一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。本實(shí)用新型操作簡單，可同時對甲羥孕酮及其抗體殘留進(jìn)行批量定性檢測。
【專利說明】一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫化學(xué)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種定性檢測甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡。

【背景技術(shù)】
[0002]醋酸甲輕孕酮(Medroxyprogesterone acetate，MPA)，又稱甲輕孕酮、甲孕酮、安宮黃體酮，是一種孕激素類藥物，臨床上主要用于長效避孕、流產(chǎn)、功能性閉經(jīng)、子宮出血等的治療和一些腫瘤的姑息治療。在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，MPA和其他蛋白同化激素藥物一樣，作為生長促進(jìn)劑用于動物的增肥和非發(fā)情期誘導(dǎo)發(fā)情、誘發(fā)超數(shù)排卵、同步發(fā)情等，以提高繁殖率和經(jīng)濟(jì)效益。但MPA具有廣泛的毒副作用，可引起不規(guī)則性出血、閉經(jīng)、精神抑郁、失眠、惡心、乳脹等不良反應(yīng)，甚至導(dǎo)致不孕不育癥，因此MPA作為飼料添加劑在動物體內(nèi)不斷累積嚴(yán)重威脅著人類健康。歐盟成員國早已嚴(yán)禁在食源性動物飼養(yǎng)管理中使用MPA，并規(guī)定其在食源性動物產(chǎn)品中殘留最高限量(MRL)為“不得檢出”。我國農(nóng)業(yè)部2002年4月發(fā)布的第193號公告《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》中明確將醋酸甲羥孕酮及其制劑列為禁用藥物。
[0003]目前，甲羥孕酮及其衍生物的殘留檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS )，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS )或多級聯(lián)用技術(shù)，如LC-MS-MS等。理化檢測方法，雖然靈敏度高，但需要昂貴的儀器設(shè)備、經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員，以及復(fù)雜的提取凈化過程，不利于在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。膠體金標(biāo)記免疫分析法是近年來迅速發(fā)展的一種新型分析技術(shù)，其特點(diǎn)是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓(xùn)，且所有試劑包含在一根試紙條上，非常適合于現(xiàn)場檢測，具有廣闊的市場前景和應(yīng)用價值。本課題得到國家自然科學(xué)基金(U1204310)和河南省高?？萍紕?chuàng)新人才計劃(14HASTIT026)資金支持。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型解決的技術(shù)問題是提供了一種操作簡便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高、成本低廉且穩(wěn)定性好，可進(jìn)行批量檢測的甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡。
[0005]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。
[0006]本實(shí)用新型所述的塑料卡殼上加樣孔的形狀為漏斗狀橢圓形開口，塑料卡殼的兩端開有透氣孔，且透氣孔為多個，呈扇形排列，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
[0007]本實(shí)用新型所述的樣品墊左側(cè)的硝酸纖維素膜上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，其中醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應(yīng)。本實(shí)用新型所述的樣品墊左側(cè)的金標(biāo)抗體結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗甲羥孕酮單克隆抗體。
[0008]本實(shí)用新型所述的樣品墊右側(cè)的硝酸纖維素膜上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，其中抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應(yīng)。本實(shí)用新型所述的樣品墊右側(cè)的金標(biāo)抗原結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
[0009]本實(shí)用新型具有如下有益效果:
[0010](I)操作簡單、方便快捷。使用快速檢測試紙卡時無需其它任何儀器或試劑，只需將處理后的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內(nèi)4-6滴，3-5 min即可觀察結(jié)果。
[0011](2)能同時檢測甲羥孕酮及其抗體殘留，結(jié)果形象、直觀。當(dāng)?shù)谝挥^察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示甲羥孕酮含量呈陽性，當(dāng)C線和T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II ”印跡時，表示甲羥孕酮含量呈陰性；當(dāng)?shù)诙^察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示抗體含量呈陽性，當(dāng)C線和T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II”印跡時，表示抗體含量呈陰性。結(jié)果形象直觀，簡單準(zhǔn)確，不容易出現(xiàn)誤判。
[0012](3)塑料卡殼上的透氣孔使溶液“爬坡”順暢，顯色時間短。透氣孔使塑料卡殼內(nèi)非常狹窄的空間與外界保持空氣流通，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測物能夠快速地定向移動至透氣孔，避免了阻滯或者不完全泳動等現(xiàn)象，提高了顯色效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本實(shí)用新型中試紙條的側(cè)視圖。
[0014]圖面說明:1、塑料卡殼，2、第一觀察窗，3、第二觀察窗，4、加樣孔，5、透氣孔，6、手持端，7、支撐層，8、樣品墊，9、金標(biāo)抗體結(jié)合墊，10、金標(biāo)抗原結(jié)合墊，11、硝酸纖維素膜，12、質(zhì)控線C線，13、醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線，14、抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線，15、吸收墊。

【具體實(shí)施方式】
[0015]結(jié)合附圖詳細(xì)描述實(shí)施例。一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，包括塑料卡殼I和封裝于塑料卡殼I內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼I的中部設(shè)有加樣孔4，該加樣孔4的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗2、第二觀察窗3和透氣孔5，并且在加樣孔4的位置設(shè)有手持端6，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層7，附著在支撐層7中央的為樣品墊8，該樣品墊8與塑料卡殼I上加樣孔4的位置相對應(yīng)；樣品墊8左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊9、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12，兩者間距5mm，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12與塑料卡殼I上第一觀察窗2的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗體結(jié)合墊9上灌注有膠體金標(biāo)記的抗甲羥孕酮單克隆抗體；樣品墊8右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊10、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12，兩者間距5mm，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12與塑料卡殼I上第二觀察窗3的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗原結(jié)合墊10上灌注有膠體金標(biāo)記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
[0016]本實(shí)用新型所述的塑料卡殼I上加樣孔4的形狀為漏斗狀橢圓形開口，所述的塑料卡殼I的兩端開有呈扇形排列的透氣孔5，并且透氣5孔、第一觀察窗2、第二觀察窗3和加樣孔4處于塑料卡殼I的同一水平面上。
[0017]本實(shí)用新型所述的支撐層7是由聚氯乙烯樹脂與穩(wěn)定劑及輔料配合制成的PVC板。本實(shí)用新型所述的吸收墊15是由吸水能力極強(qiáng)的植物長纖維為原材料制成的純白濾紙。本實(shí)用新型所述的樣品墊8、金標(biāo)抗體結(jié)合墊9和金標(biāo)抗原結(jié)合墊10是由玻璃纖維棉制作而成的。本實(shí)用新型所述的樣品墊8與金標(biāo)抗體結(jié)合墊9和金標(biāo)抗原結(jié)合墊10的疊壓寬度分別為l_2mm，吸收墊15與硝酸纖維素膜11的疊壓寬度為l_2mm。
[0018]本實(shí)用新型所述的試紙卡的制備方法:
[0019]I)硝酸纖維素膜的制備:將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點(diǎn)儀平臺上，醋酸甲羥孕酮-OVA包被原或抗甲羥孕酮單克隆抗體放于A池，RaMIgG放于B池，展平壓緊，開機(jī)后將抗原和二抗分別點(diǎn)射于硝酸纖維素膜上，形成檢測線T線和質(zhì)控線C線。室溫自然干燥后，將其浸入封閉液(質(zhì)量濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，pH 7.4)中30min，37°C烘干后，加入干燥劑，4 0C密封保存。
[0020]2)結(jié)合墊的制備:將玻璃纖維棉裁成4mm寬的細(xì)條，放入含質(zhì)量濃度為5%的BSA，質(zhì)量濃度為2%的蔗糖，質(zhì)量濃度為0.8%的NaCl和質(zhì)量濃度為0.05%的似乂的PBS處理液中20min，37°C恒溫烘干，然后將金標(biāo)抗體或金標(biāo)抗原灌注已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4h，即為結(jié)合墊。
[0021]3)樣品墊的制備:玻璃纖維棉要用含質(zhì)量濃度為2%的BSA，質(zhì)量濃度為1%的蔗糖，質(zhì)量濃度為0.5%的硼酸鈉和質(zhì)量濃度為0.1%的似乂的PBS處理后，干燥備用，即為樣品墊。
[0022]4)吸收墊的制備:將吸水能力極強(qiáng)的植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機(jī)切成4 mm寬的細(xì)條，并用膠膜進(jìn)行一側(cè)封閉，干燥備用。
[0023]5)試紙條的制備:在支撐板(PVC板)上，將硝酸纖維素膜、結(jié)合墊、樣品墊和吸收墊等按一定工藝組裝在一起，用CM4000切割機(jī)制成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的密閉容器中儲存。
[0024]6)試紙卡的組裝:按一定工藝將試紙條封裝于帶有加樣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔的特制的塑料卡殼中，即為本實(shí)用新型的試紙卡。
[0025]本實(shí)用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0026]I)樣品前處理:
[0027]取均質(zhì)器或搗碎機(jī)勻漿后的動物組織樣品5g，加20ml乙腈水溶液(85份乙腈+15份水)混勾，然后沸水浴加熱5min ;混合液定容為原體積，3000r/min離心lOmin，取上清液lml，加入4ml正已燒去脂，旋轉(zhuǎn)混合5min，3000r/min離心lOmin，取下層溶液用于試紙卡檢測。
[0028]2)樣品滴加:
[0029]將試紙卡平放后，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內(nèi)4-6滴，3-5min后即可觀察結(jié)果。
[0030]3)檢測結(jié)果分析:
[0031]陰性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線和檢測線T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II ”印跡時，判為陰性。
[0032]陽性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線顯示一條紅色“ I ”印跡，而檢測線T線不顯色，判為陽性。
[0033]無效:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線不顯示紅色條帶，則無論檢測線T線是否出現(xiàn)紅色印跡，該試紙卡均判為無效。
[0034]以上實(shí)施例僅為說明本實(shí)用新型的技術(shù)思想，不能以此限定本實(shí)用新型的保護(hù)范圍，凡是按照本實(shí)用新型提出的技術(shù)思想，在技術(shù)方案基礎(chǔ)上所做的任何改動，均落入本實(shí)用新型保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且醋酸甲羥孕酮-OVA包被原印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗體結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗甲羥孕酮單克隆抗體，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且抗甲羥孕酮單克隆抗體印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗原結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的醋酸甲羥孕酮載體蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲羥孕酮及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于:所述的塑料卡殼的兩端開有呈扇形排列的透氣孔，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
【文檔編號】G01N33/74GK204241491SQ201420708887
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日
【發(fā)明者】姜金慶, 王秋霞, 楊理, 王自良, 范國英, 齊永華 申請人:河南科技學(xué)院