本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)檢測領(lǐng)域，特別是指一種不同煙區(qū)烤煙煙葉香氣物的分析方法。

背景技術(shù)：

煙草香氣是指由煙草直接散發(fā)或者燃燒時(shí)產(chǎn)生的令人愉快的氣味，它也是評價(jià)煙葉及其制品品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。然而，煙葉中所含致香物質(zhì)的種類、含量和組成比例是決定煙葉香氣風(fēng)格的重要因素，也是評價(jià)卷煙產(chǎn)品品質(zhì)特色的主要影響因子，分析煙葉中香氣物質(zhì)的主要種類及其含量對指導(dǎo)卷煙配方、加香加料有重要的實(shí)用價(jià)值。因此，國內(nèi)外研究者主要從生態(tài)環(huán)境、栽培措施和發(fā)酵工藝等方面對有關(guān)影響烤煙香氣物質(zhì)形成的因子進(jìn)行了大量的研究,研究結(jié)果表明，生態(tài)環(huán)境對煙葉香氣物質(zhì)的形成起著主導(dǎo)性作用。目前，對于煙葉中揮發(fā)性香氣物質(zhì)的研究主要采用水蒸氣蒸餾-二氯甲烷溶劑萃取法，而利用同時(shí)蒸餾-石油醚萃取法提取煙葉中揮發(fā)性香氣物質(zhì)的研究較少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出不同煙區(qū)烤煙煙葉香氣物的分析方法，采用同時(shí)蒸餾-石油醚萃取法與氣-質(zhì)聯(lián)用對不同烤煙主產(chǎn)區(qū)煙葉中揮發(fā)性香氣物質(zhì)的種類和含量進(jìn)行比較分析，了解不同煙區(qū)煙葉的致香成分與生態(tài)條件的關(guān)系，為國內(nèi)開發(fā)優(yōu)質(zhì)烤煙及彌補(bǔ)煙葉香氣不足提供理論依據(jù)和方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種不同煙區(qū)烤煙煙葉香氣物的分析方法，包括步驟：

(1)選取不同煙區(qū)同等級煙葉；

(2)采用同時(shí)蒸餾萃取法進(jìn)行前處理；

(3)將步驟(2)中萃取所得香氣濃縮物由GC-MS鑒定結(jié)果和NIST庫檢索定性；

(4)結(jié)果的對比與分析。

進(jìn)一步，步驟(2)中，同時(shí)蒸餾萃取法為：稱取粉碎后的煙葉于圓底燒瓶中，加入水，電熱套加熱；在另一個(gè)燒瓶中加入石油醚，水浴加熱，同時(shí)蒸餾萃取2.5h后，保留石油醚萃取液，加入無水硫酸鈉搖勻至溶液澄清，轉(zhuǎn)移有機(jī)相至雞心瓶，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45℃水浴中將其濃縮，所得香氣濃縮物由GC-MS鑒定結(jié)果和NIST庫檢索定性。

進(jìn)一步，步驟(3)中，檢測方法為，采用氣質(zhì)聯(lián)用儀對煙葉樣品進(jìn)行定性分析。GC-MS條件：載氣及流速：He,0.8mL/min；柱頭壓170kPa；進(jìn)樣口溫度：250℃；傳輸線溫度：220℃；離子源溫度:177℃；升溫程序：初溫50℃，恒溫1min后以3℃/min升至120℃，保持2min；再以5℃/min升至180℃，保持10min，再以10℃/min升至250℃，保持15min；分流比：1:15；進(jìn)樣量2.0：n；電離方式：EI；電離能：70eV；電子倍增器電壓350V；質(zhì)量掃描范圍:35-350amu。采用NIST譜庫檢索定性。

本發(fā)明的所述不同煙區(qū)烤煙煙葉香氣物的分析方法，采用同時(shí)蒸餾-石油醚萃取法與氣-質(zhì)聯(lián)用對不同烤煙主產(chǎn)區(qū)煙葉中揮發(fā)性香氣物質(zhì)的種類和含量進(jìn)行比較分析，深入的了解不同煙區(qū)煙葉的致香成分與生態(tài)條件的關(guān)系，對于獲知不同煙區(qū)的煙葉致香成分，與風(fēng)味的形成獲得更深的認(rèn)識，為進(jìn)一步煙區(qū)煙葉品質(zhì)的改善與環(huán)境的改良提出了指引。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例

選用廣東南雄、貴州遵義、云南沾益、河南南陽和津巴布韋2009年產(chǎn)同等級煙葉(C3F)

前處理方法：

前處理采用同時(shí)蒸餾萃取法。稱取50.00g粉碎后的煙葉于2000mL圓底燒瓶中，加入1000mL水，電熱套加熱；在另一個(gè)250mL燒瓶中加入50mL石油醚，水浴加熱，同時(shí)蒸餾萃取2.5h后,保留石油醚萃取液,加入10g左右無水硫酸鈉搖勻至溶液澄清，轉(zhuǎn)移有機(jī)相至雞心瓶，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45℃水浴中將其濃縮至3mL，所得香氣濃縮物由GC-MS鑒定結(jié)果和NIST庫檢索定性。

檢測方法：

采用德國Finnigan TRACE氣質(zhì)聯(lián)用儀(德國Finnigan公司)對煙葉樣品進(jìn)行定性分析。GC-MS條件：色譜柱：HP-INNO WAX柱(30mNNO WAX性分析。轉(zhuǎn)移有機(jī))；載氣及流速：He，0.8mL/min；柱頭壓170kPa；進(jìn)樣口溫度：250℃；傳輸線溫度：220℃；離子源溫度:177℃；升溫程序：初溫50℃，恒溫1min后以3℃/min升至120℃，保持2min；再以5℃/min升至180℃，保持10min，再以10℃/min升至250℃，保持15min；分流比：1:15；進(jìn)樣量2.0：n；電離方式：EI；電離能：70eV；電子倍增器電壓350V；質(zhì)量掃描范圍:35-350amu。采用NIST譜庫檢索定性。

結(jié)果與分析：

1.質(zhì)體色素降解產(chǎn)物比較分析

質(zhì)體色素包括葉綠素和類胡蘿卜素，是影響煙葉香味特色的重要因素之一，其降解產(chǎn)物對烤煙清新香氣起著重要作用，葉綠素降解產(chǎn)物新植二烯本身具有清香氣，在煙葉香氣成分中所占比例最高。從表1可以看出，廣東、云南烤煙中新植二烯含量較高，津巴布韋和河南烤煙中含量較低，這可能是由于新植二烯經(jīng)復(fù)烤、醇化等后加工過程，降解生成了低分子香氣物質(zhì)。廣東和津巴布韋煙葉中類胡蘿卜素降解產(chǎn)物含量明顯高于其他煙區(qū)烤煙，其中巨豆三烯酮(A、B、C、D)含量與其他煙區(qū)煙葉差異最顯著，約為其他煙區(qū)煙葉含量的2倍。廣東煙葉中β-大馬酮、3-羥基-基酮二氫大馬酮含量最高。津巴布韋煙葉中假紫羅蘭酮、二氫獼猴桃內(nèi)酯、香葉基丙酮、法尼基丙酮含量最高，而3-羥基-基大二氫大馬酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮含量為痕量。

表1不同產(chǎn)區(qū)烤煙中質(zhì)體色素降解產(chǎn)物含量

注：表中“：表中表示痕量<tr means trace>

2.苯丙氨酸類降解產(chǎn)物比較分析

苯丙氨酸類降解產(chǎn)物是煙葉中香氣較豐富的致香物質(zhì)，如：具有天然玫瑰香味的苯甲醇；具有杏仁香、櫻桃香和甜香的苯甲醛；具有皂花香和焦香的苯乙醛；具有甜味和水果味的苯乙醇。從表2可以看出，河南烤煙中苯丙氨酸類降解產(chǎn)物含量最高，與處于較低水平的云南和貴州烤煙煙葉中的含量存在顯著差異。云南和貴州煙葉中苯丙氨酸類降解產(chǎn)物的峰面積分別約占河南煙葉的28.42％和17.63％。

表2不同產(chǎn)區(qū)烤煙中苯丙氨酸類降解產(chǎn)物含量

3.美拉德反應(yīng)產(chǎn)物比較分析

美拉德反應(yīng)能夠產(chǎn)生大量的具有烤香、烘焙香和堅(jiān)果香等香味特征的氮雜環(huán)類化合物，如：吡嗪類、吡啶類、呋喃類和吡咯類等。從表3可以看出，津巴布韋和廣東烤煙煙葉中美拉德反應(yīng)產(chǎn)物含量較高，貴州和云南烤煙含量最低。津巴布韋煙葉中2-乙?；量┖棵黠@高于國內(nèi)煙葉；廣東煙葉中糠醛含量明顯高于云南煙葉含量。

表3不同產(chǎn)區(qū)烤煙中美拉德反應(yīng)產(chǎn)物含量

4.西柏烷類降解產(chǎn)物比較分析

西柏烷類最初主要以無味的表面蠟質(zhì)的形式在鮮煙葉中存在，只有通過調(diào)制、發(fā)酵才能降解產(chǎn)生香味成分，它既是煙葉腺毛分泌物，也是濃郁香氣的典型代表。煙葉腺毛數(shù)量越多，則煙葉的香氣物質(zhì)含量越豐富。西柏烷類主要降解產(chǎn)物茄酮具有很好的香氣，目前被作為單體香用于卷煙香料，它的氧雜雙環(huán)化合物具有特別的香味，能夠明顯改善煙草的香吃味。同時(shí),它的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物也是很重要的煙草香味物質(zhì)，如：茄醇、茄尼呋喃、降茄二酮。在保留時(shí)間為27.83min的條件下，廣東、貴州煙葉中茄酮含量較低(分別為2.51％和1.96％)，峰面積分別約為含量最高的河南煙葉(9.73％)的25.80％和20.14％。津巴布韋、云南煙葉茄酮含量居中，分別為4.7％和5.75％。

五大烤煙區(qū)煙葉總揮發(fā)性香氣物質(zhì)比較分析

廣東烤煙煙葉中類胡蘿卜素、葉綠素降解產(chǎn)物含量最高。河南煙葉中苯丙氨酸類、西柏烷類降解產(chǎn)物含量最高。國內(nèi)煙葉中的中性揮發(fā)性香氣物質(zhì)含量高于津巴布韋煙葉，這是由于國內(nèi)煙葉中新植二烯含量較高的緣故。不計(jì)新植二烯含量時(shí)，津巴布韋烤煙中的香氣物質(zhì)總含量最高，貴州最低，約為津巴布韋烤煙含量的49.99％。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。