本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，是涉及一種丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法。

背景技術(shù)：

在防病治病方面，中藥復(fù)方提取制劑占據(jù)著重要的位置，中藥提取之后，其植物組織已不符存在，顯微鑒別亦無(wú)能為力，所以其質(zhì)量控制方法都是以各種有效成分為指標(biāo)，進(jìn)行薄層鑒別與含量測(cè)定。但在各類國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，薄層鑒別多是處理一個(gè)樣品溶液，一塊薄層板，展開一次，一種顯色劑，鑒別一味藥材。為排除干擾，樣品的前處理程序多復(fù)雜、煩瑣，需用大量的有機(jī)試劑反復(fù)純化處理，費(fèi)力、費(fèi)時(shí)、費(fèi)試劑、污染環(huán)境，危害健康，檢測(cè)周期長(zhǎng)。檢測(cè)速度嚴(yán)重制約著中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)速度。所以尋找簡(jiǎn)便、快捷的檢測(cè)方法、提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)成本，成為中藥質(zhì)量控制必須突破的難關(guān)。

丹綠補(bǔ)腎膠囊(國(guó)藥準(zhǔn)字z20025620)是由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜5味藥組成的中成藥制劑，為云南神威施普瑞藥業(yè)有限公司的獨(dú)家品種。中醫(yī)補(bǔ)腎滋陰壯陽(yáng)。用于陰陽(yáng)兩虛所致陽(yáng)痿遺精，腰膝酸軟，身體乏力。2013年本品標(biāo)準(zhǔn)地標(biāo)升國(guó)標(biāo)由試行標(biāo)準(zhǔn)ws-10436(zd-0436)-2002轉(zhuǎn)為正式標(biāo)準(zhǔn)ws-10436(zd-0436)-2002-2012z。

丹綠補(bǔ)腎膠囊執(zhí)行的現(xiàn)行國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)ws-10436(zd-0436)-2002-2012z中薄層鑒別包括白花丹、綠包藤及胡椒堿的鑒別，需要分別制備供試品溶液，其中用到丙酮、乙醚等易制毒試劑處理供試品，并且處理方法涉及到浸漬24h及加熱回流等方式。該鑒別過(guò)程復(fù)雜、繁瑣，耗費(fèi)較多人力、物力、時(shí)間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，旨在解決供試品溶液制備過(guò)程復(fù)雜，所用試劑毒性大，且鑒別過(guò)程復(fù)雜、繁瑣的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，所述丹綠補(bǔ)腎膠囊由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜制備而成，取所述丹綠補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過(guò)濾，濾液即為包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液；

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對(duì)照藥材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和白花丹對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述白花丹對(duì)照品溶液的色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對(duì)照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和綠包藤對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，得到的所述供試品色譜中，在與所述綠包藤對(duì)照品溶液的色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對(duì)照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和射干對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述射干對(duì)照品溶液的色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和胡椒堿對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；得到的所述供試品色譜中，在與所述胡椒堿對(duì)照品溶液的色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

優(yōu)選地，所述石油醚-三氯甲烷-甲醇展開劑中，按照體積比為石油醚：三氯甲烷：甲醇＝6-10：3-5：0.5-2。

優(yōu)選地，所述正己烷-乙酸乙酯展開劑中，按照體積比為正己烷-乙酸乙酯＝6-10：0.5-2.5。

優(yōu)選地，所述三氯甲烷-丁酮-甲醇展開劑中，按照體積比為三氯甲烷-丁酮-甲醇＝2-4：0.5-2：0.5-2。

優(yōu)選地，所述環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇展開劑中，按照體積比為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇＝8-10：1-4：0.5-2。

優(yōu)選地，所述供試品溶液、白花丹對(duì)照品溶液、綠包藤對(duì)照品溶液、射干對(duì)照品溶液、胡椒堿對(duì)照品溶液制備過(guò)程中甲醇的體積濃度均為90-100％。

優(yōu)選地，所述供試品溶液、白花丹對(duì)照品溶液、綠包藤對(duì)照品溶液、射干對(duì)照品溶液制備過(guò)程中超聲處理功率均為50-600w、頻率均為20-50khz。

優(yōu)選地，所述三氯化鋁乙醇溶液的密度為2-5％，所述磷鉬酸乙醇溶液的密度為8-12％。

優(yōu)選地，所述白花丹、綠包藤所用的硅膠g薄層板的加熱溫度均為100-110℃。

優(yōu)選地，所述石油醚的沸程為30-60℃。

本發(fā)明提供的一種丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法的有益效果在于：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明供試品與對(duì)照品溶液制備過(guò)程簡(jiǎn)單，試劑低毒性及用量少，鑒別方法簡(jiǎn)單快捷，斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明制劑中白花丹專屬性考察結(jié)果示意圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度7℃相對(duì)濕度32％對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度20℃相對(duì)濕度43％對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度40℃相對(duì)濕度75％對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例采用青島海洋薄層板對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例采用自鋪薄層板對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例采用青島勝海薄層板對(duì)白花丹考察結(jié)果示意圖；

圖8為本發(fā)明制劑中綠包藤專屬性考察結(jié)果示意圖；

圖9為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度7℃相對(duì)濕度35％對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖10為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度22℃相對(duì)濕度41％對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖11為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度40℃相對(duì)濕度75％對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖12為本發(fā)明實(shí)施例采用青島海洋薄層板對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖13為本發(fā)明實(shí)施例采用自鋪薄層板對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖14為本發(fā)明實(shí)施例采用青島勝海薄層板對(duì)綠包藤考察結(jié)果示意圖；

圖15為本發(fā)明制劑中射干專屬性考察結(jié)果示意圖；

圖16為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度7℃相對(duì)濕度37％對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖17為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度20℃相對(duì)濕度46％對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖18為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度40℃相對(duì)濕度75％對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖19為本發(fā)明實(shí)施例采用青島海洋薄層板對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖20為本發(fā)明實(shí)施例采用自鋪薄層板對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖21為本發(fā)明實(shí)施例采用青島勝海薄層板對(duì)射干考察結(jié)果示意圖；

圖22為本發(fā)明制劑中胡椒專屬性考察結(jié)果示意圖；

圖23為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度7℃相對(duì)濕度31％對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖；

圖24為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度23℃相對(duì)濕度46％對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖；

圖25為本發(fā)明實(shí)施例采用溫度40℃相對(duì)濕度75％對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖；

圖26為本發(fā)明實(shí)施例采用青島海洋薄層板對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖；

圖27為本發(fā)明實(shí)施例采用自鋪薄層板對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖；

圖28為本發(fā)明實(shí)施例采用青島勝海薄層板對(duì)胡椒考察結(jié)果示意圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

一種丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法，所述丹綠補(bǔ)腎膠囊由白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜制備而成，取所述丹綠補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過(guò)濾，濾液即為包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液；

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對(duì)照藥材0.8-1.2g，加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和白花丹對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶液，加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對(duì)照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和綠包藤對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對(duì)照藥材0.8-1.2g，加甲醇4-6ml，超聲處理15-60min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和射干對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與射干對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含4.8-5.2mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液；

步驟2、分別吸取所述供試品和胡椒堿對(duì)照品溶液各2-10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與胡椒堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

具體地，上述本發(fā)明所述的丹綠補(bǔ)腎膠囊，按重量份計(jì)，由以下原料組成：白花丹：2-4份，綠包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述丹綠補(bǔ)腎膠囊的按照以下方法制備而成：按重量份計(jì)算，稱取白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜五味藥；所述綠包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后滲漉，收集漉液，回收乙醇并濃縮成清膏；干姜切片，用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混勻，加乙醇提取三次，濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并濃縮成清膏，合并上述兩種清膏，在水浴上濃縮成稠膏，干燥，與用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，過(guò)篩，混勻，裝入膠囊，即得丹綠補(bǔ)腎膠囊。

為了確保本發(fā)明的效果，申請(qǐng)人對(duì)制劑中白花丹、綠包藤、射干、胡椒的鑒別方法進(jìn)行了相應(yīng)的試驗(yàn)研究與論證，具體如下：

1、白花丹的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為白花丹供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取白花丹對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除白花丹以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得白花丹陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為2％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃下加熱2min，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(1)專屬性考察

丹綠補(bǔ)腎膠囊由云南神威施普瑞藥業(yè)有限公司提供，分別采用10個(gè)不同批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖1所示，圖1中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個(gè)批次樣品，s為白花丹對(duì)照品；由圖1可知：在于白花丹對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色清晰斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，分離效果好。該方法專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)顯色清晰。

經(jīng)過(guò)上述中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。

(2)耐用性考察

連續(xù)用三個(gè)批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

a、不同溫度及相對(duì)濕度的考察，如表1所示，考察結(jié)果如圖2、圖3、圖4所示；圖2、圖3、圖4中，1、2、3分別為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為白花丹對(duì)照。

表1不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結(jié)果如圖5、圖6、圖7所示，其中圖5為青島海洋薄層板，圖6為自鋪薄層板，圖7為青島勝海薄層板，圖5、圖6、圖7中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為白花丹對(duì)照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對(duì)濕度的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；斑點(diǎn)圓整，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾；細(xì)微的變動(dòng)，該鑒別方法仍然有效。

2、綠包藤的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取綠包藤對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除綠包藤以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得綠包藤陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為10％的磷鉬酸乙醇溶液，在100℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

(1)專屬性考察

丹綠補(bǔ)腎膠囊由云南神威施普瑞藥業(yè)有限公司提供，分別采用10個(gè)不同批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖8所示，圖8中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個(gè)批次樣品，s為綠包藤對(duì)照；由圖8可知：在于對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色清晰斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，分離效果好。該方法專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)顯色清晰。

經(jīng)過(guò)上述中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。

(2)耐用性考察

連續(xù)用三個(gè)批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

a、不同溫度及相對(duì)濕度的考察，如表2所示，考察結(jié)果如圖9、圖10、圖11所示；圖9、圖10、圖11中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為綠包藤對(duì)照。

表2不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結(jié)果如圖12、圖13、圖14所示，其中圖12為青島海洋薄層板，圖13為自鋪薄層板，圖14為青島勝海薄層板，圖12、圖13、圖14中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為綠包藤對(duì)照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對(duì)濕度的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；斑點(diǎn)圓整，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾；細(xì)微的變動(dòng)，該鑒別方法仍然有效。

3、射干的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為射干供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取射干對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除射干以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得射干陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(1)專屬性考察

丹綠補(bǔ)腎膠囊由云南神威施普瑞藥業(yè)有限公司提供，分別采用10個(gè)不同批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖15所示，圖15中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個(gè)批次樣品，s為射干對(duì)照；由圖15可知：在與射干對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色清晰斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，分離效果好。該方法專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)顯色清晰。

經(jīng)過(guò)上述中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。

(2)耐用性考察

連續(xù)用三個(gè)批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

a、不同溫度及相對(duì)濕度的考察，如表3所示，考察結(jié)果如圖16、圖17、圖18所示；圖16、圖17、圖18中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為射干對(duì)照。

表3不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結(jié)果如圖19、圖20、圖21所示，其中圖19為青島海洋薄層板，圖20為自鋪薄層板，圖21為青島勝海薄層板，圖19、圖20、圖21中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為射干對(duì)照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對(duì)濕度的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：射干供試品色譜中，在與射干對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；斑點(diǎn)圓整，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾；細(xì)微的變動(dòng)，該鑒別方法仍然有效。

4、胡椒的鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為胡椒供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備：取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液。

陰性樣品溶液制備：按處方配比，取除胡椒以外的其他藥味按工藝制得膠囊劑，再按上述供試品溶液制備方法制得胡椒陰性樣品溶液。

薄層條件：照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為10：3：1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

(1)專屬性考察

丹綠補(bǔ)腎膠囊由云南神威施普瑞藥業(yè)有限公司提供，分別采用10個(gè)不同批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖22所示，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分別為10個(gè)批次樣品，s為胡椒堿對(duì)照；由圖22可知：在于胡椒對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色清晰斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，分離效果好。該方法專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)顯色清晰。

經(jīng)過(guò)上述中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證，表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。

(2)耐用性考察

連續(xù)用三個(gè)批次的樣品，按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

a、不同溫度及相對(duì)濕度的考察，如表4所示，考察結(jié)果如圖23、圖24、圖25所示；圖23、圖24、圖25中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為胡椒堿對(duì)照。

表4不同溫度及濕度的考察

b、不同廠牌硅膠g薄層板的考察結(jié)果如圖26、圖27、圖28所示，其中圖26為青島海洋薄層板，圖27為自鋪薄層板，圖28為青島勝海薄層板，圖26、圖27、圖28中，1、2、3為3批樣品，4為陰性對(duì)照，s為胡椒堿對(duì)照。

由上述的不同廠牌硅膠g薄層板、不同溫度及相對(duì)濕度的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；斑點(diǎn)圓整，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾；細(xì)微的變動(dòng)，該鑒別方法仍然有效。

為了更好的解釋說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，下面通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層色譜鑒別方法做詳細(xì)的解釋說(shuō)明。

所述包含白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液與白花丹、綠包藤、射干、胡椒的對(duì)照品溶液，分別加入甲醇4-6ml，超聲提取15-60min，過(guò)濾即得，試劑低毒性，且用量少，制備過(guò)程簡(jiǎn)單。

實(shí)施例1

丹綠補(bǔ)腎膠囊的制備

所述丹綠補(bǔ)腎膠囊，按重量份計(jì)，由以下原料組成：白花丹：2-4份，綠包藤：8-12份，射干：8-12份，胡椒：1-3份，干姜：2-4份。

所述丹綠補(bǔ)腎膠囊的按照以下方法制備而成：按重量份計(jì)算，稱取白花丹、綠包藤、射干、胡椒、干姜五味藥；所述綠包藤、射干粉碎成粗粉，用乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后滲漉，收集漉液，回收乙醇并濃縮成清膏；干姜切片，用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油；白花丹、胡椒粉碎成粗粉，混勻，加乙醇提取三次，濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇并濃縮成清膏，合并上述兩種清膏，在水浴上濃縮成稠膏，干燥，與用淀粉吸附的姜油混合，粉碎，過(guò)篩，混勻，裝入膠囊，即得丹綠補(bǔ)腎膠囊。

性狀：本品為硬膠囊，內(nèi)容物應(yīng)為棕黃色至棕褐色粉末及顆粒；味辛、苦，具胡椒氣味。

實(shí)施例2

對(duì)實(shí)施例1制備的丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對(duì)白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取15min，過(guò)濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取15min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取白花丹供試品和白花丹對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為6：3：0.5的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為2％的三氯化鋁乙醇溶液，在110℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理15min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取綠包藤供試品和對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比6：0.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為8％的磷鉬酸乙醇溶液，在110℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理15min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取射干供試品和射干對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為2：0.5：0.5三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為8：1：0.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

實(shí)施例3

對(duì)實(shí)施例1制備的丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對(duì)白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取30min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取白花丹供試品和白花丹對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8：4：1的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為3％的三氯化鋁乙醇溶液，在105℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取綠包藤供試品和綠包藤對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比8.5：1.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為10％的磷鉬酸乙醇溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取射干供試品和射干對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為3：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為10：3：1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

實(shí)施例4

對(duì)實(shí)施例1制備的丹綠補(bǔ)腎膠囊的薄層鑒別方法，包括對(duì)白花丹、綠包藤、射干、胡椒的薄層色譜鑒別。

取丹綠補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物1g，加入甲醇5ml，超聲提取60min，過(guò)濾，濾液即為含有白花丹、綠包藤、射干、胡椒的供試品溶液。

白花丹的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取白花丹對(duì)照藥材1g，加入甲醇5ml，超聲提取60min，過(guò)濾，濾液即為白花丹對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取白花丹供試品和白花丹對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為10：5：2的石油醚(30-60℃)-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為5％的三氯化鋁乙醇溶液，在100℃下加熱，置于365nm紫外光燈下檢視；白花丹供試品色譜中，在與白花丹對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

綠包藤的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取綠包藤對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理60min，過(guò)濾，濾液即為綠包藤對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取綠包藤供試品和綠包藤對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比10：2.5的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以密度為12％的磷鉬酸乙醇溶液，在100℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。綠包藤供試品色譜中，在與綠包藤對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

射干薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取射干對(duì)照藥材1g，加甲醇5ml，超聲處理60min，過(guò)濾，濾液即為射干對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取射干供試品和射干對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為2：1：1的三氯甲烷-丁酮-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；射干供試品色譜中，在與射干對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

胡椒的薄層色譜鑒別至少包括以下步驟：

步驟1、取胡椒堿對(duì)照品，加甲醇，制成每1ml甲醇中含5mg胡椒堿對(duì)照品的溶液，即為胡椒堿對(duì)照品溶液；

步驟2、照薄層色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，分別吸取胡椒供試品和胡椒堿對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠gf254薄層板上，以體積比為6：2：1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置于254nm紫外光燈下檢視；胡椒供試品色譜中，在與胡椒堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。