本發(fā)明屬于物種鑒別及中藥材真?zhèn)舞b別，具體涉及化合物ra-xi在鑒別或輔助鑒別茜草類別或真?zhèn)沃械膽?yīng)用及鑒別方法。

背景技術(shù)：

1、茜草是我國的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，原名“茜根”，在《名醫(yī)別錄》、《本草綱目》等著作中均有記載；茜草性狀描述為根莖呈結(jié)節(jié)狀，根叢生，粗細(xì)不等：根呈圓柱形，略彎曲，長10-25cm，直徑0.2-1cm，表面紅棕色或暗棕色，具細(xì)縱皺紋及少數(shù)細(xì)根痕，皮部脫落處呈黃紅色；質(zhì)脆，易折斷，斷面平坦，皮部狹，紫紅色，木部寬廣，淺黃紅色，導(dǎo)管孔多數(shù)；茜草味苦，性寒、歸肝經(jīng)，具有涼血，祛瘀，止血，通經(jīng)；用于吐血，衄血，崩漏，外傷出血，瘀阻經(jīng)閉，關(guān)節(jié)痹痛，跌撲腫痛。經(jīng)過調(diào)查收集，中國目前有茜草屬植物42種，其中特有種23種，藥用18種。例如四川中藥材標(biāo)準(zhǔn)1987年版就已收載的大葉茜草，亦名茜草，作為四川地方習(xí)用品一直在使用；大葉茜草來源于茜草科植物大葉茜草rubiasehumannianapritz.的干燥根莖，主產(chǎn)于我國西南地區(qū)，別名川茜草、西南茜草。具有止血化瘀、消炎解毒的功效，用于血熱引起的各種出血，便血，尿血，月經(jīng)過多，蛇傷等癥。大茜草為茜草科植物大茜草rubiamagna?hsiao-mazz.的根及根莖，分布于四川等地，因其含有大葉茜草素、羥基茜草素、大黃酚等成分，且大葉茜草素含量較高。

2、茜草屬植物均以干燥根和根莖入藥，性狀較為相似，僅通過判斷性狀，難以區(qū)別各藥物。且近年來由于野生資源逐漸減少甚至瀕危，而茜草多以野生為主，栽培產(chǎn)量低，市場上供不應(yīng)求，而且茜草野生資源開采后較難恢復(fù)，故市場價格逐年升高。利益驅(qū)使下部分企業(yè)為降低生產(chǎn)成本，多以大葉茜草和大茜草等摻入茜草使用，擾亂了市場秩序，不利于中藥行業(yè)的健康發(fā)展，對藥品監(jiān)管也是一種挑戰(zhàn)。大茜草在歷代本草記載中無藥用歷史，在國家和地方標(biāo)準(zhǔn)或炮制規(guī)范也未收載，此冒充或摻入茜草使用會造成臨床藥用安全風(fēng)險；大葉茜草收載于四川省和重慶直轄市地方標(biāo)準(zhǔn)和炮制規(guī)范，屬于地方習(xí)用藥材，但在《中國藥典》中未收載，混淆使用或摻入使用可能會降低臨床藥效。2020版《中國藥典》以大葉茜草素(mollugin)和羥基茜草素(purpurin)作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)成分，按干燥品計算，藥材中大葉茜草素(c17h15o4)含量不得少于0.40％，羥基茜草素(c14h8o5)含量不得少于0.10％，飲片中含大葉茜草素不得少于0.20％，羥基茜草素不得少于0.080％。但實際上，茜草、大葉茜草和大茜草中均含有上述成分，無法僅通過測定藥物中的大葉茜草素和羥基茜草素鑒別茜草、大葉茜草和大茜草。因此，如何準(zhǔn)確的鑒別茜草中是否含有大葉茜草和大茜草成為本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

3、除了形狀鑒別，現(xiàn)有的可用于植物性藥材鑒別的方法包括兩種，即指紋圖譜鑒別和標(biāo)志物鑒別。指紋圖譜鑒別是建立在中藥材化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，可用于評價中藥材質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。而標(biāo)志物鑒別是需要篩選出該類或該種藥材與其他藥材的一種或幾種區(qū)別成分，將一種或幾種區(qū)別成分的存在或者濃度范圍作為鑒別的基礎(chǔ)，例如，發(fā)明專利cn117250284a公開了一種快速鑒別多種硫熏中藥材的標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)2-磺基色氨酸可作為硫熏標(biāo)志物用于鑒別硫熏中藥材，所述的中藥材為麥冬、貝母、魚腥草、知母或百合。發(fā)明專利cn116973470a公開了利用脂肪酸標(biāo)志物鑒別中藥海藻的方法，其通過測定c20:1n-9/c16:1n-7的比值來鑒別中藥海藻的真?zhèn)?，為中藥海藻真?zhèn)舞b別方法的制定提供了參考。但是，目前并沒有任何文獻公開可用于鑒別茜草、大葉茜草和大茜草的標(biāo)志物。

4、發(fā)明人在研究過程中意外的發(fā)現(xiàn)，大葉茜草和大茜草含有大量的化合物ra-xi，而茜草中含有化合物ra-xi含量極低，發(fā)明人使用uplc-ms/ms方法，通過測定茜草與大茜草、大葉茜草中的ra-xi含量，便可鑒別茜草中是否摻有大茜草、大葉茜草，并建立了相關(guān)的鑒別方法，且該方法專屬性好，基質(zhì)效應(yīng)影響不大，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，以摻偽3％大茜草中ra-xi的濃度10ng/ml為判定標(biāo)準(zhǔn)，即樣品的峰面積高于10ng/ml的對照品ra-xi峰面積視為檢出，可以作為鑒別茜草、大葉茜草和大茜草的鑒別方法，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的首要目的是提供化合物ra-xi在如下a1)-a7)任一種中的應(yīng)用；

2、a1)在鑒別或輔助鑒別茜草、大茜草及大葉茜草中的應(yīng)用；

3、a2)在制備鑒別或輔助鑒別茜草、大茜草及大葉茜草的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

4、a3)在鑒別或輔助鑒別大茜草和大葉茜草中的應(yīng)用；

5、a4)在制備鑒別或輔助鑒別大茜草和大葉茜草的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

6、a5)在鑒別或輔助鑒別待測樣本中是否含有大茜草及大葉茜草中的應(yīng)用；

7、a6)在制備鑒別或輔助鑒別待測樣本中是否含有大茜草及大葉茜草的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

8、a7)在制備鑒別或輔助鑒別茜草是否摻偽大茜草及大葉茜草中的應(yīng)用；

9、所述的化合物ra-xi的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(ⅰ)所示：

10、

11、????????????

12、本發(fā)明的第二目的是提供一種中藥材茜草的鑒別方法，通過對待測茜草或待測產(chǎn)品中的標(biāo)識化合物ra-xi的含量進行檢測，進行茜草種類鑒別或茜草真?zhèn)舞b別，所述的化合物ra-xi的化學(xué)式如式(ⅰ)所示：

13、

14、優(yōu)選的，具體包括如下步驟：

15、(1)對照品溶液的制備

16、取化合物ra-xi加甲醇制備對照品溶液；

17、(2)供試品溶液的制備

18、取供試品，使用50％乙醇溶液配置供試品溶液；

19、(3)檢測

20、分別取步驟(1)制備的對照品溶液和步驟(2)制備得到的供試品溶液，注入色譜儀和質(zhì)譜儀中進行檢測，其中，色譜的條件包括：

21、色譜柱：c18柱；

22、流動相：甲醇-0.1％甲酸溶液、乙腈-0.1％甲酸溶液、乙腈-水或甲醇-水中的任一種；

23、流速：0.3ml/min；

24、柱溫：25～55℃；

25、進樣量：1～3μl；

26、梯度洗脫。

27、優(yōu)選的，所述的梯度洗脫程序如下：

28、

29、

30、優(yōu)選的，所述的流動相為乙腈-水。

31、優(yōu)選的，采用質(zhì)譜檢測器，選擇ra-xi質(zhì)荷比m/z?815.3→297.2和m/z?815.3→525.2為監(jiān)測離子對。

32、判定原則：

33、1)供試品的提取離子流色譜中，未同時出現(xiàn)與對照品溶液色譜相應(yīng)的色譜峰，視為未檢出；

34、2)供試品的提取離子流色譜中，同時出現(xiàn)與對照品溶液色譜相應(yīng)的色譜峰，且供試品色譜中m/z?815.3→525.2的色譜峰面積值不大于對照品溶液中相應(yīng)的峰面積值者，視為未檢出；

35、3)供試品的提取離子流色譜中，同時出現(xiàn)與對照品溶液色譜相應(yīng)的色譜峰，且供試品色譜中m/z?815.3→525.2的色譜峰面積值大于對照品溶液中相應(yīng)的峰面積值者，視為檢出。

36、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了化合物ra-xi在鑒別或輔助鑒別茜草、大茜草及大葉茜草中的應(yīng)用，并具體提供了鑒別方法，發(fā)明人使用uplc-ms/ms方法，通過測定茜草與大茜草、大葉茜草中的ra-xi含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同種茜草中均含有ra-xi，但大茜草、大葉茜草中該化合物含量均高于茜草含量，大茜草中ra-xi含量高于茜草中ra-xi的含量四百多倍，大葉茜草中ra-xi含量高于茜草中ra-xi的含量兩千多倍。其中以ra-xi特征離子平均峰面積計約為茜草中ra-xi特征離子平均峰面積的400～2000倍，專屬性好；使用上述方法鑒別茜草、大茜草及大葉茜草，基質(zhì)效應(yīng)影響不大，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，檢出限為1％，可以作為鑒別茜草、大葉茜草和大茜草的鑒別方法，具有廣闊的應(yīng)用前景。