本發(fā)明涉及對(duì)液體試樣中包含的目標(biāo)化合物進(jìn)行質(zhì)譜分析的方法。

背景技術(shù)：

1、為了分析液體試樣中包含的目標(biāo)化合物，使用了液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用裝置。在液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用裝置中，通過(guò)液相色譜儀的柱將液體試樣中包含的各種化合物分離并導(dǎo)入到質(zhì)譜分析裝置中。在質(zhì)譜分析裝置中，使從液相色譜儀導(dǎo)入的化合物進(jìn)行離子化，并根據(jù)質(zhì)荷比將這些離子分離，按每個(gè)質(zhì)荷比測(cè)定離子的強(qiáng)度。

2、在對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行定量時(shí)，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(mrm：multiple?reactionmonitoring)測(cè)定。在mrm測(cè)定中，從自液體試樣生成的離子中篩選具有對(duì)目標(biāo)化合物而言有特征性的質(zhì)荷比的離子來(lái)作為前體離子，并且從源自該前體離子的產(chǎn)物離子中篩選具有特定的質(zhì)荷比的產(chǎn)物離子并測(cè)定其強(qiáng)度。在mrm測(cè)定中，通過(guò)前體離子的篩選和產(chǎn)物離子的篩選這兩個(gè)階段，鎖定具有對(duì)目標(biāo)化合物而言有特征性的特定的質(zhì)荷比的離子，因此，即使在液體試樣中包含用于生成具有與目標(biāo)化合物的前體離子的質(zhì)荷比相同的質(zhì)荷比的離子的摻雜物那樣的情況下，也能夠不受其影響地準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行定量。另外，mrm測(cè)定由于靈敏度高，因此特別用于對(duì)試樣中包含的微量的目標(biāo)化合物進(jìn)行定量。

3、作為使液體試樣進(jìn)行離子化的代表性的離子化法，已知有電噴霧離子化(esi：electrospray?ionization)法。若利用esi法(正模式)使化合物進(jìn)行離子化，則通常大量生成氫離子(質(zhì)子)加成到該化合物而得到的質(zhì)子加成離子。因此，在mrm測(cè)定中，較多使用質(zhì)子加成離子來(lái)作為前體離子。

4、但是，若使有機(jī)高分子化合物等具有復(fù)雜的分子構(gòu)造的化合物進(jìn)行離子化，則有時(shí)生成除質(zhì)子加成離子以外的各種離子。這樣的離子例如存在脫水離子、或者溶劑加成離子、銨加成離子、鈉加成離子、鉀加成離子等加合離子。例如，銨加成離子是通過(guò)在分析中使用的流動(dòng)相中包含的銨離子加成到化合物來(lái)生成的，或者是通過(guò)源自在過(guò)去的分析中使用的流動(dòng)相或溶劑中包含的殘留于質(zhì)譜分析裝置的內(nèi)部的甲酸銨或乙酸銨等揮發(fā)性鹽的銨離子加成到化合物來(lái)生成的。

5、在非專利文獻(xiàn)1中，示出了使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用裝置對(duì)包含極微量(1ng/ml)的已知為魚類毒素的雪卡毒素(ciguatoxin)類的液體試樣進(jìn)行mrm測(cè)定而得到的結(jié)果。在該mrm測(cè)定中，使用鈉加成離子來(lái)作為前體離子。在非專利文獻(xiàn)1中用作流動(dòng)相的溶液中不包含鈉。另外，被報(bào)告了多個(gè)即使在過(guò)去使用的流動(dòng)相或溶劑中不包含鈉或鉀的情況下也會(huì)生成鈉加成離子或鉀加成離子的情況。因此，估計(jì)為這些離子源自收容有液體試樣或流動(dòng)相的玻璃容器、或構(gòu)成esi探針的玻璃毛細(xì)管等。

6、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

7、非專利文獻(xiàn)

8、非專利文獻(xiàn)1：kentaro?yogi?et?al.,“detailed?lc-ms/ms?analysis?ofciguatoxins?revealing?distinct?regional?and?species?characteristics?in?fishand?causative?alga?from?the?pacific”,anal.chem.,2011,83,8886-8891

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的問(wèn)題

2、過(guò)去使用的流動(dòng)相或溶劑殘留于質(zhì)譜分析裝置的量是不確定的，從而無(wú)法調(diào)整源自其的銨離子加成到目標(biāo)化合物的量。另外，鈉離子和鉀離子源自收容有流動(dòng)相或液體試樣的玻璃容器等，也無(wú)法調(diào)整這些離子加成到目標(biāo)化合物的量。因此，在將這些離子加成到目標(biāo)化合物而得到的加合離子作為前體離子的mrm測(cè)定中，存在測(cè)定的再現(xiàn)性差而難以準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行定量這一問(wèn)題。另外，當(dāng)從目標(biāo)化合物生成多種離子時(shí)，無(wú)論將其中哪一種篩選為前體離子，與僅生成一種離子的情況相比，前體離子的量都少且測(cè)定靈敏度都差。如上所述，mrm測(cè)定由于用于對(duì)試樣中包含的微量的目標(biāo)化合物進(jìn)行定量，因此存在如果測(cè)定靈敏度差則無(wú)法檢測(cè)目標(biāo)化合物這一問(wèn)題。

3、在此，以mrm測(cè)定的情況為例進(jìn)行了說(shuō)明，但在測(cè)定特定的質(zhì)荷比的離子的選擇離子監(jiān)測(cè)(sim：selected?ion?monitoring)測(cè)定、以及與mrm測(cè)定同樣地篩選前體離子的ms/ms掃描測(cè)定中也存在上述同樣的問(wèn)題。

4、本發(fā)明要解決的問(wèn)題在于提供一種能夠靈敏度高且準(zhǔn)確地對(duì)液體試樣中包含的目標(biāo)化合物進(jìn)行定量的質(zhì)譜分析方法。

5、用于解決問(wèn)題的方案

6、為了解決上述問(wèn)題而完成的本發(fā)明所涉及的質(zhì)譜分析方法，包括：制備步驟，向液體試樣中添加規(guī)定的堿金屬離子；離子化步驟，使添加了所述堿金屬離子的液體試樣中包含的目標(biāo)化合物進(jìn)行離子化；以及測(cè)定步驟，測(cè)定在所述離子化步驟中生成的、所述規(guī)定的堿金屬加成到所述目標(biāo)化合物而得到的加合離子或者源自該加合離子的離子的強(qiáng)度。

7、發(fā)明的效果

8、在本發(fā)明所涉及的質(zhì)譜分析方法中，在進(jìn)行質(zhì)譜分析之前執(zhí)行制備步驟，預(yù)先向液體試樣中添加規(guī)定的堿金屬離子。規(guī)定的堿金屬離子的添加既可以通過(guò)添加該離子本身(例如添加包含該離子的液體)來(lái)進(jìn)行，也可以通過(guò)使堿金屬的鹽溶解于液體試樣來(lái)進(jìn)行。另外，在如后述的實(shí)施例那樣使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用裝置的情況下，也可以向流動(dòng)相中添加堿金屬離子。

9、當(dāng)在將規(guī)定的堿金屬離子供給到液體試樣的狀態(tài)下執(zhí)行離子化步驟時(shí)，主要生成加成該堿金屬離子而得到的規(guī)定的堿金屬加成離子，抑制除此以外的種類的加合離子的生成。另外，堿金屬離子大多是難以裂解的離子，因此也抑制脫水離子和溶劑加成離子的生成。

10、在本發(fā)明所涉及的質(zhì)譜分析裝置中，測(cè)定在離子化步驟中生成的、所述規(guī)定的堿金屬加成到所述目標(biāo)化合物而得到的加合離子或者源自該加合離子的離子的強(qiáng)度。因此，與測(cè)定起因于從液體試樣或試樣容器生成的離子而從目標(biāo)化合物生成的多種離子中的一種離子的情況相比，測(cè)定的離子的量多，能夠以高靈敏度測(cè)定目標(biāo)化合物。另外，生成堿金屬加成離子的機(jī)構(gòu)存在再現(xiàn)性，因此能夠準(zhǔn)確地分析目標(biāo)化合物。

技術(shù)特征：

1.一種質(zhì)譜分析方法，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜分析方法，其中，

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的質(zhì)譜分析方法，其中，

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜分析方法，其中，

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜分析方法，其中，

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜分析方法，其中，

技術(shù)總結(jié)
一種質(zhì)譜分析方法，包括：制備步驟(步驟1)，向液體試樣中添加規(guī)定的堿金屬離子；離子化步驟(步驟3)，使添加了所述堿金屬離子的液體試樣中包含的目標(biāo)化合物進(jìn)行離子化；以及測(cè)定步驟(步驟7)，測(cè)定在所述離子化步驟中生成的、所述規(guī)定的堿金屬加成到所述目標(biāo)化合物而得到的加合離子或者源自該加合離子的產(chǎn)物離子的強(qiáng)度。

技術(shù)研發(fā)人員：小林真奈美
受保護(hù)的技術(shù)使用者：株式會(huì)社島津制作所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19