本發(fā)明涉及煙草分析檢驗技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種卷煙爆珠壁材中八種著色劑的液相色譜測定方法。

背景技術(shù)：

隨著人們對食品安全意識的提高，合成著色劑的使用越來越受關(guān)注。著色劑按其來源可分為天然著色劑和人工合成著色劑兩大類。天然著色劑是從一些動植物組織中提取出來的，一般來說對人體是無害的，但其穩(wěn)定性差，著色能力弱，且價格昂貴。人工合成著著色劑是通過人工化學(xué)合成方法所制得的化合物，其著色能力強、色澤鮮艷、不易褪色、穩(wěn)定性好、易溶解、成本低等特點，所以合成著色劑備受青睞。但有研究報告指出，幾乎所有的合成著色劑都不能向人體提供營養(yǎng)物質(zhì)，它們的違規(guī)使用甚至?xí)：θ梭w健康，例如，長期過量攝入莧菜紅會致癌，檸檬黃對dna有一定的誘變性。

爆珠是一種卷煙賦香的創(chuàng)新技術(shù)，在過濾嘴的生產(chǎn)過程中植入一?；蛘叨嗔Ｒ啄笃频南阄赌z囊，實現(xiàn)在卷煙吸食過程中人為可控的特色香味釋放，減少外界環(huán)境對吸味的影響和造成的香精損失，豐富卷煙吸食口味，實現(xiàn)吸食過程的保潤增濕。隨著設(shè)計技術(shù)的逐漸成熟，卷煙爆珠壁材以海藻酸鈉及明膠為基質(zhì)結(jié)合各種著色劑，使得爆珠從單色走向五顏六色。對卷煙爆珠壁材中著色劑的使用情況的檢測，對于保障卷煙產(chǎn)品的安全性是十分有必要的。

目前，國內(nèi)針對食品中合成著色劑的測定已有相關(guān)國家標準，并且已經(jīng)制定食品安全國家標準來規(guī)定各種著色劑的不同種類食品中的限量。針對煙草爆珠壁材中的著色劑未見相關(guān)標準。已有的對著色劑的測定方法包括薄層色譜法、極譜法、分光光度法、毛細管電泳法、hplc法、液相色譜-質(zhì)譜法等，其中hplc對合成著色劑的檢測簡單快速、最小檢出量可達ng水平，該方法已成為著色劑分析測定的主要方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點，提供一種能夠為卷煙安全性提供科學(xué)依據(jù)的卷煙爆珠壁材中八種著色劑的液相色譜測定方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種卷煙爆珠壁材中八種著色劑的液相色譜測定方法，包括以下步驟：

s1、標準溶液配置：分別配置一系列濃度梯度的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅的標準工作溶液；

s2、樣品溶液制備：從煙支濾嘴中取出爆珠，將爆珠擠破用吸油紙吸干香精，稱取一定量用熱水提取，離心后過濾制得待測溶液；

s3、液相色譜分析：采用hplc法對待測液進行分析，色譜柱采用c18色譜柱，采用pda(二極管陣列檢測器)進行檢測，外標法進行定量；流動相為甲醇/乙酸銨水溶液，采用梯度洗脫；

s4、將步驟s1中的標準工作溶液測試結(jié)果繪制成標準曲線，將步驟s3中待測溶液的測試結(jié)果代入標準曲線計算卷煙爆珠壁材中的檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅的含量。

所述的步驟s1的具體操作方法為：準確稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍、赤蘚紅8種著色劑各25mg(精確至0.1mg)于25ml的容量瓶中，用超純水定容，得到濃度為1mg/ml的單一標準儲備液；取各單一標準儲備液0.5ml于10ml容量瓶中混合后，用水稀釋制得著色劑濃度為50μg/ml的混合標準溶液，將混合標準溶液用水稀釋分別制得濃度為0.50μg/ml、1.0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和25μg/ml的著色劑的系列標準工作溶液。

所述的步驟s2的具體操作方法為：從煙支濾嘴中取出爆珠，將爆珠擠破用吸油紙吸干香精，稱取0.1～0.2g爆珠壁材，加入15ml70～80℃的熱水，在恒溫水浴中超聲提取10～20min，取2ml提取液置于離心機中，10000r/min離心5min，用0.45μm的水相濾膜過濾制得待測液。

所述的步驟s3的具體操作方法為：所述的流動相為a為甲醇，流動相b為乙酸銨水溶液(濃度為0.02mol/l)，梯度洗脫程序為：初始a為10％，b為90％；1min時a為10％，b為90％；9min時a為60％，b為40％；10min時a為80％，b為20％；12min時a為80％，b為20％；14min時a為10％，b為90％；20min時a為10％，b為90％；總洗脫時間為20min；

所述pda(二極管陣列檢測器)檢測的波長采用3d全掃描，分別選取各物質(zhì)的最大吸收波長作為定性定量波長，分別為檸檬黃/429nm、莧菜紅/521nm、胭脂紅/512nm、日落黃/487nm、誘惑紅/507nm、亮藍/630nm、酸性紅/561nm、赤蘚紅/531nm。

所述色譜柱的規(guī)格為150mm×4.6mm，5μm，色譜柱溫度為30℃，進樣量為10μl，流速為1.0ml/min。

所述的步驟s4的具體操作方法為：以檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅的濃度(范圍0.50-25.0μg/ml)為橫坐標，hplc分析的著色劑峰面積為縱坐標繪制標準曲線，將樣品峰面積代入標準曲線計算得到著色劑濃度。

進一步的，所述的卷煙爆珠壁材中著色劑的含量按下式計算：

c＝cv/m，

式中，c為卷煙爆珠壁材中著色劑的含量，單位為μg/g；v為用來提取卷煙爆珠壁材的溶劑的體積，單位為ml；c為由標準曲線得到的待測溶液中的被測著色劑的濃度，單位為μg/ml；m為卷煙爆珠壁材的質(zhì)量，單位為g。

所述的八種著色劑為檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

本發(fā)明通過優(yōu)化色譜條件，采用梯度洗脫程序，能將卷煙爆珠壁材中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅8種著色劑快速、準確檢測出來，檢測限為0.03～0.07μg/g，平均回收率為93.20％～104.60％，平均相對標準偏差為1.97％～4.92％，標準曲線目標物在0.5～25μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性良好，方法的平均加標回收率及重復(fù)性良好，為卷煙爆珠壁材中著色劑的快速定量提供檢測依據(jù)。進一步的，本發(fā)明的樣品處理過程簡單、快速，大大節(jié)省了分析時間，便于批量樣品分析。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的測定方法的流程圖；

圖2為本發(fā)明實施例1的標準工作溶液的色譜圖；其中，圖中1為檸檬黃，2為莧菜紅，3為胭脂紅，4為日落黃，5為誘惑紅，6為亮藍，7為酸性紅，8為赤蘚紅；

圖3為本發(fā)明實施例1中sample03的卷煙爆珠壁材樣品(明膠基質(zhì))hplc色譜圖。

圖4為本發(fā)明實施例3中sample07的卷煙爆珠壁材樣品(海藻酸鈉基質(zhì))hplc色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明做進一步的描述：

實施例1：

一種卷煙爆珠壁材中八種著色劑的液相色譜測定方法，包括如下步驟：

s1、標準溶液配制：準確稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅8種著色劑各25mg(精確至0.1mg)于25ml的容量瓶中，用超純水定容，得到濃度為1mg/ml的單一標準儲備液(2～8℃存6個月)；取各單一標準儲備液0.5ml于10ml容量瓶中混合后，用水稀釋制得著色劑濃度為50μg/ml的混合標準溶液(2～8℃存6個月)，準確移取0.1ml、0.2ml、1ml、2ml、5ml的混合標準溶液分別到10ml的容量瓶中，將混合標準溶液用水稀釋分別制得濃度為0.50μg/ml、1.0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和25μg/ml的著色劑的系列標準工作溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。

s2、樣品溶液制備：如圖1所示，取20支卷煙，取出濾嘴中爆珠，爆珠為明膠基質(zhì)，將其擠破后用吸油紙將內(nèi)含的香精吸干得壁材樣品；稱取0.15g爆珠壁材，加入15ml70～80℃的熱水，在恒溫水浴中超聲提取10min，取2ml提取液10000r/min離心5min后，用0.45μm的水相濾膜過濾制得待測液。

s3、將步驟s1、s2中制得的著色劑系列標準工作溶液、待測液采用hplc法進行分析，色譜柱為c18柱(規(guī)格為150mm×4.6mm，5μm)，溫度為30℃，進樣量為10μl，流速為1.0ml/min；pda(二極管陣列檢測器)設(shè)置為3d全掃描；流動相為a為甲醇，b為乙酸銨水溶液(濃度為0.02mol/l)，采用梯度洗脫程序(見表1)；標準工作溶液的色譜圖如圖2所示；

表1梯度洗脫程序

以各著色劑的濃度(μg/ml)為橫坐標，對應(yīng)的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，然后進行回歸分析得到上述8中著色劑對應(yīng)的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)，將最低濃度的標準溶液連續(xù)測定6次，3倍標準偏差(s/n＝3)作為檢出限，10倍標準偏差(s/n＝10)作為定量限，8種著色劑的檢測限為0.03～0.07μg/g，定量限為0.10～0.23μg/g，具體如表2所示：

表2標準曲線和檢測限

根據(jù)標準曲線可以看出，目標物在0.5～25μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性良好；

s4、采用外標法定量，選取各物質(zhì)的最大吸收波長作為定性定量波長，分別為檸檬黃/429nm、莧菜紅/521nm、胭脂紅/512nm、日落黃/487nm、誘惑紅/507nm、亮藍/630nm、酸性紅/561nm、赤蘚紅/531nm。

根據(jù)待測液的分析結(jié)果及標準曲線，按照如下公式計算卷煙爆珠壁材試樣中著色劑的含量：

c＝15c/1000m，

式中，c為卷煙爆珠壁材試樣中著色劑的含量，單位為mg/g；c為由標準曲線得到的待測溶液中的被測著色劑的濃度，單位為μg/ml；m為卷煙爆珠壁材試樣的質(zhì)量，單位為g。本實施例4個樣品分析結(jié)果為sample01中檸檬黃2.43mg/g，sample02中亮藍2.31mg/g，sample03中檸檬黃2.32mg/g、誘惑紅2.85mg/g(樣品色譜圖見圖3)，sample04中檸檬黃1.13mg/g、誘惑紅0.51mg/g、亮藍4.06mg/g。

實施例2

本實施例的卷煙爆珠壁材中8種著色劑的hplc測試方法，包括如下步驟：

s1、標準溶液配置及樣品處理同實施例1；

s2、準確稱取樣品sample04進行加標回收實驗，測定6次，色譜條件及計算同實施例1。計算得檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅8種著色劑的平均加標回收率及平均相對標準偏差(rsd)如表2，平均回收率為93.20％～104.60％，平均相對標準偏差為1.97％～4.92％，說明該方法的平均加標回收率及重復(fù)性良好。

表3樣品加標回收率

實施例3

本實施例的卷煙爆珠壁材中8種著色劑的hplc測試方法，包括如下步驟：

s1、標準溶液配置同實施例1；

s2、樣品溶液制備：取20支卷煙，取出濾嘴中爆珠，爆珠為海藻酸鈉基質(zhì)，將其擠破后用吸油紙將內(nèi)含的香精吸干得壁材樣品；稱取0.15g爆珠壁材，加入15ml70～80℃的熱水，在恒溫水浴中超聲提取20min，取2ml提取液10000r/min離心5min后，用0.45μm的水相濾膜過濾制得待測液。

s3、結(jié)果計算同實施例1。本實施例4個樣品分析結(jié)果為sample05中檸檬黃1.46mg/g，sample06中亮藍4.40mg/g，sample07中檸檬黃2.11mg/g、胭脂紅2.40mg/g、亮藍1.08mg/g(樣品色譜圖見圖4)，sample08中檸檬黃1.90mg/g、亮藍2.66mg/g。

以上所述，僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)，因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所限定的保護范圍為準。