本發(fā)明涉及一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法。

背景技術：

隨著有機硒資源的開發(fā)利用和人們對無機硒毒性的認識，藥品、保健品中有機硒的含量和無機硒的限量成為評價產(chǎn)品質量的重要指標，現(xiàn)行國家標準中僅規(guī)定總硒含量的檢測方法，未分析硒的形態(tài)，因此不能正確評價富硒產(chǎn)品的補硒效果。有些地方標準中制定了有機硒的檢測方法，但均采用先提取分離有機硒和無機硒，再用測總硒的方法測定無機硒，前處理方法繁雜，且分離、提取不完全會影響結果的準確性。我們在研究中發(fā)現(xiàn)，聚硒植物碎米薺的總硒含量高達3000mg/kg以上，按dbs42/002-2014的方法測定無機硒高達50％以上，而采用hplc-hg-afs法測定用環(huán)己烷萃取前、后水相中的成分，主要是硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸，在萃取前后變化不大；無機硒非常少，se(iv)未檢出，se(vi)需要在進樣50μl才能檢測出來，因此dbs42/002-2014不適宜于碎米薺中無機硒的測定，以碎米薺為原料開發(fā)的硒蛋白粉、硒蛋白片等也存在同樣的問題，給企業(yè)帶來很大的困惑。硒的形態(tài)分析方法是近年來發(fā)展的方向，能夠有效分離有機硒和無機硒，但由于有機硒形態(tài)復雜，很多成分還沒有標準物質，無法定性定量，直接測定有機硒的形態(tài)難度極大，方法還不成熟，而隨著hplc-icp-ms及hplc-hg-afs聯(lián)用技術的發(fā)展，無機硒中se(iv)和se(vi)測定的儀器方法靈敏度高，適用性強，能克服采用總硒測定無機硒方法的不足。

硒的形態(tài)分析技術是評價富硒產(chǎn)品價值的有效方法，現(xiàn)階段，無機硒的測定方法、硒代氨基酸的測定方法等均在制定行業(yè)或地方標準，在研究樣品中的無機硒的測定方法時發(fā)現(xiàn)：在進行回收率驗證時，富硒茶、富硒米、富硒食用菌粉壓片等樣品浸提液中沒有無機硒的峰，加入se(iv)、se(vi)標樣后，仍然無峰，其原因是由于有機物對測定的干擾，致使樣品中無機硒的回收率不高。如果不能提高回收率，產(chǎn)品中添加的無機硒不能被檢出，將是開發(fā)的方法在實際應用中的一個大漏洞，標準將不適宜于復雜成分的富硒產(chǎn)品的檢測。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法。

本發(fā)明一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法，其特征在于包含以下步驟：

a.稱取樣品：稱取樣品，加入硫酸銅溶液，用kh2po4溶液定容；

b.振蕩浸提：將定容液放于超級恒溫振蕩器上振蕩浸提30min；

c.濾膜過濾：將振蕩浸提液用0.45μm濾膜過濾；

d.測定：將過濾液用高效液相色譜-氫化物原子熒光聯(lián)用儀測定無機硒。

本發(fā)明一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法，其特征在于包含以下步驟：

a.稱取樣品：稱取樣品0.10g，加入0.1mg·ml^-1的硫酸銅溶液250μl，用0.1mol·l^-1kh2po4溶液定容至3ml；

b.振蕩浸提：將定容液放于超級恒溫振蕩器上在70℃,1500rmp條件下振蕩浸提30min；

c.濾膜過濾：將振蕩浸提液用0.45μm濾膜過濾；

d.測定：將過濾液用高效液相色譜-氫化物原子熒光聯(lián)用儀測定無機硒。

本發(fā)明亞硒酸根離子[se(iv)]和硒酸根離子[se(vi)]回收率在94.77％-116.40％之間，滿足分析檢測的要求，以此可以制定食品、土壤中無機硒的測定方法標準。

本發(fā)明一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法的有益效果：

在樣品中加入微量的cu²⁺，消除有機物的干擾，使se(iv)和se(vi)釋放出來，被kh2po4溶液提取，試液經(jīng)過濾后進入高效液相色譜儀分離，單一的含硒成分經(jīng)形態(tài)轉換后由原子熒光進行檢測，se(iv)和se(vi)回收率在94.77％-116.40％之間，為標準制定提供了科學的依據(jù)。。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但發(fā)明的實施方式不限于此。

實施例1：一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法，包含以下步驟：

a.稱取樣品：稱取樣品0.10g，加入0.1mg·ml^-1的硫酸銅溶液250μl，用0.1mol·l^-1kh2po4溶液定容至3ml；

b.振蕩浸提：將定容液放于超級恒溫振蕩器上在70℃,1500rmp條件下振蕩浸提30min；

c.濾膜過濾：將振蕩浸提液用0.45μm濾膜過濾；

d.測定：將過濾液用高效液相色譜-氫化物原子熒光聯(lián)用儀測定無機硒，亞硒酸根離子[se(iv)]和硒酸根離子[se(vi)]回收率在94.77％-116.40％之間，滿足分析檢測的要求，以此可以制定食品、土壤中無機硒的測定方法標準。

實施例2：一種提高無機硒形態(tài)分析回收率的方法，

1、無機硒標樣、cu²⁺加入量與se(iv)、se(vi)回收率的關系

稱取富硒大米、富硒茶葉、富硒食用菌粉片等樣品0.10g，每個4份，分別加入0、300、750、1500μl含量為1μg/ml的se(iv)、se(vi)混合標準溶液和0、50、150、250μl0.1mg·ml^-1的硫酸銅溶液，用0.1mol·l^-1kh2po4溶液定容至3ml，于超級恒溫振蕩器上在70℃,1500rmp條件下振蕩浸提30min，0.45μm濾膜過濾，用高效液相色譜-氫化物原子熒光聯(lián)用儀測定無機硒，計算回收率，結果見表1.

表1無機硒標樣、cu²⁺加入量與se(iv)、se(vi)回收率的關系

從以上結果可以看出：添加cu²⁺可以提高樣品的加標回收率，但不同樣品需要添加的cu²⁺濃度不一樣，0.1mg·ml^-1的硫酸銅溶液加入量在0-250ml之間，樣品回收率隨硫酸銅溶液濃度增加而升高，當cu²⁺加入量低于150μl時，富硒茶葉、富硒食用菌粉片回收率89.87％-99.87％之間，可以滿足分析的要求，但富硒大米的se(iv)回收率僅76.12％，低于80％；當cu²⁺加入量為250μl時，富硒大米回收率為104.40％-116.40％，富硒茶葉回收率為93.00％-106.12％，富硒食用菌粉片為107.60％-114.67％，均能滿足分析測定的要求，因此，兼顧各類樣品，確定cu2+加入量為250μl。即確定無機硒測定樣品前處理方法為：

稱取樣品0.10g，加入0.1mg·ml^-1的硫酸銅溶液250μl，用0.1mol·l^-1kh2po4溶液定容至3ml，于超級恒溫振蕩器上在70℃,1500rmp條件下振蕩浸提30min，0.45μm濾膜過濾，用高效液相色譜-氫化物原子熒光聯(lián)用儀測定無機硒。

2、無機硒檢測的儀器條件

在該分析方法中，多種形態(tài)的硒均能被檢測，因此無機硒需要與其它有機硒的形態(tài)有效分離。在方法開發(fā)中，經(jīng)過反復多次試驗優(yōu)化，確定了如下儀器參考條件：

(1)液相色譜參考條件

色譜柱：c18色譜柱或相當者。

流動相：2％甲醇-25mmol·l^-1-磷酸氫二銨-0.5mmol·l^-1-四丁基溴化銨溶液，ph＝6.0(4.3)。

柱溫：室溫。

流速：0.8ml/min-1.0ml/min。

進樣量：10-100μl。

(2)氫化物發(fā)生條件

氧化劑：0.5％koh+1.0％ki溶液。

還原劑：0.5％koh+2％kbh4溶液。

載流：7％hcl溶液。

紫外燈開/關：開。

(3)原子熒光光譜儀條件

元素燈：硒空芯陰極燈。

負高壓：300v。

燈電流(總電流/輔電流)：80/30ma。

載氣：400ml/min。

屏蔽氣：600ml/min。

在此條件下，se(iv)、se(vi)、硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、l-硒甲基硒代半胱氨酸均能有效分離，定性定量檢測。