一種檢測(cè)新型睪酮興奮劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測(cè)新型睪酮興奮劑的方法，包括：取尿樣，在恒溫水浴中酶解，萃取雄酮，將雄酮分子中標(biāo)記在碳3位上的13C除去，得到ANAD。用叔丁基甲醚溶解ANAD后進(jìn)入同位素比質(zhì)譜儀分析，得到ANAD的δ值。雄酮的δ值與ANAD的δ值的差值的絕對(duì)值如果大于1.2個(gè)δ值單位，則此樣品為陽性。本方法可以用于競(jìng)技體育中興奮劑的檢測(cè)，簡(jiǎn)便易行，能夠快速檢測(cè)大量樣品，檢測(cè)靈敏，準(zhǔn)確性高。
【專利說明】一種檢測(cè)新型睪酮興奮劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)新型睪酮興奮劑的方法，屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]睪酮(Testosterone)JljS:睪甾酮；睪丸甾酮；睪丸激素；17 β-Hydroxy-S-oxo-d-androstene-U β-ol-3-one, 分子式:C19H28O2,睪酮對(duì)照品δ值的平均值為-28%。，結(jié)構(gòu)
如下:
[0003]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)新型睪酮興奮劑的方法，其特征在于，包括: 取尿樣20mL，加入ImL pH = 7.0的磷酸鹽緩沖液和100 μ L β -葡萄糖醛酸甙酶溶液混勻，在55°C恒溫水浴中酶解3小時(shí)，取出，加入IOmL叔丁基甲醚振蕩萃取，離心，吸取上層有機(jī)溶液，在65°C加熱下用氮?dú)獯蹈?，加?0 μ L100%甲醇溶劑溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)入樣品瓶中，封蓋，以HPLC純化，收集13-14分鐘含有雄酮的流出液，在60°C加熱的情況下，用氮?dú)獯蹈?，用IOOyLlOO^甲醇溶解雄酮，備用； 取5yL上述制備的雄酮，進(jìn)入同位素比質(zhì)譜儀分析其同位素比，得到雄酮的δ值； 取95 μ L上述制備的雄酮，氮?dú)獯蹈?，加?5 μ L冰醋酸及50 μ L氧化劑，在60°C保持.2小時(shí)，反應(yīng)液用100 μ L CH2Cl2提取，提取液氮?dú)獯蹈珊?，加?0mg無水醋酸鈉及50 μ L醋酐在120°C保持2小時(shí)，氮?dú)獯蹈?，加入水分散殘?jiān)?0 μ L CH2Cl2提取，有機(jī)層在60°C氮?dú)獯蹈傻玫紸NAD，用50μ L叔丁基甲醚溶解ANAD后進(jìn)入同位素比質(zhì)譜儀分析，得到ANAD的δ值，雄酮的δ值與ANAD的δ值的差值的絕對(duì)值如果大于1.2個(gè)δ值單位，則此樣品為陽性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC純化的步驟為進(jìn)樣量為50μ L，色譜柱為ZORBAX SB-C18,規(guī)格為4.6mmX250mmX5 μ m,流動(dòng)相為甲醇-水系統(tǒng)，洗脫起始流動(dòng)相比例為:40%甲醇-60%水，等梯度洗脫，于20分鐘內(nèi)完成至流動(dòng)相為100%甲醇，流速.0.QmT ,/mi η η
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化劑由14g的Cr03、120mL的H2O和40mL 的 70% H2SO4 組成。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104007197SQ201410222016
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】王靜竹 申請(qǐng)人:王靜竹