Ncx1和nckx4作為診斷動脈導(dǎo)管閉合或開放的標志物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及NCX1和NCKX4作為診斷動脈導(dǎo)管閉合或開放的標志物。本發(fā)明通過western blot、Qrt-PCR和免疫熒光三種方法對動脈導(dǎo)管閉合及開放的患者進行了蛋白表達差異的分析，首次證明NCX1、NCKX4蛋白在人動脈導(dǎo)管組織中表達，并且這些蛋白在閉合和開放的兩組動脈導(dǎo)管組織中的相對表達量具有明顯的差異，可能是調(diào)控動脈導(dǎo)管閉合或開放的關(guān)鍵因子，可用于動脈導(dǎo)管未閉的臨床診斷，且診斷的準確度高。
【專利說明】NCX1和NCKX4作為診斷動脈導(dǎo)管閉合或開放的標志物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)及醫(yī)學(xué)的臨床診斷【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及NCX1和 NCKX4作為診斷動脈導(dǎo)管閉合或開放的標志物。

【背景技術(shù)】
[0002] 動脈導(dǎo)管是主動脈與肺動脈之間的一根管道，為胎兒循環(huán)的重要通路。小兒出生 后，動脈導(dǎo)管即在功能上關(guān)閉，絕大多數(shù)嬰兒生后3個月左右在解剖上逐漸閉合成為動脈 初帶，若不閉合即稱動脈導(dǎo)管未閉。動脈導(dǎo)管的閉合分為兩期；1.第一期為生理閉合期。嬰 兒出生啼哭后第一 口吸氣，肺泡即膨脹，肺血管阻力隨之下降，肺動脈血流開始直接進入肺 臟，建立正常的肺循環(huán)，而不流經(jīng)動脈導(dǎo)管，促進其閉合。動脈導(dǎo)管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)與兩側(cè)的 主動脈、肺動脈不同，管壁主要由平滑肌而不是彈性纖維組織組成，中層含粘性物質(zhì)。足月 嬰兒出生后血氧張力升高，作用于平滑肌，使之環(huán)形收縮，同時管壁粘性物質(zhì)凝固，內(nèi)膜墊 突入管腔，造成血流阻滯，營養(yǎng)障礙和細胞分解性壞死，因而導(dǎo)管發(fā)生生理性閉合。一般在 出生后10?15小時內(nèi)完成，但在7?8天內(nèi)有潛在性再開放的可能。2.此后內(nèi)膜墊彌漫 性纖維增生完全封閉管腔，最終形成導(dǎo)管初帶。導(dǎo)管纖維化一般起始于肺動脈側(cè)，向主動脈 延伸，但主動脈端可W不完成，因而呈壺腹狀。纖維化解剖性閉合，88%嬰兒于8周內(nèi)完成。 如該閉合過程延遲稱動脈導(dǎo)管延期未閉。動脈導(dǎo)管出生后6個月未能閉合，將終生不能閉 合，則稱持續(xù)動脈導(dǎo)管閉鎖不全，臨床上簡稱動脈導(dǎo)管閉鎖不全。
[0003] 軸巧交換蛋白（NC幻是廣泛存在于動物細胞膜上的一種離子轉(zhuǎn)運蛋白，它在調(diào)節(jié) 細胞內(nèi)巧離子平衡中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。迄今為止，科學(xué)家已克隆出8個不同類型、兩大家 族的 NCX，他們分別是 NCX1、NCX2、NCX3 W及鐘 W來的 NCX NCKX1、NCKX2、NCKX3、NCKX4 W 及 NCKX5。
[0004] 有許多從左向右分流也內(nèi)崎形在胸骨左緣可聽到同樣的連續(xù)性機器樣雜音或接 近連續(xù)的雙期也雜音，難W辨識，在建立動脈導(dǎo)管未閉診斷進行治療前必須予W鑒別。目前 尚未見關(guān)于動脈導(dǎo)管閉合診斷標志物的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供用于診斷動脈導(dǎo)管未閉的標志物。
[0006] 在本發(fā)明的第一方面，NCX1蛋白可用作診斷動脈導(dǎo)管未閉的標志物。
[0007] 據(jù)此，本發(fā)明提供了 NCX1蛋白或其特異性抗體的用途，用于制備診斷動脈導(dǎo)管未 閉的試劑或試劑盒。
[0008] 還提供了一種用于診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑盒，所述的試劑盒包含檢測NCX1蛋 白含量的試劑和檢測目-actin蛋白含量的試劑。
[0009] 優(yōu)選地，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測 目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0010] 還提供了一種芯片或陣列，所述的芯片或陣列上具有檢測NCX1蛋白的試劑和檢 測目-actin蛋白含量的試劑。
[0011] 優(yōu)選地，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測 目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0012] 在本發(fā)明的另一方面，NCKX4蛋白可用作診斷動脈導(dǎo)管未閉的標志物。
[0013] 據(jù)此，本發(fā)明提供了 NCKX4蛋白或其特異性抗體的用途，用于制備診斷動脈導(dǎo)管 未閉的試劑或試劑盒。
[0014] 還提供了一種用于診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑盒，所述的試劑盒包含檢測NCKX4蛋 白含量的試劑和檢測目-actin蛋白含量的試劑。
[0015] 優(yōu)選地，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢 測目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[0016] 還提供了一種芯片或陣列，所述的芯片或陣列上具有檢測NCKX4蛋白的試劑和檢 測目-actin蛋白含量的試劑。
[0017] 優(yōu)選地，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢 測目-actin蛋白含量的試劑為目-actin蛋白的特異性抗體。
[001引本發(fā)明優(yōu)點在于：
[0019] 本發(fā)明通過western blot、化t-PCR和免疫英光H種方法對動脈導(dǎo)管閉合及開放 的患者進行了蛋白表達差異的分析，首次證明NCX1、NCKX4蛋白在人動脈導(dǎo)管組織中表達， 并且該些蛋白在閉合和開放的兩組動脈導(dǎo)管組織中的相對表達量具有明顯的差異，可能是 調(diào)控動脈導(dǎo)管閉合或開放的關(guān)鍵因子，可用于動脈導(dǎo)管未閉的臨床診斷，且診斷的準確度 商。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 附圖 1 是 NCX1、NCKX3 和 NCKX4 的 Western-blot 實驗結(jié)果。
[002。 附圖2是NCX1、NCKX3和NCKX4的化t-PCR實驗結(jié)果，其中白色立柱為閉合組，黑 色立柱為開放組。
[0022] 附圖3是NCX1、NCKX3和NCKX4的免疫英光實驗結(jié)果，其中白色立柱為閉合組，黑 色立柱為開放組。

【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。下列實施例中未注 明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆；實驗手冊（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建 議的條件。
[0024] 實施例1
[00幼 1.材料和方法
[0026] 1. 1分離人動脈導(dǎo)管組織
[0027] 該實驗所有步驟和過程均獲得上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會批準。開放（n = 10,年齡=30. 2 + 6. 3天）或閉合（n = 10,年齡=25. 3 + 7. 9天）的動脈導(dǎo)管組織取自于 手術(shù)過程中的動脈導(dǎo)管依賴的先天性也臟病患兒（患兒詳細信息見表1)。所有病人在手 術(shù)前均使用前列腺素El,但閉合組的動脈導(dǎo)管在手術(shù)前依然閉合了。動脈導(dǎo)管的狀態(tài)（開 放或閉合）均經(jīng)過也臟超聲和CT確認，并在手術(shù)過程加W確認。所有樣本用生理鹽水沖洗 后，分成四部分，并迅速凍存于液氮中。
[002引表1患兒臨床信息
[0029]

【權(quán)利要求】
1. NCX1蛋白或其特異性抗體的用途，其特征在于，用于制備診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑 或試劑盒。
2. -種用于診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含檢測NCX1蛋 白含量的試劑和檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑為 NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特異性 抗體。
4. 一種芯片或陣列，其特征在于，所述的芯片或陣列上具有檢測NCX1蛋白的試劑和檢 測@ -actin蛋白含量的試劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的芯片或陣列，其特征在于，所述的檢測NCX1蛋白含量的試劑 為NCX1蛋白的特異性抗體，所述的檢測0-actin蛋白含量的試劑為0-actin蛋白的特異 性抗體。 6. NCKX4蛋白或其特異性抗體的用途，其特征在于，用于制備診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑 或試劑盒。
7. -種用于診斷動脈導(dǎo)管未閉的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含檢測NCKX4 蛋白含量的試劑和檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試劑為 NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢測0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的特異性 抗體。
9. 一種芯片或陣列，其特征在于，所述的芯片或陣列上具有檢測NCKX4蛋白的試劑和 檢測0 -actin蛋白含量的試劑。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的芯片或陣列，其特征在于，所述的檢測NCKX4蛋白含量的試 劑為NCKX4蛋白的特異性抗體，所述的檢測0 -actin蛋白含量的試劑為0 -actin蛋白的 特異性抗體。
【文檔編號】G01N33/68GK104502604SQ201410723762
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】劉錦紛, 洪海筏, 葉霖財 申請人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心