加靜脈血栓事件。[0006]目前，用來檢測TAFI水平的方法主要有兩類，一類是通過測定酶活力的方法間接測定TAFI含量，即利用凝血酶和凝血酶調節(jié)蛋白激活TAFIdIUSTAFIa的酶活力；另一類是免疫學方法，包括酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)和火箭免疫電泳。其中，夾心ELISA法檢測TAFI抗原是目前相對成熟的檢測方法，檢測靈敏度高，特異性強，準確性好，檢測方法安全易行。2005年出現(xiàn)了兩種針對TAFI的特異性單克隆抗體，成功運用ELISA方法檢測TAF1、TAFIa和失活的TAFI。但這些方法因自身存在一定的缺陷，都沒有成為國際公認的TAFI參照標準法?！?br/>發(fā)明內容】[0007]本發(fā)明的目的是提供一種TAFI含量的體外檢測方法，它解決了現(xiàn)有技術存在的設備昂貴，檢測時間較長等缺陷，與其它檢測方法相比，具有操作簡便、快捷、成本低廉，診斷敏感，檢出限低等優(yōu)點，作為用于臨床預測心腦血管疾病的輔助診斷，可顯著提高疾病的檢出率和準確率，有利于疾病的早期發(fā)現(xiàn)，早期治療；減少被檢者不必要的痛苦和醫(yī)療費用支出，提高被檢者的生存質量。[0008]其具體技術方案為:[0009]一種用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，由TAFI快速檢測試紙、樣本稀釋液組成，其中TAFI快速檢測試紙由PVC板條、樣品墊、金墊、NC膜和吸水紙組成；樣本稀釋液為磷酸鹽緩沖液(PH7.0)。[0010]所述NC膜由T線和C線組成。[0011]酸鹽緩沖液配置方法為:取磷酸二氫鉀0.68g加0.lmol/LNaOH溶液29.1ml,用水稀釋至100ml。[0012]所述試劑盒示蹤標志物為膠體金。[0013]TAFI快速檢測試紙的制備方法為:[0014]a.金墊的制備[0015]I)取Iml膠體金加0-6uI的0.2MK2CO3,混合后再加入10_20ug濃度為3.68mg/ml的4E7抗體，得到體積為2.7-5.4uI的4E7抗體，混勻靜置5_20min，加5-20uIBSA、PEG或者Casein-Na封閉，再次混勻靜置5_200min(200分鐘那么久嗎請確認是否為20min),離心5-10min(9000r/min),棄上清,沉淀用30-100uI復溶液復溶；2)取Iml膠體金，加0-6uI的0.2MK2CO3,混合后再加入15-25ug濃度為10mg/ml的兔IgG，得到體積為1.5-2.5uI兔IgG,混勻靜置IOmin,加5-20u120%的BSA,PEG或者Casein-Na溶液，混勻靜置5-20min，離心5-10min(9000r/min)，棄上清，沉淀用50uI復溶液復溶；[0016]3)噴金:將4E7抗體和兔IgG各復溶的50uI兩者1:1混合至100u1，混合后的樣本通過加壓的方式，以霧狀均勻噴在玻璃纖維素膜上，45°C烘干0.5h-2h，密封干燥保存即為金墊，。[0017]b.NC膜的制備[0018]包被工藝:將3B1抗體用PBS稀釋至0.3-0.8mg/ml，羊抗兔用PBS稀釋至1.5mg/ml分別固定在NC膜上T線和C線位置上，包被后室溫晾干后，密封干燥保存待用；[0019]c.安裝[0020]將樣本墊、金墊、PVC板、固定好抗體的NC膜、吸水紙組裝成試紙條即可，所述樣本墊采用玻璃纖維素膜。[0021]試紙制作完成后直接裝入卡殼中，卡殼上對應試紙條的樣品墊處設置一個加樣孔。[0022]復溶液為TrisO-0.5%；pvp400-l%;BSA0_1%；PEG200000-0.5%；10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；10%疊氮鈉2/萬，余量為水。[0023]所述試劑盒檢測的血清或血漿樣本中標志物的濃度范圍為5_40ug/ml.樣本稀釋400-600倍使用。樣本值過高時增加稀釋倍數(shù)使用，稀釋后的樣本使用量為60-80ul。[0024]所述試劑盒檢測結果以T/C比值為測試值，即T線檢測值和C線檢測值之比為最終測試值。所述快速檢測試紙，檢測時間為5-20min。[0025]步驟一采集人個體生物樣品立即于30分鐘內，4°C條件下離心取上清或樣本靜止后的上清作為待檢樣品，置于冰盒I小時內使用或_20°C保存?zhèn)溆?；[0026]步驟二取樣本，用樣本稀釋液進行稀釋，可采用一步稀釋或兩步稀釋均可，稀釋倍數(shù)為400-600倍，稀釋后將樣本加到相應加樣孔內，IOmin后將樣本放入檢測儀器中，即可得出檢測最終結果。[0027]標記抗體是針對重組人TAFI抗原所制備的鼠抗人單克隆抗體，所述鼠抗人單克隆抗體包含3B1和4E7，所述3B1為特異性結合TAFI和失活的TAFI，所述4E7僅與TAFI結八口ο[0028]試紙條是由金墊、包被抗體的NC膜、吸水紙、樣品墊、PVC板組成。[0029]金墊是4E7與帶負電荷的20_40nm的膠體金結合后的偶聯(lián)物混合，在室溫條件下反應10?15分鐘后，使用10%BSA、10%PEG二者1:1的混合混合封閉后10-20分鐘后，離心去上清，使用金蛋白偶聯(lián)物復溶液對離心后的沉淀進行復溶，復溶后噴至玻璃纖維素膜上烘干。[0030]包被抗體的NC膜是將3B1單克隆抗體經樣本稀釋液稀釋至0.3-0.8mg/ml后固定在NC膜上相應位置。[0031]樣本稀釋液成分為IOMmPBSPH=7.4、0_1%SDS,0.5-2%吐溫20、0-l%PVP、0_2mg/mlEDTA.2Na,0_1%PEG20000，0-1%酪蛋白。[0032]試紙條在使用過程中無需定標，樣本稀釋后直接加樣使用，測量后由檢測儀中標準曲線直接運算出最終檢測結果。[0033]體外檢測試劑盒的內容物包括:TAFI快速檢測試紙條，用于樣本的檢測；TAFI樣本稀釋液，用于待檢樣本的稀釋；使用說明，用于產品使用的指導。[0034]TAFI含量的體外檢測方法的應用:是用于檢測人體生物樣品中的血液、血清、血漿、尿液、粘液、糞便、腦脊液、胸腔積液、腹水、唾液、組織或細胞。[0035]TAFI含量的體外檢測方法的應用:是將對人個體樣品中TAFI含量的測定，根據TAFI與相關疾病的關系，應用于輔助心腦血管疾病、急性早幼粒細胞白血病、內源性凝血系統(tǒng)缺陷疾病、炎癥等的與TAFI含量相關聯(lián)疾病的診斷。[0036]本發(fā)明具有的優(yōu)點及積極效果是:由于本發(fā)明所采用的體外檢測試劑盒的內容物中包括針對TAFI的特異性單克隆抗體和膠體金標記測定所需試劑，與新型膠體金免疫檢測方法相結合，用于檢測人體生物樣品的TAFI含量的體外檢測，開辟了TAFI新的體外診斷學方法，所以它解決了現(xiàn)有技術存在的操作繁瑣，檢測時間較長等缺陷。將這種體外診斷學方法用于臨床預測心腦血管疾病的可能性，其操作簡便、快捷、成本低廉，診斷敏感，檢出限低。樣品中的TAFI抗原與標記了膠體金的特異抗體進行免疫學反應，通過膠體金顏色變化的放大作用，根據其顯色強度，顯色強度與抗原濃度呈正比關系，從而達到定量測定抗原含量的目的。將TAFI檢測和膠體金技術相結合可以明顯提高檢測的靈敏度和特異性，這種體外診斷學方法優(yōu)于現(xiàn)有技術中采用的其它普通方法。因此，本發(fā)明的方法可應用于大量樣品中TAFI含量的體外測定，根據TAFI與相關疾病的關系，作為輔助診斷，提高相關疾病的檢出率和準確率，同時檢測時間很短，達到了早期發(fā)現(xiàn)，早期治療的目的；減少被檢者不必要的痛苦和醫(yī)療費用支出，提高被檢者的生存質量。[0037]本發(fā)明所用的體外檢測試劑盒與人纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)酶聯(lián)免疫分析試劑盒進行比較實驗。實驗材料為已確診的心腦梗死患者血漿60例，使用TAFI酶聯(lián)免疫分析試劑盒和本發(fā)明所用的TAFI快速檢測劑盒同時進行酶聯(lián)免疫測定，本發(fā)明所用的TAFI快速檢測試劑盒與TAFI酶聯(lián)免疫分析試劑盒測定的陽性率分別為41.67%和30%，同時，本發(fā)明檢測TAFI用快速檢測試劑盒，檢測時間僅為lOmin，節(jié)約大量的時間，該結果顯示，本發(fā)明方法對TAFI抗原的檢測特異性更高，更準確，速度更快?！緦＠綀D】【附圖說明】[0038]圖1為本發(fā)明TAFI快速定量檢測產品標準曲線；[0039]圖2為TAFI快速定量檢測示意圖?！揪唧w實施方式】[0040]采用儀器如下:[0041]三維點膜噴金儀(上海金標生物科技有限HM3030)。[0042]冰盒的溫度取決于冰盒原來放置的環(huán)境，從_20°C拿出來的就是_20°C，從_80°C冰箱里拿出來的就是_80°C，但是只能短時間保存，本發(fā)明這里對冰盒溫度沒有要求，_20°C就可以達到要求，只是用于短時間保存而已。[0043]實施例一[0044]本發(fā)明是采用體外檢測試劑盒的內容物中的針對TAFI的特異性單克隆抗體和膠體金法測定所需試劑，與現(xiàn)有的膠體金法檢測試劑相結合，用于檢測人體生物樣品的TAFI含量的體外檢測。該TAFI含量的體外檢測試劑盒組成包括:TAFI快速檢測試紙、樣本稀釋液，及使用說明。本發(fā)明所采用的TAFI含量的體外檢測試劑盒的內容物的制備方法如下:[0045]1、膠體金的制備[0046]本發(fā)明使用的膠體金，采用檸檬酸鈉和氯金酸制備，首先將100ml4/萬氯金酸溶液加入微量膠體金保護劑，再用電爐加熱至沸騰，加入525ull0%檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)加熱IOmin后既得膠體金溶液，計算(以氯金酸的使用量為準，保證最終制備體積重反應前氯金酸的使用量為4/萬，即反應前使用4/萬氯金酸溶液為100ml，反應后也是IOOml)理論制備膠體金溶液的體積，定容后，利用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計對其進行全波長掃描，確定其峰值，本發(fā)明所使用的膠體金溶液全波長掃描，其波峰在515-530nm之間。[0047]2、單克隆抗體和金標抗體的制備[0048]單克隆抗體和金標抗體是針對重組人TAFI抗原所制備的鼠抗人單克隆抗體，鼠抗人單克隆抗體包含3B1和4E7。[0049]雜交瘤制備:以純化的人血漿TAFI為免疫原，按常規(guī)方法免疫BALB/c小鼠；取其脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合；對雜交瘤細胞進行篩選，陽性孔經3次有限稀釋法克隆，最終獲得2株持續(xù)且穩(wěn)定分泌抗人TAFI單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為3B1和4E7；[0050]抗體鑒定:按照羅氏公司抗體亞類試劑盒說明書測定這兩種單克隆抗體的類型均為IgGl，κ;以模擬血漿作為對照，免疫印跡和ELISA分析顯示，3B1和4E7這兩種單克隆抗體均與人源TAFI抗原特異性結合，其中3B1可以特異性結合TAFI和失活的TAFI，如圖1所示，3B1能夠特異性識別血漿中的TAFI。圖2單克隆抗體4E7與TAFI特異性結合ELISA曲線。以15μg/ml4E7包被酶標板，以TAF1、TAFI和4E7混合物、TAFI和小鼠IgG混合物分別作為抗原，3B1作為酶聯(lián)抗體，進行ELISA反應。從曲線圖可以看出，游離4E7競爭性抑制TAFI與固相4E7結合，說明4E7僅與TAFI特異性結合。[0051]抗體制備:雜交瘤細胞體外培養(yǎng)法。[0052]抗體純化:中空纖維濾柱(美國通用公司)濃縮雜交瘤培養(yǎng)上清，蛋白A-瓊脂糖親和層析柱(美國通用公司)分離純化濃縮液中的單克隆抗體。[0053]抗體效價:經ELISA法測定純化后的3B1和4E7單克隆抗體，效價分別IO5和106。[0054]3、試紙條的制備[0055](I)每Iml膠體金使用2μI的0.2MK2CO3混勻后，再加入20μg4E7I抗體，反應IOmin后，加入20%的BSA(20%PEG或20%Casein均可)等進行封閉，封閉時間為IOmin,離心純化，離心時間為7min，轉速為9000r/min，離心后去上清，沉淀使用含TRIS0.36%、Casein-Na0.6%、PEG200000.1%、BSA0.2%、TWEEN200.6%、PVP400.5%、蔗糖2%,疊氮鈉0.5%0的膠體金復溶液進行復溶，復溶體積為50ul.[0056](2)取Iml膠體金,加6uI的0.2MK2CO3,混合后再加入25ug濃度為10mg/ml的兔IgG，得到體積為2.5uI兔IgG,混勻靜置IOminJPlOuIBSA封閉，混勻靜置lOmin，離心7min(9000r)，棄上清，沉淀使用(I)中復溶液復溶至50uI;[0057](3)將(I)和(2)最終所得的50ul溶液混合后，使用三維點膜噴金儀(上海金標生物科技有限HM3030)加壓噴至玻璃纖維素膜上，烘干Ih后使用。[0058](4)將3B1抗體使用ΡΗ=7.4的PBS稀釋至0.5mg/ml，及羊抗兔1.5mg/ml分別使用三維點膜噴金儀(上海金標生物科技有限HM3030)固定在NC膜(NC膜已經貼在PVC板相應位置)上T線和C線位置上，室溫晾干后使用。[0059](5)然后將吸水紙貼在PVC板上方預留位置，吸水紙壓在NC膜上端Imm處，再將金墊粘貼在NC膜的下側，壓在NC膜上，與NC膜重疊1mm，再將玻璃纖維素膜壓在金墊上，重疊Immo粘貼后使用微電腦自動斬切機，將其切成4_的試紙條,最后將試紙條裝在卡殼中,和干燥劑、塑料吸管一起裝進6.5*12cm的鋁箔袋中，封口后既得最終膠體金產品。[0060]TAFI標準曲線的制定:[0061]從德國Merck公司購買人血漿純化的TAFI，相對分子質量60000，作為標化濃度的TAFL.利用人混合血漿與標化濃度的TAFI進行比對，稀釋后獲得含預期濃度TAFI的血漿，作為實驗用標準品。該方法制備TAFI標準品無需純化，操作簡單，成本低廉，適合大批量制備。具體操作步驟如下:[0062]以標化TAFI作為標準品，倍比稀釋做標準曲線，ELISA方法測定人混合血漿濃度。根據測定結果，利用該血漿及IOOmMpH7.3的乙二胺四乙酸二鈉溶液、IOOmM殼聚糖溶液將購買的TAFI抗原稀釋并充分混勻，制成終濃度為含TAFI(0、10、20、30、40μg/ml)、乙二胺四乙酸二鈉5mM、殼聚糖20mM的溶液，取各濃度標準品溶液100μI分裝至滅菌過的凍存管底部，液體或冷凍干燥后4°C保存，標準曲線制定，將樣不同梯度的樣本分別使用樣本稀釋液稀釋400倍后，分別加到TAFI快速檢測試紙條上，IOmin后將試紙條插入檢測儀(使用北京華慧達的Kreader系列的讀數(shù)儀或者德國QIAGEN的LF)中，根據檢測結果定制標準曲線。標準曲線由產品生產后直接在廠家定標后使用，每批產品一個標準曲線，曲線為直線擬合方式。[0063]具體應用例[0064]應用例一:[0065]現(xiàn)以人血漿為例，用本發(fā)明方法對60例確診為心腦梗死的患者血漿樣品及300例健康血漿樣品進行TAFI含量測定。具體操作步驟如下:[0066]步驟一采集人個體生物樣品立即于30分鐘內，4°C條件下離心取上清或樣本靜止后的上清作為待檢樣品，置于冰盒I小時內使用或_20°C保存?zhèn)溆?；[0067]步驟二取樣本做稀釋，可采用一步稀釋或兩步稀釋均可，稀釋倍數(shù)為400倍，稀釋后將樣本加到相應加樣孔內，IOmin后將樣本放入檢測儀器中，即可得出檢測最終結果；[0068]檢測結果見下表[0069]【權利要求】1.一種用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:由TAFI快速檢測試紙、樣本稀釋液組成，其中TAFI快速檢測試紙由PVC板條、樣品墊、金墊、NC膜和吸水紙組成；樣本稀釋液為磷酸鹽緩沖液(PH6.8-7.4)。2.按權利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:所述NC膜在檢測線T線位置和質控線C線位置固定兩種蛋白原料。3.按權利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:樣本稀釋液由0-0.68%磷酸二氫鉀、0-0.4%Na0H、0-l%Casein-Na、0-l%TWEEN20、0-l%PVP40、0-l%PEG20000,0-2%EDTA,0-0.5%SDS和余量為水組成。4.按權利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒示蹤標志物為膠體金。5.一種按權利要求1所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒的制備方法，其特征在于:TAFI快速檢測試紙的制備方法為:a.金墊的制備1)取Iml膠體金加0-6uI的0.2MK2CO3,混合后再加入10_20ug濃度為3.68mg/ml的4E7抗體，得到體積為2.7-5.4uI的4E7抗體，混勻靜置5_20min，加5_20uIBSA、PEG或者Casein-Na封閉，再次混勻靜置5_20min,離心5-10min(9000r/min),棄上清,沉淀用30-100uI復溶液復溶；2)取Iml膠體金，加0-6uI的0.2MK2CO3,混合后再加入15_25ug濃度為10mg/ml的兔IgG，得到體積為1.5-2.5uI兔IgG,混勻靜置lOmin，加5-20u120%的BSA,PEG或者Casein-Na溶液，混勻靜置5_20min,離心5-10min(9000r/min),棄上清,沉淀用50uI復溶液復溶；3)噴金:將4E7抗體和兔IgG各復溶的50uI兩者1:1混合至100u1，混合后的樣本通過加壓的方式，以霧狀均勻噴在玻璃纖維素膜上，45°C烘干0.5h-2h，密封干燥保存即為金墊。b.NC膜的制備包被工藝:將3B1抗體用PBS稀釋至0.3-0.8mg/ml，羊抗兔用PBS稀釋至0.5-1.5mg/ml分別固定在NC膜上T線和C線位置上，包被后室溫晾干后，密封干燥保存待用；c.安裝將樣本墊、金墊、PVC板、固定好抗體的NC膜、吸水紙組裝成試紙條即可，所述樣本墊采用玻璃纖維素膜。6.按權利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:試紙制作完成后直接裝入卡殼中，卡殼上對應試紙條的樣品墊處設置一個加樣孔。7.按權利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:復溶液為TrisO-0.5%；pvp400-l%;BSA0_1%；PEG200000-0.5%;10%蔗糖0-5%；TWEEN200-0.8%；10%ft氮鈉2/萬，余量為水。8.按權利要求4所述用于TAFI含量體外檢測的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒檢測的血清或血漿樣本中標志物的濃度范圍為5-40ug/ml.樣本稀釋400-600倍使用。所述試劑盒檢測結果以T/C比值為測試值，即T線檢測值和C線檢測值之比為最終測試值。9.一種按權利要求1所述試劑盒用于TAFI含量體外檢測的方法:步驟一采集個體生物樣品立即于30分鐘內，4°C條件下離心取上清或樣本靜止后的上清作為待檢樣品，置于冰盒I小時內使用或-20°C保存?zhèn)溆?；步驟二取樣本，用樣本稀釋液進行稀釋，可采用一步稀釋或兩步稀釋均可，稀釋倍數(shù)為400-600倍，稀釋后將樣本加到相應加樣孔內，IOmin后將樣本放入檢測儀器中，即可得出檢測最終結果。【文檔編號】G01N33/577GK103760352SQ201410038769【公開日】2014年4月30日申請日期:2014年1月26日優(yōu)先權日:2014年1月26日【發(fā)明者】李文欣,劉峰申請人:遼寧邁迪生物科技有限公司