本發(fā)明涉及一種檢測試紙，具體是一種檢測餐具中腸炎沙門氏菌的檢測卡。

背景技術(shù)：

腸炎沙門氏菌（Salmonellaenteritidis，SE）是引起食物中毒的常見致病菌，在公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義，家禽、蛋及肉類產(chǎn)品是SE的主要傳播媒介，嚴(yán)重影響著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和人類健康，因此對易受SE污染的食品在流入市場前應(yīng)進行嚴(yán)格的檢測。

動物性食品安全問題被作為一個社會健康問題受到廣泛的關(guān)注，與之相應(yīng)的檢測能力也正在不斷提高，安全檢測技術(shù)朝準(zhǔn)確、快速、便捷的方向研發(fā)。檢測工具，新的設(shè)備和檢測卡層出不窮，尤其是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等方面更是研制出了各種新型的快速檢測檢測卡，在提高沙門氏菌的檢測速度，簡化樣品處理的繁雜步驟的同時降低了檢測人員的操作要求，使其對檢測卡的利用產(chǎn)生依賴性。然而檢測用檢測卡被廣泛應(yīng)用于市場，卻沒有統(tǒng)一的管理系統(tǒng)和規(guī)范的參照標(biāo)準(zhǔn)對其進行評估，造成這些檢測卡在質(zhì)量上出現(xiàn)參差不齊的狀況，表現(xiàn)在靈敏度、特異性和穩(wěn)定性有所差異，使得各實驗室間/各檢測人員間檢測結(jié)果在真實性上得不到保障，難免出現(xiàn)動物性食品中腸炎沙門氏菌的錯檢或漏檢，不僅有可能導(dǎo)致我國進出口在國際貿(mào)易中發(fā)生重大經(jīng)濟損失，還有可能對人類的健康造成威脅。而目前，我國在動物性食品安全檢測檢測卡上的管理基本處于空白，為了在提高腸炎沙門氏菌檢測效率的同時保障實驗室間以及檢測人員間的檢測能力，確保檢測結(jié)果的有效性，必須規(guī)范對檢測卡產(chǎn)品的使用，填補管理上的空白，因此，研發(fā)可用于檢測卡和日常檢測質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)勢在必行。

然而，目前無論國內(nèi)外對食品安全檢測領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究甚少，對于微生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究制備還是處于起步階段，我國標(biāo)準(zhǔn)值的研制開始于20世紀(jì)80年代，研究至今我國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)雖已基本滿足經(jīng)濟建設(shè)的需要，但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和新型材料設(shè)備的不斷涌現(xiàn)，現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)品種已不能完全滿足需求，尤其是在生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)范圍，我國研制的與食品分析有關(guān)的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)約390種，這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均為生物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，主要用在食品安全、營養(yǎng)評價、環(huán)境衛(wèi)生評價等方面。雖然我國在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究上經(jīng)過了20多年的研究，但是依然存在以下問題：種類少、重復(fù)研制現(xiàn)象多，在與微生物、畜禽等相關(guān)的成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究上還相對空白，研制的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)確度不高，且很多標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不能提供出不確定度的參考信息。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測餐具中腸炎沙門氏菌的檢測卡及其檢測方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種檢測餐具中腸炎沙門氏菌的檢測卡，包括樣液吸收部分、底板、金標(biāo)沙門氏菌抗體層、檢測反應(yīng)部分和吸水部分，在底板的背襯上從左往右依次貼有樣液吸收部分、金標(biāo)沙門氏菌抗體層、檢測反應(yīng)部分和吸水部分，與金標(biāo)沙門氏菌抗體層相連的檢測反應(yīng)部分上包被有抗腸炎沙門氏菌抗體(多抗或單抗)形成的檢測線和由兔抗鼠IgG抗體形成的控制線。

作為本發(fā)明進一步的方案：金標(biāo)沙門氏菌抗體層的制備方法包括下述步驟：A膠體金的制備，在濃度為0.004～0.012％的氯金酸中加入其體積的1.2～2％、濃度為1～3％的檸檬酸三鈉，煮沸10～20分鐘，可得到15～50納米的膠體金溶液；B膠體金標(biāo)記抗沙門氏菌單克隆抗體，在膠體金溶液中用0.2m碳酸鉀溶液調(diào)pH7.8～8.8，按1～6mg/100ml加入抗沙門氏菌單克隆抗體，攪拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入動物血清蛋白，4℃靜置2-4小時；C將上述膠體金溶液經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10～15分鐘，棄沉淀物，得上清液；D將上清液經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘離心60～80分鐘離心得沉淀物；E將沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI緩沖液得膠體金溶液，該緩沖液中含0.2-0.6％的動物血清蛋白和0.01-0.06％疊氮鈉；F將上述膠體金溶液浸入玻璃纖維或無紡布至液體開始滲出為止，37℃干燥過濾形成金標(biāo)抗體層。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述檢測線和控制線的制備方法包括下述步驟，取出抗沙門氏菌抗體，調(diào)濃度至1mg/ml，加入2％的甲醛，用噴膜機在纖維素膜中段噴檢測線7；再取羊或兔抗鼠IgG調(diào)濃度為2mg/ml，加入2％的甲醛，用噴膜機在纖維素膜中段，距檢測線0.5cm處，噴控制線6，按20ul/10cm設(shè)置噴膜量，噴膜。37℃干燥，2小時，再用0.01ml，pH7.0含10％小牛血清的PBS，在37℃下封閉30分鐘，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，所述檢測反應(yīng)部分是在纖維素膜上設(shè)有羊或兔沙門氏菌抗體或沙門氏菌單克隆抗體構(gòu)成的檢測線(7)和由羊或兔抗鼠IgG抗體形成的控制線。

作為本發(fā)明再進一步的方案：所述的固定劑為甲醛或丙酮。

作為本發(fā)明再進一步的方案：其檢測方法是：將膠體金標(biāo)記的沙門氏菌抗體(多抗和單抗)在于玻璃纖維或無紡布載體上，與膠體金標(biāo)記抗體載體相連的檢測載體上包被抗沙門氏菌抗體(多抗或單抗)形成的檢測線和由羊或兔抗鼠IgG抗體形成的控制線；(2)取檢測樣本稀釋液滴于膠體金標(biāo)記抗體的載體上，如上述樣品稀釋液含有沙門氏菌，則在檢測載體上會形成紫紅色的檢測線和控制線兩條線，則檢測結(jié)果判定為陽性；若僅有控制線顯色，則結(jié)果判定為陰性。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用檢測卡的方式對腸炎沙門氏菌在餐具中的殘留情況進行檢測，具有較高的特異性和靈敏性，且操作簡便，無需專門設(shè)施。具有較高的特異性和靈敏性，檢測過程操作迅速、快捷、方便，適用于臨床檢驗、流行病學(xué)調(diào)查和場地檢疫等多種場合。制備方法簡便、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的整體結(jié)構(gòu)圖。

圖中：1-底板、2-液吸收部分、3-金標(biāo)沙門氏菌抗體層、4-檢測反應(yīng)部分、5-檢測線、6-控制線、7-吸水部分。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進一步詳細(xì)地說明。

請參閱圖1，一種檢測餐具中腸炎沙門氏菌的檢測卡，包括樣液吸收部分2、底板1、金標(biāo)沙門氏菌抗體層3、檢測反應(yīng)部分4和吸水部分7，在底板1的背襯上從左往右依次貼有樣液吸收部分2、金標(biāo)沙門氏菌抗體層3、檢測反應(yīng)部分4和吸水部分7，與金標(biāo)沙門氏菌抗體層3相連的檢測反應(yīng)部分4上包被有抗腸炎沙門氏菌抗體(多抗或單抗)形成的檢測線5和由兔抗鼠IgG抗體形成的控制線6。

金標(biāo)沙門氏菌抗體層3的制備方法包括下述步驟：A膠體金的制備，在濃度為0.004～0.012％的氯金酸中加入其體積的1.2～2％、濃度為1～3％的檸檬酸三鈉，煮沸10～20分鐘，可得到15～50納米的膠體金溶液；B膠體金標(biāo)記抗沙門氏菌單克隆抗體，在膠體金溶液中用0.2m碳酸鉀溶液調(diào)pH7.8～8.8，按1～6mg/100ml加入抗沙門氏菌單克隆抗體，攪拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入動物血清蛋白，4℃靜置2-4小時；C將上述膠體金溶液經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10～15分鐘，棄沉淀物，得上清液；D將上清液經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘離心60～80分鐘離心得沉淀物；E將沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI緩沖液得膠體金溶液，該緩沖液中含0.2-0.6％的動物血清蛋白和0.01-0.06％疊氮鈉；F將上述膠體金溶液浸入玻璃纖維或無紡布至液體開始滲出為止，37℃干燥過濾形成金標(biāo)抗體層。

檢測線和控制線的制備方法包括下述步驟，取出抗沙門氏菌抗體，調(diào)濃度至1mg/ml，加入2％的甲醛，用噴膜機在纖維素膜中段噴檢測線7；再取羊或兔抗鼠IgG調(diào)濃度為2mg/ml，加入2％的甲醛，用噴膜機在纖維素膜中段，距檢測線0.5cm處，噴控制線6，按20ul/10cm設(shè)置噴膜量，噴膜。37℃干燥，2小時，再用0.01ml，pH7.0含10％小牛血清的PBS，在37℃下封閉30分鐘，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。

反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，所述檢測反應(yīng)部分是在纖維素膜上設(shè)有羊或兔沙門氏菌抗體或沙門氏菌單克隆抗體構(gòu)成的檢測線(7)和由羊或兔抗鼠IgG抗體形成的控制線。固定劑為甲醛或丙酮。

本發(fā)明的工作原理是：其檢測方法是：將膠體金標(biāo)記的沙門氏菌抗體(多抗和單抗)在于玻璃纖維或無紡布載體上，與膠體金標(biāo)記抗體載體相連的檢測載體上包被抗沙門氏菌抗體(多抗或單抗)形成的檢測線和由羊或兔抗鼠IgG抗體形成的控制線；(2)取檢測樣本稀釋液滴于膠體金標(biāo)記抗體的載體上，如上述樣品稀釋液含有沙門氏菌，則在檢測載體上會形成紫紅色的檢測線和控制線兩條線，則檢測結(jié)果判定為陽性；若僅有控制線顯色，則結(jié)果判定為陰性。

其檢測方法是：將膠體金標(biāo)記的沙門氏菌抗體(多抗和單抗)在于玻璃纖維或無紡布載體上，與膠體金標(biāo)記抗體載體相連的檢測載體上包被抗沙門氏菌抗體(多抗或單抗)形成的檢測線和由羊或兔抗鼠IgG抗體形成的控制線；(2)取檢測樣本稀釋液滴于膠體金標(biāo)記抗體的載體上，如上述樣品稀釋液含有沙門氏菌，則在檢測載體上會形成紫紅色的檢測線和控制線兩條線，則檢測結(jié)果判定為陽性；若僅有控制線顯色，則結(jié)果判定為陰性。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。