血液試樣的品質評估方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種血樣品質評價方法，其包括以下步驟：混合標記抗皮質醇抗體和待檢血樣，使該標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮質醇發(fā)生抗原抗體反應；將前一步驟獲得的混合物在具有固定了皮質醇的基材的免疫層析試紙條上展開，使在該混合物中游離的標記抗皮質醇抗體與固定在上述基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，從而結合到該皮質醇；測定在上一步驟結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體的量；根據(jù)在上一步驟測定的標記抗皮質醇抗體量評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
【專利說明】血液試樣的品質評估方法
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?00880125040. 1、申請日為2008年11月25日、名稱為"血液 試樣的品質評估方法"的由同一 申請人:提交的中國發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002]

【技術領域】： 本發(fā)明涉及一種血樣品質評價方法。進一步詳細地說，是涉及一種血樣的品質評價方 法、用于此方法的免疫層析試紙條以及包含該免疫層析試紙條的血樣品質評價用試劑盒。
[0003]

【背景技術】： 血樣用于診斷受檢者的狀態(tài)、并為選擇最佳治療方案作出判斷等。然而，因采血位置不 同，可能得不到充分反映受檢者狀態(tài)和疾病的血樣。在這種情況下，有時就無法正確診斷受 檢者的狀態(tài)，選擇最佳治療方案。
[0004] 用血樣診斷疾病狀態(tài)或選擇治療方法的疾病比如有醛甾酮增多癥 (aldosteronism)等。醛留酮增多癥是一種使腎上腺皮質本身分泌醛固酮過多的疾病，大致 分為因增生引起的突發(fā)性醛留酮增多癥和糖（腎上）皮質激素可控型醛留酮增多癥和因腺 瘤引起的醛固酮分泌腺瘤。對因增生引起的醛留酮增多癥采用藥劑治療方法，對醛固酮分 泌腺瘤原則上采用外科摘除術治療方法。
[0005] 根據(jù)醛留酮增多癥的病型選擇治療方法時，進行腎上腺靜脈取樣檢測（參照非專 利文獻1、非專利文獻2等)。腎上腺靜脈取樣檢測是將導管插入左右腎上腺靜脈，采集5mL 左右的血樣，測定該血樣中的醛留酮含量。
[0006] 然而，在腎上腺靜脈取樣檢測中，被插入導管的腎上腺靜脈的內徑和所用導管的 直徑很小，有時采血很困難。而且腎上腺靜脈會有從各種靜脈流入的血液，采血獲得的血樣 中所含醛留酮有時會被這些血液稀釋。此時，可能無法正確地進行腎上腺靜脈取樣檢測。
[0007] 腎上腺靜脈取樣檢測中所用血樣是否合適根據(jù)血樣中的皮質醇濃度來評價。測定 皮質醇濃度通常需要大型設備，無法在手術現(xiàn)場等輕易測定皮質醇濃度。因此，一般測定皮 質醇濃度要由檢驗公司、檢驗部門等外部機構進行，獲得測定結果需要數(shù)天到一周左右很 長時間。
[0008] 另一方面，檢測待檢試樣中所含的待檢目標物質的檢測用免疫層析等進行。在免 疫層析中，作為抗體常使用通過將抗體固定在金屬微粒子而獲得的標記抗體的分散液(參 照專利文獻1等)。
[0009] 專利文獻1 :專利公開2007-169209號公報。
[0010] 非專利文獻1 :大村昌夫，"特殊型原發(fā)性醛留酮增多癥的診斷一腎上腺靜脈取樣 的意義一"，最新醫(yī)學，最新醫(yī)學社，2004年，第59期、第10號，p. 2286- 2291。
[0011] 非專利文獻2 :Giulio Mengozzi等7人，"原發(fā)性醒甾酮增多癥患者腎上腺靜脈 取樣時的快速皮質醇測定法（Rapid Cortisol Assay during Adrenal Vein Sampling in Patients with Primary Aldosteronism. )，'，臨床化學（Clinical Chemistry)，2007 年 11 月，第 53 期，第 11 號，p. 1968-1971。
[0012]


【發(fā)明內容】
： 本發(fā)明要解決的課題 本發(fā)明的目的之一在于，提供一種可以用少量血樣便捷地評價血樣品質的血樣品質評 價方法。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種可以用少量血樣便捷地評價血樣品質的免疫層 析試紙條和血樣品質評價用試劑盒。
[0013] 解決問題的方法 本發(fā)明涉及 (1) 一種包括以下步驟的血樣品質評價方法： (a) 將標記抗皮質醇抗體和待檢血樣混合，使該標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮質 醇發(fā)生抗原抗體反應， (b) 將（a)步驟獲得的混合物在具有固定有皮質醇的基材的免疫層析試紙條上展開，使 在該混合物中游離的標記抗皮質醇抗體與固定在上述基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應， 使之結合到該皮質醇， (c) 測定在（b)步驟結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體的量，以及 (d) 根據(jù)在（c)步驟測定的標記抗皮質醇抗體數(shù)量評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈 取樣檢測的品質； (2) -種包括以下步驟的血樣品質評價方法： (A) 使用一種免疫層析試紙條，該試紙條的基材的一端設置有標記抗體相，該標記杭體 相上有與待檢血樣接觸而脫離的標記抗皮質醇抗體、另一端固定有皮質醇，從該免疫層析 試紙條的標記抗體相一端展開一定量待檢血樣,使該標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮質 醇發(fā)生抗原抗體反應，此抗原抗體反應后游離的標記抗皮質醇抗體與固定在該基材上的皮 質醇發(fā)生抗原抗體反應，從而結合到固定在該基材上的皮質醇， (B) 測定在（A)步驟與固定在基材上的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體的量，及 (C) 根據(jù)（B)步驟測定的標記抗皮質醇抗體量，評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣 檢測的品質； (3) -種免疫層析試紙條，它用于上述（1)所述血樣品質評價方法，通過接頭（linker) 固定皮質醇； (4) 一種免疫層析試紙條，它用于上述（2)所述血樣品質評價方法，該試紙條基材的一 端設置有標記抗體相，該標記杭體相上有標記抗皮質醇抗體，可通過與待檢血樣接觸而脫 離、另一端通過接頭固定有皮質醇， (5) -種包含上述免疫層析試紙條的血樣品質評價用試劑盒。
[0014] 發(fā)明效果 本發(fā)明的血樣品質評價方法可以用少量血樣便捷地評價血樣品質。本發(fā)明的免疫層析 試紙條和血樣品質評價試劑盒適用于以少量血樣便捷地評價血樣品質。
[0015]

【專利附圖】

【附圖說明】： 圖1為本發(fā)明實施例2和3中血樣采集位置的概述圖； 圖2為本發(fā)明實施例2的免疫層析試紙條的照片而非繪圖，顯示在檢測線上有無因膠 體金粒子而出現(xiàn)條帶； 圖3為試驗例2的免疫層析試紙條的照片而非繪圖，顯示在檢測線上有無因膠體金粒 子而出現(xiàn)條帶； 圖4為試驗例3中免疫層析后的免疫層析試紙條的照片而非繪圖； 圖5為試驗例4中皮質醇濃度和吸光度的關系顯示圖； 圖6為試驗例5中膠體金標記抗皮質醇抗體溶液的量與吸光度之差的關系顯示圖； 圖7為試驗例6中膠體金標記抗皮質醇抗體溶液的量與吸光度之差的關系顯示圖。
[0016]

【具體實施方式】： 本發(fā)明的血樣品質評價方法包括以下幾個步驟，下面稱此品質評價方法為"評價方法 1，，： (a) 混合標記抗皮質醇抗體和待檢血樣，使該標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮質醇 發(fā)生抗原抗體反應； (b) 將（a)步驟獲得的混合物在具有固定有皮質醇的基材的免疫層析試紙條上展開，使 在該混合物中游離的標記抗皮質醇抗體與固定在該基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，從 而與該皮質醇結合； (c) 測定在（b)步驟結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體含量；以及 (d) 根據(jù)在（c)步驟測定的標記抗皮質醇抗體含量，評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈 取樣檢測的品質。
[0017] 在（a)步驟，混合標記抗皮質醇抗體和待檢血樣，引起該血樣中所含的皮質醇與標 記抗皮質醇抗體的抗原抗體反應。
[0018] 在（a)步驟獲得的混合物中，通過血樣中所含皮質醇與標記抗皮質醇抗體的抗原 抗體反應形成復合物，根據(jù)血樣中所含皮質醇含量不同會殘留不同量的游離的標記抗皮質 醇抗體。通常血樣中所含皮質醇含量越多，未形成復合物的游離標記抗皮質醇抗體的量就 會相應減少。
[0019] 作為待檢血樣可以有血漿、血清和全血等。從更有效地使血樣中所含皮質醇和標 記抗皮質醇抗體結合形成復合物的角度出發(fā)，在待檢血樣中以血漿為宜。
[0020] 靜脈距腎上腺的距離越短，該靜脈血中所含的皮質醇含量就越高，因此，從腎上腺 靜脈采集的血樣中所含皮質醇的量會比與該血樣同樣體積的末梢血中皮質醇含量多。末梢 血中皮質醇含量有時會因個體壓力過大或采血時間等因素比平常狀態(tài)有所增加，因此，待 檢血樣最好是平常狀態(tài)下的個體的血樣。
[0021] 標記抗皮質醇抗體是通過用標記物標記針對皮質醇的抗體（以下稱"抗皮質醇抗 體"）而獲得的抗體。
[0022] 抗皮質醇抗體可以是針對皮質醇的單克隆抗體，也可以是針對皮質醇的多克隆抗 體。針對皮質醇的單克隆抗體和多克隆抗體比如可以參照J. E.科利根（John E. Coligan) 編的《免疫學實驗室指南（Current Protocols in Immunology)》[約翰威立國際出版公 司（John Wiley & Sons, Inc) ,1992年發(fā)行]上記載的方法等獲得。
[0023] 具體而言，用皮質醇免疫兔子和山羊等動物，從免疫后的動物身上獲得脾細胞后， 使脾細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，制備雜交瘤，培養(yǎng)所獲得的雜交瘤，提純培養(yǎng)上清中 所含的單克隆抗體，即可獲得針對皮質醇的單克隆抗體。用皮質醇免疫兔子和山羊等動物， 從免疫后的動物身上采集血清，提純該血清中所含的多克隆抗體，即可獲得針對皮質醇的 多克隆抗體。
[0024] 作為標記物，比如有金屬膠體粒子、酶、熒光物質等。其中從檢測操作簡便、目測性 好的角度來看，以金屬膠體粒子為宜。
[0025] 作為金屬膠體粒子，比如有膠體金粒子、膠體銀粒子、膠體白金粒子、這些復合金 屬的膠體粒子和膠體硒粒子等。這些可以單獨或二種以上混合使用。其中，以穩(wěn)定性和目 測性優(yōu)越來說，膠體金粒子最好。
[0026] 金屬膠體粒子的定量比如可以通過測定金屬膠體粒子在波長520nm的吸光度來 進行。
[0027] 作為酶如有過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡糖氧化酶等，它們可以單獨或二種以上混 合使用。酶可通過測定酶的比活性的方法等進行定量。
[0028] 作為熒光物質如有異硫氰酸熒光素（FITC)、四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC)等， 它們可單獨或二種以上混合使用。熒光物質可通過測定熒光物質的熒光強度的方法等來進 行定量。
[0029] 標記抗皮質醇抗體也可根據(jù)需要溶解在磷酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷（Tris)緩 沖液等溶液中。
[0030] 一般認為，適于腎上腺靜脈取樣的血樣的指標是血樣的皮質醇濃度是末梢血所含 皮質醇濃度的2倍以上。因此，最好使用末梢血中所含皮質醇摩爾數(shù)的2倍量的標記抗皮 質醇抗體與待檢血樣混合。之所以選擇末梢血，是因為末梢血中的皮質醇含量最少，以此為 標準比較可靠。
[0031] 從靜脈到腎上腺的距離越短，靜脈血中的皮質醇含量就越多，因此，從腎上腺靜脈 采集的血樣中所含皮質醇要比從下大靜脈采集的血樣（以下也稱"下大靜脈血"）中所含皮 質醇量多。
[0032] 血樣是否是從腎上腺靜脈采集的，可以通過目測與固定在免疫層析試紙條基材上 的皮質醇相結合的標記抗皮質醇抗體所具有的標記物所顯示的顏色予以評價。因此，在（a) 步驟中使用的標記抗皮質醇抗體的摩爾數(shù)最好大于下大靜脈血中所含皮質醇的摩爾數(shù)。此 夕卜，考慮到步驟（a)中使用的標記抗皮質醇抗體所需成本等因素，可以適當設定與待檢血樣 對應的標記抗皮質醇抗體的摩爾數(shù)上限。
[0033] 在（a)步驟，從縮短操作時間的觀點出發(fā)，在混合標記抗皮質醇抗體和待檢血樣 時，也可以事先將血樣與清洗液混合。清洗液可以用于主動地沖洗未在免疫層析試紙條上 展開而殘留的標記抗皮質醇抗體。
[0034] 清洗液只要是能防止物質非特異地吸附到免疫層析試紙條上的液體即可。作為 這種清洗液比如可列舉出含有牛血清白蛋白、酪蛋白、絲膠、明膠、2-甲基丙烯酰氧基乙基 磷酰膽堿聚合物（Μ P C聚合物)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等封閉試劑和吐溫（T ween， 注冊商標）系列表面活性劑、普盧蘭尼克（Pluronic，注冊商標）系列表面活性劑、陶氏 (Triton，注冊商標）X系列表面活性劑等表面活性劑的中性緩沖液等。清洗液的量只要足 夠在免疫層析試紙條上展開標記抗皮質醇抗體和血樣的混合物即可。
[0035] 在（a)步驟，從縮短操作所需時間、精確檢測出標記抗皮質醇抗體和血樣中所含皮 質醇的復合物的觀點出發(fā)，最好邊照射超聲波邊混合標記抗皮質醇抗體和血樣。邊照射超 聲波邊混合標記抗皮質醇抗體和血樣所需的時間雖因超聲波頻率而各異，無法一概而定， 但通常選擇標記抗皮質醇抗體和血樣分散均勻所需要的時間。
[0036] 在（a)步驟，可以原樣使用待檢血樣，也可以根據(jù)（b)步驟中使用的免疫層析試紙 條檢測時的靈敏度等將血樣用溶劑適當稀釋后使用。
[0037] 在（a)步驟，當個體的末梢血中皮質醇濃度為一定標準濃度時，可以不稀釋待檢血 樣，直接使用。當混合標記抗皮質醇抗體和待檢血樣時，平均每ιομ?血樣的標記抗皮質醇 抗體數(shù)目，如從提高測定血樣中皮質醇含量的靈敏度的角度來說，最好為3X 108個以上，從 降低（a)步驟所用標記抗皮質醇抗體所需成本的角度來說，最好為9Χ108個以下。當使用 膠體金標記抗皮質醇抗體溶液作為標記抗皮質醇抗體時，可調整各項數(shù)據(jù)如下：膠體金標 記抗皮質醇抗體溶液的量為每3〇μ?待檢血樣1_15μ?，其中，所述膠體金標記抗皮質醇抗體 的溶液在波長520nm的吸光度為Ι-lOabs ;上述吸光度和上述膠體金標記抗皮質醇抗體溶 液的量的積為l〇_90abs · PL。
[0038] 在（a)步驟，如果估計個體末梢血的皮質醇濃度會變動很大，當不稀釋待檢血樣而 原樣使用時，從易于測定血樣中皮質醇含量的角度看，每ιομ?血樣的標記抗皮質醇抗體最 好至少為二種。每ιομ?血樣的標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定血樣中皮質醇 含量的角度出發(fā)，最好為3Χ10 8個以上，從降低（a)步驟所用標記抗皮質醇抗體所需成本的 角度來說，最好為2. 4X 109個以下。
[0039] 為了方便、低成本地測定皮質醇含量，最好用下大靜脈血取代（a)步驟中的血樣， 從上述至少兩種數(shù)目的標記抗皮質醇抗體中，選擇標記抗皮質醇抗體，且要保證其數(shù)目能 夠確認與免疫層析試紙條基材上所固定的皮質醇相結合的標記抗皮質醇抗體的顯色，在 (a)步驟中將選定數(shù)目的標記抗皮質醇抗體與血樣混合。
[0040] 出于操作簡便地測定血樣中皮質醇含量的考慮，在（a)步驟中最好使用第一標記 抗皮質醇抗體或數(shù)目多于第一標記抗皮質醇抗體的第二標記抗皮質醇抗體。
[0041] 第一標記抗皮質醇抗體數(shù)目，從高靈敏度地測定血樣中皮質醇含量的角度出發(fā)， 最好為3X108個以上，從降低（a)步驟所用標記抗皮質醇抗體所需成本的角度來說，最好 為8X 108個以下。第二標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，出于高靈敏度地測定待檢血樣中皮質醇 含量考慮，最好為8X10 8個以上，從降低（a)步驟所用標記抗皮質醇抗體所需成本的角度來 說，最好為2. 4X 109個以下。此時，比如可將第一數(shù)目的標記抗皮質醇抗體與下大靜脈血 混合，使下大靜脈血所含皮質醇與標記抗皮質醇抗體發(fā)生抗原抗體反應，在上述免疫層析 試紙條上展開所得混合物，使在混合物中游離的標記抗皮質醇抗體通過與固定在免疫層析 試紙條基材的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，與皮質醇結合，確認有與該皮質醇結合的標記抗 皮質醇抗體顯色，以此選擇能夠確認顯色的數(shù)目的標記抗皮質醇抗體。在此情況下，當能夠 看到顯色時，在（a)步驟使用該標記抗皮質醇抗體。另一方面，當沒有看到顯色時，使用上 述第二數(shù)目的標記抗皮質醇抗體和下大靜脈血，進行與使用上述第一標記抗皮質醇抗體時 同樣的操作，即可選擇能夠確認顯色的數(shù)目的標記抗皮質醇抗體。
[0042] 另一方面，當使用用溶劑稀釋過的待檢血樣時，可以根據(jù)檢測靈敏度適當設定標 記抗皮質醇抗體的數(shù)目。從精確簡便地測定皮質醇含量的角度出發(fā)，在（a)步驟最好使用與 待檢血樣同樣體積、濃度為待檢血樣1/2倍的稀釋后的血樣取代待檢血樣，并使用每1〇μ? 血樣1. 2Χ 109-4. 8Χ 109個標記抗皮質醇抗體。此時，每1〇μ?血樣中標記抗皮質醇抗體數(shù) 目的下限值只要足夠高靈敏度地測定待檢血樣中的皮質醇的含量即可，每ιομ?血樣中的 標記抗皮質醇抗體數(shù)目的上限值以降低所用標記抗皮質醇抗體所需成本、低成本測定血樣 中皮質醇含量的數(shù)目即可。
[0043] 在（b)步驟，在具有固定有皮質醇的基材的免疫層析試紙條上展開（a)步驟所得 混合物，使在該混合物中游離的標記抗皮質醇抗體與固定在該基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗 體反應,從而結合到皮質醇。
[0044] 在（b)步驟使用的免疫層析試紙條具有固定有皮質醇的基材。用這種免疫層析試 紙條可以將（a)步驟所得混合物在該免疫層析試紙條上展開，使未反應的標記抗皮質醇抗 體結合到固定在該基材的皮質醇。
[0045] 在免疫層析試紙條中，最好使固定在基材上的皮質醇的摩爾數(shù)大于標記抗皮質醇 抗體的摩爾數(shù)。此時，在（a)步驟未與血樣中所含皮質醇結合的剩余標記抗皮質醇抗體與 固定在基材的皮質醇結合。因此，與固定在基材的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體的量等 于（a)步驟所用標記抗皮質醇抗體的量減去與血樣中所含皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體 的量的差。
[0046] 因此，根據(jù)評價方法1，可以根據(jù)與固定在免疫層析試紙條基材的皮質醇結合的標 記抗皮質醇抗體的量，間接知道血樣中皮質醇含量，從而可以簡便地評價待檢血樣是否具 有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0047] 從精確測定待檢血樣中皮質醇含量的觀點出發(fā)，在（b)步驟使用的免疫層析試紙 條最好是通過接頭固定皮質醇的免疫層析試紙條。
[0048] 作為接頭如有0-羧甲基廂（〇-carboxymethyloxime)等。從使皮質醇牢固地固定 在基材上以獲得穩(wěn)定的測定結果的角度來看，最好接頭已通過牛血清蛋白固定在基材上。
[0049] 通過此接頭固定有皮質醇的免疫層析試紙條可以適用于血樣評價試劑盒。此血樣 評價試劑盒除免疫層析試紙條外，還可含有檢查所需的容器等。
[0050] 出于高效地在基材上展開血樣考慮，（b)步驟使用的免疫層析試紙條還可以在基 材上的展開血樣方向的下游設置由吸水性材料構成的吸水墊。吸水性材料如硝化棉等。
[0051] (b)步驟使用的免疫層析試紙條很容易制備，將皮質醇固定在基材上，封閉該基材 后清洗即可。比如，通過結合了牛血清白蛋白的接頭將皮質醇固定在基材上，封閉固定有皮 質醇的基材，然后清洗，即可制備出免疫層析試紙條。
[0052] 基材只要是由可展開上述混合物的材料制成即可?；淖詈媚苡谐渥愕恼归_速 度，以使固定在該基材上的皮質醇捕捉到標記抗皮質醇抗體。
[0053] 在基材上展開純水的展開速度可以根據(jù)所用標記抗皮質醇抗體和皮質醇的結合 能力適當設定。從精確定量與固定在免疫層析試紙條基材的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗 體的角度考慮，在基材上展開純水時的展開速度以〇. 35mm/sec以下為宜，最好在0. 32mm/ sec以下，從縮短評價所需時間的角度來說，以0. 25mm/sec以上為宜，最好在0. 28mm/sec以 上。
[0054] 作為基材如有多孔聚乙烯膜、纖維素制濾紙膜、硝酸纖維素膜等薄膜。其中從更有 效地控制皮質醇的固定和展開速度等角度考慮，以纖維素制濾紙膜為宜。
[0055] 混合物在免疫層析試紙條的展開可以利用毛細管現(xiàn)象，即以混合物中所含液體成 分為展開溶劑。
[0056] 在（c)步驟，測定在（b)步驟結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體的量。
[0057] 結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體的量，可以根據(jù)標記抗皮質醇抗體所擁有的標 記物的量來測定。比如通過測定與免疫層析試紙條上的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體所 擁有的標記物的量，可以測定出標記抗皮質醇抗體的量。更具體而言，當標記物為膠體金粒 子時，運用測定與免疫層析試紙條上的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體所擁有的膠體金粒 子吸光度的方法和測定該膠體金粒子反射濃度的方法，可以定量標記抗皮質醇抗體。吸光 度可用吸光度儀來測定。反射濃度可以用光密度計（densitometer)來測定。
[0058] 從簡便評價血樣品質的角度來說，在（a)步驟，將標記抗皮質醇抗體同待檢血樣混 合，使該標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，該標記抗皮質醇抗體 的量應多于與待檢血樣同體積的末梢血中所含皮質醇反應的抗體，在（b)步驟，可以使用免 疫層析試紙條，該免疫層析試紙條上固定的皮質醇量多于能與（a)步驟所用量的標記抗皮 質醇抗體起反應的皮質醇。此時，僅憑肉眼觀察在免疫層析試紙條檢測線上有無標記抗皮 質醇抗體的標記物，即可輕松地評價血樣品質。
[0059] 在（d)步驟，根據(jù)在（c)步驟測定的標記抗皮質醇抗體的量，評價待檢血樣是否具 有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0060] 在（d)步驟，當（b)步驟在免疫層析試紙條上展開待檢血樣時，根據(jù)與固定在該免 疫層析試紙條的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體的顯色，即可評價待檢血樣是否具有適于 腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0061] 在（d)步驟，使用（b)步驟中固定在基材上的皮質醇的摩爾數(shù)大于上述標記抗皮 質醇抗體的摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，測定在免疫層析試紙條上展開待檢血樣時結合到該 固化皮質醇的標記抗皮質醇抗體所產生的顯色強度，根據(jù)所測顯色強度即可評價待檢血樣 是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0062] 作為免疫層析試紙條，要求固定在基材上的皮質醇的摩爾數(shù)大于上述標記抗皮質 醇抗體的摩爾數(shù)，當在該免疫層析試紙條上展開待檢血樣時，結合到該固化皮質醇的標記 抗皮質醇抗體所產生的顯色與下大靜脈血樣的測定結果相比吸光度的值小于四分之一，或 不能目測時可以判斷血樣具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0063] 在本發(fā)明中，可以用另一種免疫層析試紙條取代具有固定有皮質醇的基材的免疫 層析試紙條，這種免疫層析試紙條的基材的一端設有標記抗皮質醇抗體與待檢血樣接觸而 脫離的標記抗體相，且該基材的另一端固定有皮質醇。
[0064] 這種在基材的一端設有標記抗皮質醇抗體與待檢血樣接觸而脫離的標記抗體相、 且在該基材的另一端固定有皮質醇的免疫層析試紙條，可以適當運用到血樣評價試劑盒 中。此血樣評價試劑盒中，除免疫層析試紙條外，還可以含有檢查所需容器等。
[0065]當使用這種在基材的一端設有標記抗皮質醇抗體與待檢血樣接觸而脫離的標記 抗體相、且在該基材的另一端固定有皮質醇的免疫層析試紙條時，可以以下述步驟評價血 樣品質： (A) 從免疫層析試紙條的上述標記抗體相一端展開一定量待檢血樣，使該標記抗皮質 醇抗體與血樣中所含皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，再讓該抗原抗體反應后游離的標記抗皮質 醇抗體與固定在該基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，從而使之與固定在該基材上的皮質 醇結合； (B) 測定（A)步驟中與固定在基材上的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體的量；及 (C) 根據(jù)（B)步驟測得的標記抗皮質醇抗體的量，評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈取 樣檢測的品質。
[0066] 以下稱此血樣品質評價方法為"評價方法2"。
[0067] 在（A)步驟，從免疫層析試紙條的標記抗體相一端展開一定量待檢血樣。可以利用 以血樣中所含液體成分作為展開溶劑的毛細管現(xiàn)象，在免疫層析試紙條上展開待檢血樣。 也可根據(jù)需要適當用其他展開溶劑。作為這種展開溶劑具體而言比如有磷酸緩沖液等。
[0068] 在評價方法2中，待檢血樣也是血漿、血清和全血等。在待檢血樣中，從更有效地 使血樣中所含皮質醇和標記抗皮質醇抗體結合形成復合物的角度來說，最好是血漿。另一 方面，當所用免疫層析試紙條還設有過濾甄別血細胞等的加樣墊時，在上述免疫層析試紙 條上滴入待檢血樣,不用預先從待檢血樣中分離出血細胞和血清來制備試樣，從用簡便的 步驟進行評價的角度來說，以全血為宜。
[0069] (A)步驟所用免疫層析試紙條可以僅憑在基材上展開待檢血樣這一簡單的操作， 即讓數(shù)量足以從視覺上評價是否為采自腎上腺靜脈的血樣的標記抗皮質醇抗體與該血樣 中所含皮質醇發(fā)生抗原抗體反應。
[0070] 免疫層析試紙條的標記抗體相中的標記抗皮質醇抗體的摩爾數(shù)最好大于下大靜 脈血所含皮質醇的摩爾數(shù)。標記抗體相中的標記抗皮質醇抗體的摩爾數(shù)的上限，可以根據(jù) 基材中的標記抗皮質醇抗體數(shù)量和成本等進行適當設定。
[0071] 評價方法2使用設有標記抗體相且固定有皮質醇的免疫層析試紙條，因此，僅在 免疫層析試紙條上展開一定量待檢血樣，即可讓標記抗皮質醇抗體和血樣中所含皮質醇發(fā) 生抗原抗體反應，并使該抗原抗體反應后游離的標記抗皮質醇抗體與固定在該基材的皮質 醇發(fā)生抗原抗體反應，從而使之結合到固定在該基材的皮質醇。
[0072] 在（A)步驟所用免疫層析試紙條，最好與評價方法1的（b)步驟所用免疫層析試紙 條一樣，通過接頭固定皮質醇。皮質醇牢固地固定在基材上可望得到穩(wěn)定的測定結果，因此 接頭最好通過牛血清白蛋白固定在基材上。
[0073] 作為（A)步驟所用免疫層析試紙條的基材，可以采用與（b)步驟免疫層析試紙條 所用基材同樣的基材。
[0074] 標記抗體相可以通過各種方法制備，比如在基材上涂抹含有標記抗皮質醇抗體的 溶液后在適當條件下干燥涂抹后的基材的方法，及在基材上涂抹可將標記抗皮質醇抗體分 散到含有水溶性化合物的溶液中的分散液，再使該基材干燥的方法等。在這些方法當中，最 好采用在基材上涂抹可將標記抗皮質醇抗體分散到含有水溶性化合物的溶液中的分散液， 然后再使該基材干燥的方法，因為采用這個方法，當待檢血樣與標記抗體相接觸時，標記抗 皮質醇抗體易于從基材脫離，而當待檢血樣與標記抗體相未接觸時，標記抗皮質醇抗體很 難從基材脫離。
[0075] 作為水溶性化合物如有纖維素醚和糖等。作為纖維素醚如有：甲基纖維素、乙基纖 維素、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、羥乙纖維素和氰乙基纖維素等，而本發(fā)明不僅僅限于 上述示例。作為糖如有鹿糖等，但本發(fā)明不僅僅限于上述示例。
[0076] 基材上的標記抗體相與皮質醇固化部位之間的距離，只要足夠使待檢血樣中所含 皮質醇和標記抗皮質醇抗體的復合物以及未與待檢血樣中所含皮質醇結合而游離的標記 抗皮質醇抗體展開即可。
[0077] (A)步驟所用免疫層析試紙條，從當待檢血樣為全血時且可更簡便地評價待檢血 樣的角度出發(fā)，也可以在比基材上的標記抗體相更靠近血樣展開方向的上游一側設置由吸 水性材料構成的加樣墊，用于滴加待檢血樣、過濾鑒別血細胞等。吸水性材料只要具有從全 血中過濾、鑒別血細胞功能即可，比如評價方法1所用吸水性材料同樣的材料。
[0078] 出于更有效地在基材上展開血樣考慮，（A)步驟中所用免疫層析試紙條中，還可以 在基材血樣展開方向的下游一側設置由吸水材料構成的吸水墊。吸水性材料與評價方法1 所用吸水性材料一樣即可。
[0079] 在（A)步驟，當個體的末梢血中皮質醇濃度為一定標準濃度時，可以不稀釋待檢 血樣，直接使用。在使用血漿或血清作為待檢血樣的情況下，使用免疫層析試紙條時，標記 抗體相中所含標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定血漿或血清中皮質醇含量的角 度來看，最好為每10Λ血漿或血清3X 108個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成本的 角度考慮，最好為9X 108個以下。當使用全血作為待檢血樣時，標記抗體相中所含標記抗 皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定全血中皮質醇含量的角度來看，最好為每ιομ?全血 1. 5Χ108個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成本的角度考慮，最好為5. 4Χ108個以下。 當用膠體金標記抗皮質醇抗體溶液作為標記抗皮質醇抗體時，可調整各項數(shù)據(jù)如下：膠體 金標記抗皮質醇抗體的溶液的量為每3〇μ?待檢血樣1-15μ?，其中，所述膠體金標記抗皮質 醇抗體的溶液在波長520nm的吸光度為Ι-lOabs ;上述吸光度和上述膠體金標記抗皮質醇 抗體溶液量的積為10_90abs · μ?。
[0080] 在（Α)步驟，在用血漿或血清作為待檢血樣的情況下，如果預計個體末梢血的皮質 醇濃度變動大，則當對血漿或血清不加稀釋原樣使用時，出于更易于測定血漿或血清中所 含皮質醇量考慮，每ιομ?血漿或血清的標記抗皮質醇抗體最好至少為二種。此時，在免疫 層析試紙條上，每ιομ?血漿或血清中的標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定血漿 或血清中所含皮質醇的角度出發(fā)，最好為3Χ10 8個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成 本的角度考慮，最好為2.4 Χ109個以下。在此，第一標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度 地測定血漿或血清中皮質醇含量的角度出發(fā)，最好為3Χ10 8個以上，從降低標記抗皮質醇 抗體所需成本的角度考慮，最好為8Χ 108個以下。第二標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈 敏度地測定血漿或血清中皮質醇含量的角度出發(fā)，最好為8Χ 108個以上，從降低標記抗皮 質醇抗體所需成本的角度考慮，最好為2. 4Χ 109個以下。從更簡便地測定血漿或血清中皮 質醇含量的角度來說，在（Α)步驟中作為標記抗體相中的標記抗皮質醇抗體最好使用第一 標記抗皮質醇抗體或數(shù)目多于第一標記抗皮質醇抗體的第二標記抗皮質醇抗體。
[0081] 從以簡便的操作、低廉的成本測定皮質醇含量的角度出發(fā)，可以用下大靜脈血代 替(Α)步驟中的血樣，確認與固定在免疫層析試紙條基材上的皮質醇結合的標記抗皮質醇 抗體顯出的顏色，最好選擇標記抗體相中的標記抗皮質醇抗體的數(shù)目不同的至少二種數(shù)目 的免疫層析試紙條，在（Α)步驟中使用所選免疫層析試紙條。
[0082] 在（Α)步驟使用全血作為待檢血樣的情況下，如果預計個體末梢血的皮質醇濃度 變動大，則當對全血不加稀釋原樣使用時，出于更易于測定全血中皮質醇含量考慮，每ιομ? 全血的標記抗皮質醇抗體最好至少為二種。此時，在免疫層析試紙條上，每ιομ?全血中的 標記抗皮質醇抗體數(shù)目，從高靈敏度地測定全血中皮質醇含量的角度出發(fā)最好為1. 5Χ 108 個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成本的角度考慮，最好為1.44Χ109個以下。在此， 第一標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定全血中皮質醇含量的角度出發(fā)最好為 1. 5Χ108個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成本的角度考慮，最好為4Χ108個以下。 第二標記抗皮質醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測定全血中皮質醇含量的角度出發(fā)最好為 4X 108個以上，從降低標記抗皮質醇抗體所需成本的角度考慮，最好為1. 44X 109個以下。 從更簡便地測定全血中皮質醇含量的角度來說，在（Α)步驟作為標記抗體相中的標記抗皮 質醇抗體最好使用第一標記抗皮質醇抗體或數(shù)目多于第一標記抗皮質醇抗體的第二標記 抗皮質醇抗體。
[0083] 當在（Α)步驟對待檢血樣不加稀釋原樣使用時，免疫層析試紙條的選擇可以如下 方法進行，如使用標記抗體相中具有上述第一數(shù)目的標記抗皮質醇抗體的免疫層析試紙條 (以下稱"試紙條Α")和下大靜脈血，從試紙條Α的標記抗體相的一側端展開下大靜脈血，確 認與固定在試紙條A基材上的皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體顯出的顏色。此時，當確認 顯色時，在（A)步驟使用此試紙條A作為免疫層析試紙條。另一方面，當未能確認顯色時，可 以使用標記抗體相中有上述第二數(shù)目的標記抗皮質醇抗體的免疫層析試紙條（以下稱"試 紙條B"）和下大靜脈血，通過與使用試紙條A時同樣的操作，選擇免疫層析試紙條。
[0084] 另一方面，當使用通過在溶劑里稀釋待檢血樣而配制成的稀釋物時，標記抗皮質 醇抗體的數(shù)目可以根據(jù)檢測靈敏度適當設定。當待檢血樣為血漿或血清時，從精確、簡便 測定皮質醇含量的角度來說，在（A)步驟中，最好將待檢血樣代之以使用與該待檢血樣同 體積、且將待檢血樣稀釋到1/2倍濃度的稀釋物，同時使用標記抗皮質醇抗體的數(shù)目為每 1〇μ?該血樣1. 2 X 109-4. 8 X 109個的免疫層析試紙條。在這種情況下，每?ομ?血樣中的標記 抗皮質醇抗體數(shù)目的下限值為只要數(shù)量足夠高靈敏度地測定待檢血樣中皮質醇含量即可， 每1〇μ?血樣中的標記抗皮質醇抗體數(shù)目的上限值為只要能降低所用標記抗皮質醇抗體所 需成本、以低成本測定血樣中皮質醇含量即可。當待檢血樣為全血時，在（Α)步驟中，最好 將待檢血樣代之以使用與該待檢血樣同體積、且將待檢血樣稀釋到1/2倍濃度的稀釋物， 同時使用標記抗皮質醇抗體數(shù)量為每1〇μ?血樣6Χ 108-2. 88Χ 109個的免疫層析試紙條。
[0085] 在（Β)步驟中，測定在（Α)步驟中與固定在基材上的皮質醇結合的標記抗皮質醇 抗體數(shù)量。測定標記抗皮質醇抗體數(shù)量采取與評價方法1的（c)步驟同樣的操作。
[0086] 另外，在（Β)步驟，可以使用固定在基材上的皮質醇的摩爾數(shù)大于上述標記抗皮質 醇抗體摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，測定在免疫層析試紙條上展開待檢血樣時與該固化皮質 醇結合的標記抗皮質醇抗體產生的顯色強度，根據(jù)所測顯色強度評價上述待檢血樣是否具 有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0087] 可以使用固定在基材上的皮質醇的摩爾數(shù)大于上述標記抗皮質醇抗體摩爾數(shù)的 免疫層析試紙條作為免疫層析試紙條，根據(jù)在該免疫層析試紙條上展開待檢血樣時與該固 化皮質醇結合的標記抗皮質醇抗體的顯色，評價上述待檢血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢 測。此時，與下大靜脈的血樣的測定結果進行對比，當吸光度低于四分之一或無法用肉眼看 到顯色時，可以判斷血樣具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。
[0088] 在（C)步驟，根據(jù)在（Β)步驟測定的標記抗皮質醇抗體的量，評價血樣是否具有適 于腎上腺靜脈取樣檢測的品質。評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質可以采 取與評價方法1的（d)步驟同樣的操作。
[0089] 在本發(fā)明中，可以用固定有抗皮質醇抗體的免疫層析試紙條取代固定有皮質醇的 免疫層析試紙條。
[0090] 當使用上述免疫層析試紙條時，可以通過以下步驟評價血樣品質： (I)在固定有抗皮質醇抗體的免疫層析試紙條上展開待檢血樣,讓該血樣中所含皮質 醇與固定在該基材上的抗皮質醇抗體發(fā)生抗原抗體反應，從而使之與抗皮質醇抗體結合； (II) (I)步驟之后，再將標記皮質醇在免疫層析試紙條上展開，讓該標記皮質醇與固定 在該基材上的抗皮質醇抗體中的、未與血樣中所含皮質醇結合的抗皮質醇抗體發(fā)生抗原抗 體反應，使之結合到固定在基材的抗皮質醇抗體； (III) 定量在（II)步驟中與抗皮質醇抗體結合的標記皮質醇； (IV) 根據(jù)在（III)步驟中定量的標記皮質醇的量和固定在基材的抗皮質醇抗體的量， 算出血樣中皮質醇的含量； (V) 根據(jù)在（IV)步驟中算出的皮質醇含量，評價血樣是否具備適于腎上腺靜脈取樣檢 測的品質。以下將此血樣品質評價方法稱為"評價方法3"。
[0091] 在（I)步驟中，在固定有抗皮質醇抗體的免疫層析試紙條上展開待檢血樣，讓該血 樣中所含皮質醇與固定在基材的抗皮質醇抗體發(fā)生抗原抗體反應，從而與該抗皮質醇抗體 結合?？梢岳靡匝獦又兴后w成分為展開溶劑的毛細管現(xiàn)象，在免疫層析試紙條上展 開待檢血樣。
[0092] (I)步驟使用的免疫層析試紙條的基材的一端固定有抗皮質醇抗體。此免疫層析 試紙條可以通過將抗皮質醇抗體固定、封閉在基材后進行清洗制備而得。
[0093] 基材只要是由可以展開血樣的材料制成的即可?；淖詈媚軌蛴凶銐虻恼归_速 度，當展開血樣時，足以用固定在其基材上的抗皮質醇抗體捕捉皮質醇。展開速度和基材與 評價方法1同樣即可。
[0094] 在（II)步驟，進一步將標記皮質醇在（I)步驟后的免疫層析試紙條上展開，讓標 記皮質醇與固定在基材上的抗皮質醇抗體中未與血樣中所含皮質醇結合的抗皮質醇抗體 發(fā)生抗原抗體反應，以此與固定在該基材上的抗皮質醇抗體結合?？梢赃\用適當?shù)恼归_溶 齊IJ，利用毛細管現(xiàn)象在免疫層析試紙條上展開皮質醇。作為展開溶劑如有磷酸緩沖液等。
[0095] 標記皮質醇可以通過將金屬膠體粒子、熒光物質等標記物用常用方法結合到皮質 醇而獲得。
[0096] 從更簡便地評價血樣品質的角度來說，免疫層析試紙條的基材上固定的抗皮質醇 抗體最好比與待檢血樣的同體積的末梢血所含皮質醇反應的抗體的數(shù)量多，（II)步驟所用 標記皮質醇的量最好在與固定在該基材上的抗皮質醇抗體反應的皮質醇等量以上。
[0097] 在（III)步驟，定量結合到抗皮質醇抗體上的標記皮質醇?？梢愿鶕?jù)標記皮質醇 所含標記物的量來定量此標記皮質醇。
[0098] 在（IV)步驟，用（III)步驟定量的標記皮質醇的量和上述固定在基材上的抗皮質 醇抗體的量算出血樣中的皮質醇的含量。
[0099] 在（V)步驟，根據(jù)（IV)步驟算出的皮質醇含量，評價血樣是否具有適于腎上腺靜 脈取樣檢測的品質。在（V)步驟中評價血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質采取 與評價方法1 (e)步驟同樣的方法即可。
[0100] 如上所述，運用本發(fā)明的評價方法可以便捷地評價血樣品質，因此，能夠快速、方 便地評價血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢測。
[0101] 在本發(fā)明的評價方法中，利用標記抗皮質醇抗體，故可以靈敏地檢測出少量皮質 醇，從而僅用少量血樣即可簡便地評價血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢測。
[0102] 因此，運用本發(fā)明的評價方法，可以簡便地獲得適于腎上腺靜脈取樣檢測的血樣， 有望提高腎上腺靜脈取樣檢測的成功率。
[0103] 本發(fā)明還可以確定血樣的供應源。血樣的供應源可以通過以下步驟來確定： (i )步驟,混合待檢血樣和標記抗皮質醇抗體，引起標記抗皮質醇抗體與血樣中所含皮 質醇的抗原抗體反應； (ii )步驟，在固定有皮質醇的免疫層析試紙條上展開（i )步驟獲得的混合物，使上述混 合物中游離的標記抗皮質醇抗體與固定在基材上的皮質醇發(fā)生抗原抗體反應，從而與皮質 醇結合； (iii) 步驟，測定（ii)步驟中結合到皮質醇的標記抗皮質醇抗體的量； (iv) 步驟，根據(jù)（iii )步驟測定的標記抗皮質醇抗體的量，確定血樣的供應源。
[0104] (i)- (iii)步驟分別與評價方法1的（a)_ (c)步驟同樣操作。
[0105] 在（iv)步驟，根據(jù)（iii)步驟測定的標記抗皮質醇抗體的量確定血樣的供應源。
[0106] 在（iv)步驟，可以通過比較（iii)步驟所測得的標記抗皮質醇抗體量（以下稱"抗 體量 a"）和用與上述血樣同體積的下大靜脈血進行（i) - (iii)步驟操作時的標記抗皮質 醇抗體量（以下稱"抗體量b"）的方法等確定血樣的供應源。
[0107] 在上述方法中，抗體量a比抗體量b越少，待檢血樣中的皮質醇含量比下大靜脈血 中的皮質醇含量就越多，因此，可以確定待檢血樣的供應源是位于更靠近腎上腺附近的靜 脈。
[0108] 如上所述，運用血樣供應源確定方法，可以便捷地確定血樣供應源。因此，運用此 確定方法可以迅速、簡便地確定在進行腎上腺靜脈取樣檢測時插管采樣的位置。
[0109] 在本確定方法中，利用標記抗皮質醇抗體，故可以靈敏地檢測出少量皮質醇，從而 僅用少量血樣即可確認侵襲性很高的腎上腺靜脈取樣檢測的精度。
[0110] 因此，上述血樣供應源確定方法，因其可以精確、便捷地確定插管采集血樣的位 置，而有望進一步提高腎上腺靜脈取樣檢測的成功率。
[0111] 在本發(fā)明中，可以通過邊照射超聲波邊混合含有待檢物質的待檢試樣和針對該待 檢物質的金屬膠體標記抗體，在具備固定有該待檢物質的基材的免疫層析試紙條上展開所 得混合物，來檢測待檢物質。
[0112] 運用此法，因為是邊照射超聲波邊混合含有待檢物質的待檢試樣和針對該待檢物 質的金屬膠體標記抗體，故相對于通常用金屬膠體標記抗體的免疫層析試紙條有時難以檢 出待檢物的缺陷，具有能夠精確檢測待檢物的優(yōu)點。照射超聲波時的條件與前述相同即可。 實施例
[0113] 下面根據(jù)實施例更詳細地說明本項發(fā)明，但本發(fā)明不僅限于此實施例。
[0114] 實施例1 (制備免疫層析試紙條） 以作為基材的薄膜(密理博公司制，商品名：Hi-Flow Plus，60mmX4mm)-端（以下 稱"上游端"）為加樣區(qū)，在順加樣區(qū)縱長方向（薄膜的長邊）的另一端（以下稱"下游端"） 沿薄膜短邊平行條狀地涂敷由皮質醇一 3-羧甲基肟一牛血清白蛋白（BSA)(費茲杰羅 (Fitzgerald)公司制)溶于10mM磷酸緩沖液（pH7. 5)而配制成的濃度為lmg/mL的溶液（以 下稱"皮質醇溶液")，室溫干燥。然后用牛血清白蛋白（希格瑪公司制）封閉薄膜。
[0115] 將吸收墊(密理博公司制，20mmX4mm)貼到所得薄膜的皮質醇溶液涂敷部分長邊 方向的下游端，獲得免疫層析試紙條。
[0116] 在上述薄膜上展開膠體金標記抗皮質醇抗體，觀察是否出現(xiàn)紅色條帶，以此檢查 免疫層析試紙條的薄膜上是否固定有皮質醇一 3-羧甲基廂一牛血清白蛋白。檢查結果薄 膜上出現(xiàn)紅色條帶，故確認免疫層析試紙條的薄膜上固定有皮質醇一 3 -羧甲基肟一牛血 清白蛋白。
[0117] 由此得知，通過將0-羧甲基肟、BSA (牛血清白蛋白)與皮質醇結合，可以獲得固定 有皮質醇的免疫層析試紙條。
[0118] 以薄膜上的皮質醇一 3-羧甲基廂一牛血清白蛋白的固化部分為免疫層析試紙條 的檢測線。
[0119] 比較例1 除用皮質醇取代皮質醇一 3-羧甲基肟一牛血清白蛋白外，其他均與實施例1同樣操 作，獲得試紙條。
[0120] 在免疫層析試紙條的薄膜上展開膠體金標記抗皮質醇抗體，看是否出現(xiàn)紅色條帶 來確認其薄膜上是否固定有皮質醇。其結果未出現(xiàn)紅色條帶，故確認此試紙條的薄膜上未 固定皮質醇。
[0121] 實施例2 (1)制備免疫層析用試樣 以靜脈插管法從受檢者采集全血試樣。圖1為全血試樣采集位置的簡要說明圖。在圖 1中，1表示下大靜脈附近，2為右腎上腺旁，3為左腎上腺上游，4為左腎上腺下游，5為右 腎，6為左腎,7為右腎上腺,8為左腎上腺。
[0122] 從采自受檢者下大靜脈附近1抽取500μ?全血試樣并從中獲取血漿。將獲取的血 漿3〇μ?和2. 5μ? (膠體金標記抗皮質醇抗體的量）膠體金標記抗皮質醇抗體溶液(在波長 520nm處的吸光度：約4abs)加入反應池，用吸液管頭輕攪反應池內的混合物。
[0123] 另，膠體金標記抗皮質醇抗體溶液是通過混合皮質醇抗體（EN生物技術研究有限 公司（EnBioTec Laboratories ,EBTL)制，商品名：抗皮質醇）和膠體金溶液（BBI公司，商 品名：膠體金)，靜置獲得的混合物，離心分離，去除其上清，再去除游離的抗皮質醇抗體和 游離的膠體金粒子后，將獲得的膠體金標記抗皮質醇抗體混濁于緩沖液中獲得的溶液。
[0124] 將反應池放入超聲波清洗機（AS ONE公司制)中，發(fā)出1分鐘42kHz、100W超聲波， 攪拌混合物。此混合物作為實驗1號試樣使用。
[0125] 除將實驗1號膠體金標記抗皮質醇抗體溶液量換為5PL、7. 5PL或10μ?外，其余與 實驗1號一樣，分別依次制備實驗2號試樣、實驗3號試樣和實驗4號試樣。
[0126] (2)免疫層析 將實施例1獲得的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸入上述（1)獲得的反應池內的混合物 中，靜置4分鐘后，將免疫層析試紙條浸入清洗液中4分鐘，清洗免疫層析試紙條。
[0127] 然后觀察此免疫層析試紙條的檢測線有無來源于膠體金粒子的條帶。
[0128] 實施例2中觀察免疫層析試紙條的檢測線有無來源于膠體金粒子的條帶的觀察 結果見圖2的非繪圖的照片所示。條帶1為實驗1號試樣，條帶2為實驗2號試樣，條帶3 為實驗3號試樣，條帶4為實驗4號試樣。
[0129] 從圖2所示結果得知，當膠體金標記抗皮質醇抗體溶液量為5PL (實驗2號）以上 時、即膠體金標記抗皮質醇抗體的量為每10μL血樣中6.7μL·abs(3.8X108個）時，在檢 測線可以檢出來源于膠體金粒子的條帶。
[0130] 因此得知，混合膠體金標記抗皮質醇抗體和血樣，引起膠體金標記抗皮質醇抗體 和血樣中的皮質醇的抗原抗體反應時，可以設定膠體金標記抗皮質醇抗體的量，當待檢血 樣是腎上腺旁的血樣時，在免疫層析試紙條的檢測線上不出現(xiàn)條帶，當待檢血樣不是腎上 腺旁的血樣時，在免疫層析試紙條的檢測線上出現(xiàn)條帶。
[0131] 實施例3 除與在實施例2使用的血樣不同和膠體金標記抗皮質醇抗體溶液的量不同外，其余與 實施例2同樣的方法進行免疫層析。在實施例2中使用的血樣為以下：圖1中采自受檢者 下大靜脈附近1的下大靜脈血全血試樣中獲得的血漿（以下稱"標準試樣")、從圖1右腎上 腺旁2采得的全血試樣中獲得的血漿（以下稱"右腎上腺旁試樣")、從圖1左腎上腺下游3 采得的全血試樣中獲得的血漿（以下稱"左腎上腺下游試樣")及從采自圖1左腎上腺上游4 的全血試樣獲得的血漿（以下稱"左腎上腺上游試樣")，膠體金標記抗皮質醇抗體溶液的量 設定為5μ?[膠體金標記抗皮質醇抗體的量：20μ? *abs (11. 4X 108個）]或7. 5μ?[膠體金 標記抗皮質醇抗體的量：30μ? · abs (17. 25 X 108個）]。
[0132] 然后用吸光度計[浜松光子學株式會社制，商品名：免疫層析試紙條測定裝置 ICA-1000]測定各免疫層析試紙條的檢測線在波長520nm的吸光度。
[0133] 對各血樣進行三次免疫層析測定。膠體金標記抗皮質醇抗體溶液的量為5μ?時， 免疫層析后免疫層析試紙條的檢測線上的吸光度以及由此吸光度算出的各試樣中所含皮 質醇的量如表1所示。
[0134] [表 1] _

【權利要求】
1. 一種用于判斷血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質的免疫層析試紙條，其 中，基材的一端設置有加樣區(qū)，所述基材的另一端處通過經牛血清白蛋白與該基材結合的 接頭而與皮質醇結合，與所述皮質醇結合的部分的長邊方向的下游端設有吸收墊。
2. -種用于判斷血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測的品質的免疫層析試紙條，其 基材的一端設置有標記抗體相，所述標記杭體相上有標記抗皮質醇抗體，該標記抗皮質醇 抗體可通過與待檢血樣接觸而脫離，該基材的另一端處通過經牛血清白蛋白與該基材結合 的接頭而與皮質醇結合，與所述皮質醇結合的部分的長邊方向的下游端設有吸收墊，從該 免疫層析試紙條的所述標記杭體相的一端展開血樣。
3. -種包含權利要求1或者2所述的免疫層析試紙條的血樣品質評價用試劑盒。
【文檔編號】G01N33/543GK104251903SQ201410489223
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2008年11月25日 優(yōu)先權日:2007年11月22日
【發(fā)明者】井手上公太郎, 米田隆, 高村禪 申請人:特拉斯醫(yī)藥有限公司