本實(shí)用新型涉及技術(shù)檢測(cè)領(lǐng)域，更具體地涉及一種可用于光檢測(cè)的流通池。
背景技術(shù)：
：在檢測(cè)領(lǐng)域中，常需要對(duì)各類物質(zhì)進(jìn)行光檢測(cè)。以“雙抗夾心法”為基礎(chǔ)衍生出了多種免疫反應(yīng)分析方法：放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨熒光法和熒光免疫法等，可用于確定病原微生物，對(duì)人體的特異性蛋白定量檢測(cè)從而對(duì)疾病進(jìn)行輔助診斷或監(jiān)測(cè)等等，用途非常廣泛。這類免疫反應(yīng)分析方法的通常作法是：將捕獲抗體固定于固相載體，然后與抗原(目標(biāo)蛋白)反應(yīng)，洗滌后再與標(biāo)記抗體反應(yīng)，洗滌，加入底物檢測(cè)吸光度或直接檢測(cè)光信號(hào)，整個(gè)檢測(cè)過程約需2小時(shí)或更長，不能滿足臨床急診的需要。綜上所述，本領(lǐng)域仍迫切需要研發(fā)出工作效率高且能快速改善檢測(cè)數(shù)據(jù)質(zhì)量的檢測(cè)方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本實(shí)用新型的目的是提供一種能大幅提高檢測(cè)速度且有助于改善快速檢測(cè)數(shù)據(jù)質(zhì)量的流通池。本實(shí)用新型第一方面，提供一種用于檢測(cè)的流通池，包括毛細(xì)管本體、位于毛細(xì)管一端的加樣口、位于毛細(xì)管另一端的流出口、以及位于毛細(xì)管內(nèi)部的濾柱和捕獲柱。在另一優(yōu)選例中，所述毛細(xì)管內(nèi)部的濾柱和捕獲柱以濾柱-用于捕獲檢測(cè)物的捕獲柱的順序間隔排列。在另一優(yōu)選例中，所述毛細(xì)管的流出口端還設(shè)有夾持、支撐并固定裝置。在另一優(yōu)選例中，所述捕獲柱數(shù)目為n，所述濾柱數(shù)目為n+1，其中，n為大于等于1的正整數(shù)。在另一優(yōu)選例中，所述毛細(xì)管管身長L1為50-200mm，并且內(nèi)徑d1為0.5-2mm。在另一優(yōu)選例中，所述濾柱長L3為3-5mm。在另一優(yōu)選例中，所述濾柱的孔徑d3為5-20μm。在另一優(yōu)選例中，所述捕獲柱長L4為1-3mm。應(yīng)理解，在本實(shí)用新型范圍內(nèi)中，上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說明圖1顯示了本實(shí)用新型流通池的結(jié)構(gòu)。圖2顯示了cTnI標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖3顯示了CA199標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖4顯示了CA125標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖5顯示了SCCA標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖6顯示了AFP標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖7顯示了CEA標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)一種能大幅提高檢測(cè)速度且有助于改善快速檢測(cè)數(shù)據(jù)質(zhì)量的流通池。在此基礎(chǔ)上完成了本實(shí)用新型。術(shù)語說明除非另外定義，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語均具有如所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。以下實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得。流通池本實(shí)用新型的流通池包括以下結(jié)構(gòu)：空氣壓力泵、毛細(xì)管、濾柱、捕獲柱等。①毛細(xì)管的管身長50-200mm，內(nèi)徑0.5-2mm；②空氣壓力泵對(duì)接口長5-20mm，內(nèi)徑5-10mm；③濾柱長3-5mm；④捕獲柱長1-3mm；⑤毛細(xì)管的材質(zhì)為透光材料，如：聚苯乙烯、玻璃等；⑥濾柱的材質(zhì)為柱狀玻璃纖維，孔徑5-20μm，起到過濾液體樣本的作用；⑦捕獲柱為聚合物聚集體，如：聚苯乙烯微球聚集體、多空微球和瓊脂糖凝膠等，表面固定有針對(duì)目標(biāo)物的捕獲劑，如針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體或針對(duì)目標(biāo)核酸的寡核苷酸片段等；⑧濾柱和捕獲柱緊密填充在毛細(xì)管內(nèi)；⑨圖1a中的捕獲柱僅針對(duì)一種目標(biāo)物，用于檢測(cè)單一目標(biāo)物，圖1b的捕獲柱針對(duì)多種目標(biāo)物，用于同時(shí)檢測(cè)多種目標(biāo)物。流通池的制作選擇內(nèi)徑為2mm的毛細(xì)管，玻璃或聚苯乙烯材質(zhì)均可；選擇與毛細(xì)管內(nèi)徑大小適配的第一濾柱，自上而下緊密填充至毛細(xì)管的中央位置；適量地固定了捕獲劑的聚合物自上而下加入毛細(xì)管，被第一濾柱阻攔；第二濾柱，自上而下緊密填充至毛細(xì)管，與第一濾柱共同擠壓聚合物，形成捕獲柱。試劑和設(shè)備：心肌鈣蛋白I(cTnI)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；甲胎蛋白(AFP)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；癌胚抗原(CEA)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；糖類抗原125(CA125)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；糖類抗原199(CA199)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCCA)及其1對(duì)單克隆抗體(Ab1和Ab2)，市售品；鏈霉親和素-藻紅蛋白復(fù)合物(SA-PE)，市售品；小牛血清白蛋白(BSA)，市售品；生物素Biotin，市售品；表面經(jīng)羧基修飾的粒徑為20μm的聚苯乙烯微球，市售品；常用試劑、緩沖液為自配；檢測(cè)器：USB4000-FL(美國海洋光學(xué)公司)；光源：532nm激光光源。實(shí)施例1：人血清中cTnI的檢測(cè)1.準(zhǔn)備1.1Ab1預(yù)先去除含氨基小分子和雜蛋白(透析或過層析柱),測(cè)量其濃度。1.2在1.5ml聚丙烯離心管中，精確稱取5mg左右N-hydroxysulfosuccini-mide(NHSS)，備用(防潮)。1.3在1.5ml聚丙烯離心管中，精確稱取5mg左右N-ethyl-N’(3-dimethylainopropyl)-carbodiimide(EDC)，備用(防潮)。2.聚苯乙烯微球(Beads)活化2.1微球原液旋渦混旋儀混懸20秒，移取200μL微球(相當(dāng)于2.5×106微球)于1.5ml聚丙烯離心管中。2.215000rpm離心2分鐘(設(shè)置3分鐘)，移去上清液。2.3加入100μL蒸餾水，旋渦混旋儀混懸20秒，15000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.4重復(fù)2.3。2.5加入80μL0.1mol/L磷酸緩沖液(PBS)，pH6.2，旋渦混旋儀混懸20秒。2.6用蒸餾水將(NHSS)稀釋至50mg/ml。(現(xiàn)配現(xiàn)用)2.7取10μL50mg/ml(NHSS)加到Beads溶液中，旋渦混旋儀混懸20秒。2.8用蒸餾水將EDC稀釋至50mg/ml。(現(xiàn)配現(xiàn)用)2.9取10μL50mg/mlEDC加到Beads溶液中，旋渦混旋儀混懸20秒。2.10避光、37℃孵育20分鐘。2.1115000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.12加入250μL50mmol/L2-(N-morpholino)ethanesulfonicacid(MES)(MES)pH5.0。2.1315000rpm離心2分鐘，移去上清液。2.14重復(fù)2.12，2.13，馬上進(jìn)行下步實(shí)驗(yàn)。3.交聯(lián)、封閉和儲(chǔ)存3.1加20μg已處理的Ab1到已活化的Beads中，旋渦混旋儀混懸20秒。3.2避光、37℃反應(yīng)2小時(shí),每十五分鐘混勻一次。3.3加入1mlPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒，10000rpm離心2分鐘。移去上清液(PBS-TBN的組成為10mmol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液、0.02％吐溫20、1mg/ml的小牛血清白蛋白和0.05％疊氮鈉)。3.4加入500μLPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒，10000rpm離心2分鐘。移去上清液。3.5加入500μLPBS-TBN，旋渦混旋儀混懸20秒。3.62-8℃避光保存，得到Ab1-Beads。4.本實(shí)用新型的制作Ab1-Beads在旋渦混旋儀混懸20秒，取50μl，按“本實(shí)用新型的制作”所述制作本實(shí)用新型，重復(fù)該過程可制作多個(gè)圖1中的a。圖1說明：①毛細(xì)管的管身長50～200mm，內(nèi)徑0.5～2mm；②空氣壓力泵對(duì)接口長5～20mm，內(nèi)徑5～10mm；③濾柱長3～5mm；④捕獲柱長1～3mm；⑤毛細(xì)管的材質(zhì)為透光材料，如：聚苯乙烯、玻璃等；⑥濾柱的材質(zhì)為柱狀玻璃纖維，孔徑5～20μm，起到過濾液體樣本的作用；⑦捕獲柱為聚合物聚集體，如：聚苯乙烯微球聚集體、多空微球和瓊脂糖凝膠等，表面固定有針對(duì)目標(biāo)物的捕獲劑，如針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體或針對(duì)目標(biāo)核酸的寡核苷酸片段等；⑧濾柱和捕獲柱緊密填充在毛細(xì)管內(nèi)；⑨圖1的a僅有針對(duì)一種目標(biāo)物的捕獲柱，用于檢測(cè)單一目標(biāo)物，圖1的b含有針對(duì)多種目標(biāo)物的捕獲柱，用于同時(shí)檢測(cè)多種目標(biāo)物。5.Ab2標(biāo)記Biotin5.1Ab2預(yù)處理5.2Biotin標(biāo)記反應(yīng)取上述預(yù)處理的Ab110μL，加入25μL的1mg/mlNHSS-BiotinDMSO溶液，混勻，4℃冰箱避光反應(yīng)2小時(shí)。6.Ab2標(biāo)記PE取標(biāo)記好Biotin-Ab2，加入pH7.4磷酸鹽緩沖液中，Ab2終濃度為5μg/ml，同時(shí)加入SA-PE，PE總濃度為60μg/ml，得到Ab2-PE，總體積為5ml，4℃避光保存?zhèn)溆谩?.cTnI抗原標(biāo)準(zhǔn)品的配制用PBS-TBN配制cTnI標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品溶液，見表1。8.cTnI標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取5μl的Ab2-PE與50μl的STD0混合，將圖1中的a與空氣壓力泵緊密對(duì)接，保證密封，然后將a的下端插入混合液中，使混合液在毛細(xì)管內(nèi)往復(fù)運(yùn)動(dòng)3次(1次往復(fù)約40秒)，每次都通過捕獲柱，最后將混合液打出毛細(xì)管，再用PBS洗滌捕獲柱，檢測(cè)捕獲柱的熒光強(qiáng)度。同樣操作得到STD1～STD4的熒光強(qiáng)度，填入表1相應(yīng)位置，并以LgC為橫坐標(biāo)、LgF為縱坐標(biāo)制作曲線圖，如圖2所示。表1：cTnI標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表cTnISTD0STD1STD2STD3STD4C(ng/ml)00.52510熒光強(qiáng)度F33.7702.61480.62910.75646.69.質(zhì)控品檢測(cè)用PBS-TBN配制2個(gè)cTnI質(zhì)控品溶液，濃度分別為1ng/ml和8ng/ml，用本實(shí)用新型檢測(cè)，熒光信號(hào)帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得測(cè)定濃度分別為0.91ng/ml和8.23ng/ml，與理論值符合良好。實(shí)施例2：5種腫瘤標(biāo)志物的快速檢測(cè)1、重復(fù)實(shí)施例1的“1～6”的所有步驟，分別得到AFP的Ab1-Beads和Ab2-PE、CEA的Ab1-Beads和Ab2-PE、CA125的Ab1-Beads和Ab2-PE、CA199的Ab1-Beads和Ab2-PE、SCCA的Ab1-Beads和Ab2-PE，并制備多個(gè)如圖1b所示的用于同時(shí)檢測(cè)5種腫瘤標(biāo)志物的本實(shí)用新型。2、5種腫瘤標(biāo)志物混合抗原標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品的配制用PBS-TBN配制如表2所示的5種腫瘤標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，即：STD1中不含任何腫瘤標(biāo)志物，STD2中同時(shí)含有5種腫瘤標(biāo)志物，其他依次類推。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備各取3μl的5種Ab2-PE加入50μl的STD0中混合均勻，將圖1中的b與空氣壓力泵緊密對(duì)接，保證密封，然后將b的下端插入混合液中，使混合液在毛細(xì)管內(nèi)往復(fù)運(yùn)動(dòng)3次(1次往復(fù)約40秒)，每次都通過所有捕獲柱，最后將混合液打出毛細(xì)管，再用PBS洗滌所有捕獲柱，分別檢測(cè)所有捕獲柱的熒光強(qiáng)度。同樣操作得到STD1、STD2、STD3、STD4標(biāo)準(zhǔn)溶液中5種抗原的對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度，見表3～7，并以LgC為橫坐標(biāo)、LgF為縱坐標(biāo)制作曲線圖，相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3-圖7。表2：5種腫瘤標(biāo)志物混合抗原標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品的濃度腫瘤標(biāo)志物STD0STD1STD2STD3STD4質(zhì)控1質(zhì)控2CA1990U/ml5U/ml20U/ml100U/ml300U/ml40U/ml200U/mlCA1250U/ml10U/ml30U/ml100U/ml300U/ml30U/ml200U/mlSCCA0U/ml1U/ml5U/ml30U/ml150U/ml5U/ml100U/mlAFP0ng/ml5ng/ml20ng/ml100ng/ml300ng/ml20ng/ml200ng/mlCEA0ng/ml2ng/ml10ng/ml50ng/ml200ng/ml5ng/ml150ng/ml表3：CA199標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表CA199STD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)0520100300熒光強(qiáng)度F13.7713.71470.92839.2.75728.7表4：CA125標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表CA125STD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)01030100300熒光強(qiáng)度F61.8750.2149326505127.2表5：SCCA標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表SCCASTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)01530150熒光強(qiáng)度F10.7740.2142125505227.2表6：AFP標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表AFPSTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)0520100300熒光強(qiáng)度F3.7666.513872768.55213.7表7：CEA標(biāo)準(zhǔn)品與熒光強(qiáng)度對(duì)照表AFPSTD0STD1STD2STD3STD4C(U/ml)021050200熒光強(qiáng)度F3.7666.513872768.55213.74.質(zhì)控品的測(cè)定用PBS-TBN配制各個(gè)腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)控品，然后用本實(shí)用新型檢測(cè)，結(jié)果見表8，實(shí)測(cè)值與理論值符合性良好。表8：腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品的測(cè)定結(jié)果在本申請(qǐng)?zhí)峒暗乃形墨I(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本實(shí)用新型的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本實(shí)用新型作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3